毛珊珊
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
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- HPV58型E6蛋白B细胞表位预测与分析
- 2018年
- 目的:预测分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)58型E6蛋白的B细胞线性表位及其结构。方法:从瑞士生物信息研究所提供的Swissprot蛋白质数据库中检索到E6蛋白序列,采用计算机辅助生物信息学软件进行分析,用Expasy服务器在线软件分析预测E6蛋白的理化性质、二级结构及三维空间结构,采用DNASTAR软件包中的protean软件进一步分析亲水性、柔韧性、表面可及性、抗原性与极性等特性,再结合氨基酸抗原指数(AI)计算法算出平均AI,根据AI大小预测HPV58型E6蛋白的B细胞线性表位的可能肽段,并进行同源性匹配分析。结果:HPV58型E6蛋白的B细胞线性表位可能位于以下肽段位置:N端8~15(KPRTLHDL)、27~44(ELKCVECKKTLQRSEVYD)、108~127(RPLCPQEKKRHVDLNKRFHN)、141~147(RPRRRQT)肽段及其周围。同源性分析得出肽段27~44、141~147为可能的B细胞线性表位,为HPV58型E6蛋白B细胞表位的独特序列,肽段8~15与HPV33型E6蛋白同源性匹配为100%,108~127与HPV33型E6、HPV9型E6蛋白同源性匹配为100%。结论:27~44、141~147肽段为可能的HPV58型E6蛋白的B细胞优势表位。
- 叶晓鲜毛珊珊宋易玲王路得蒋朋飞朱珊丽张丽芳
- 关键词：E6蛋白B细胞表位预测生物信息学分析
- EB病毒潜伏膜蛋白2B表位特异性兔血清抗体的制备和鉴定
- 2016年
- 目的制备EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)串联B表位特异的兔血清多克隆抗体。方法利用分子克隆技术,将已鉴定的EBV LMP2蛋白的3个B细胞表位,即RIEDPPFNSLL,TLNLT和KSLSSTEFIPN,以柔性肽(GS)加以串联连接,经原核密码子优化后全基因合成,并经BamHⅠ和HindⅢ酶切位点克隆至pET32a(+)载体,测序鉴定正确的重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),用异丙基硫代-B-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE分析和Western blot鉴定。用镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化表达产物,与佐剂乳化后皮下多点注射日本大耳白兔,隔周免疫1次,共3次。分别于免疫的0、2、4、6、8周取血,采用ELISA方法检测IgG抗体水平,采用Western blot和细胞免疫荧光法检测兔血清抗体的免疫反应性和结合特异性。结果 EBV LMP2B表位重组蛋白可通过原核表达系统进行表达,纯化的表达蛋白免疫兔可产生特异性IgG抗体,效价达1∶30 000。经Western blot法和细胞免疫荧光法鉴定,制备的兔血清抗体可识别LMP2重组蛋白和LMP2天然蛋白。结论成功获得了EBV LMP2串联B表位重组蛋白,制备的兔多克隆血清抗体效价高,特异性强,为LMP2的生物学和免疫学研究奠定了基础。
- 张婵琼宋易玲岑丹维蔡一奇叶晓鲜毛珊珊蒋朋飞李文姝张丽芳
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白2原核表达抗体制备
- 人乳头瘤病毒58型L1蛋白B细胞表位预测和分析被引量：7
- 2017年
- 目的对人乳头瘤病毒58型(HPV58)主要结构蛋白(L1)的B细胞表位进行预测和分析。方法利用生物信息学软件EXPASY在线分析HPV58型L1蛋白的二级结构及生物学特性,包括跨膜趋势、表面可及性、抗原性、亲水性,溶性等,从而对其B细胞表位进行综合分析和预测。结果通过亲水性参数,Zimmcrman极性,柔韧性参数,表面可及性及抗原性进行综合分析,预测人乳头瘤病毒58型L1蛋白的B细胞表位可能位于其N端的29-37,43,46-58,64-67,74,79-88,93,100-101,103-125,133-139,149,151-180,187-213,220-213,235,238-247,252-271,277-282,286-309,320-323,327-338,341-348,351,353-368,373-396,408,427,419-425,433-444,453-468,470,475-486,488-490,493-494,497-524肽段区域;进一步用Protien Plast在线同源匹配分析,79-88、190-216、373-396、453-468、497-524肽段区段为可能的B细胞表位。结论用多参数预测分析HPV58型L1蛋白可能的B细胞表位,为进一步研究高危型58型L1蛋白的生物学特性提供了理论基础。
- 宋易玲叶晓鲜毛珊珊岑丹维张婵琼蒋朋飞张丽芳
- 关键词：B细胞表位L1蛋白
- 绿脓杆菌外毒素PE38KDEL重组蛋白原核表达及多克隆抗体的制备
- 2017年
- 目的:通过原核表达系统制备绿脓杆菌外毒素(PE)PE38KDEL重组蛋白,并制备特异性兔免疫血清多克隆抗体。方法:选择PE部分基因(PE38),并将C端609-613位的氨基酸REDLK突变为KDEL,通过原核密码子优化(http://www.jcat.de)后全基因合成,经Hind III和Xho I酶切位点克隆至p ET32a(+)原核表达载体,构建p ET32a(+)/PE38KDEL重组质粒,将测序正确的重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)感受态细菌中,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组PE38KDEL蛋白,经Ni-NTA亲和层析法制备纯化蛋白,采用SDS-PAGE电泳和Western blot法进行鉴定。进一步将PE38KDEL纯化蛋白免疫日本大耳白兔制备PE38KDEL特异性多克隆抗体,并采集免疫前后血清,用ELISA法检测免疫后的抗体反应和效价。结果:成功构建了p ET32a(+)/PE38KDEL重组质粒。在原核表达系统中该质粒成功表达并获得纯化的PE38KDEL蛋白。SDSPAGE电泳显示蛋白分子质量约为57 k Da,与预计理论值大小相符合。Western blot法检测结果显示,在分子质量约57 k Da处出现单一条带。通过免疫大耳白兔成功获得PE38KDEL特异性多克隆抗体,抗体效价高达1:60 000。结论:PE38KDEL蛋白可诱导兔产生特异性多克隆血清抗体,且该抗体效价高、特异性强,为进一步研究基于PE38KDEL毒素的生物学和免疫学等功能奠定了基础。
- 岑丹维宋易玲张婵琼毛珊珊叶晓鲜陈俊陈韶朱珊丽张丽芳
- 关键词：铜绿假单胞菌PE38KDEL多克隆抗体
- EB病毒LMP1 C端重组蛋白多克隆抗体的制备和鉴定
- 2018年
- 目的:制备EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP1)C端(187～386)的原核表达蛋白及其多克隆抗体并检验其生物学特性。方法:选择LMP1C端的基因并进行原核密码子优化,全基因合成pET21a(+)/EBVLMP1C端重组质粒,并转入E.coliBL21(DE3)感受态细菌进行诱导表达重组蛋白,利用His标签提取纯化重组蛋白并经SDS-PAGE及Westernblot分析鉴定。将纯化的LMP1C端重组蛋白免疫日本大耳白兔,获得多克隆抗体,分别采用ELISA、Westernblot及免疫荧光方法对兔多克隆抗体进行分析。结果:EBVLMP1C端(187～386)重组蛋白可经原核表达系统表达;通过免疫兔获得了特异性的多克隆Ig G抗体;制备的兔多克隆抗体可特异性结合并识别LMP1C端蛋白。结论:EBVLMP1C端重组蛋白免疫原性较强,制备的兔多克隆抗体效价高、特异性强。
- 毛珊珊王路得周萌吕开绩朱进顺Kamara Saidu叶晓鲜张丽芳
- 关键词：EB病毒多克隆抗体
