目的探讨NF-κB与放射线诱导的人食管癌细胞上皮间质转化(EMT)间的关系。方法累积照射食管癌Eca109细胞60 Gy,得到Eca109R60细胞,克隆形成实验检测其放射抵抗性,显微镜下观察细胞形态学变化。Real-time PCR和免疫细胞化学检测Eca109和Eca109R60细胞NF-κB、E-cadherin和Vimentin的表达情况。结果 Eca109R60细胞具备了EMT样表型且放射抵抗性更强。Eca109R60细胞中E-cadherin m RNA表达明显下调(P=0.003),Vimentin、NF-κB m RNA表达升高(P=0.004,P=0.004)。相关性分析显示NF-κB与E-cadherin m RNA表达呈负相关,与Vimentin未见有明显相关性,但已显示出正相关的趋势。免疫细胞化学法检测Eca109R60细胞E-cadherin阳性染色程度明显减弱,Vimentin、NF-κB p65阳性染色程度明显增强。结论 Eca109R60细胞放射抗性可能由EMT与NF-κB信号通路相互作用调控。
目的探讨射线反复照射方法建立食管癌放射抗性细胞系的重复性及稳定性,并观察辐射抗性细胞与其亲代细胞之间的放射敏感性的差异。方法应用射线对人食管鳞状细胞癌细胞TE13进行反复照射,累计剂量120 Gy,建立具有放射抗性的细胞系TE13R120。采用细胞克隆形成实验测定2种细胞的放射生物学参数,检测其辐射抗性,采用单击多靶模型拟合存活曲线。经连续8 d培养细胞,绘制2种细胞的生长曲线并用Logrank检验计算群体倍增时间。比较此次实验结果与初次建系时结果的相似性。结果接受120 Gy总剂量照射后,TE13R120较TE13表现出明显的放射抗性,TE13R120的放射生物学参数D_0、Dq、N均高于TE13(2.36、2.17、2.50 vs 1.90、1.11、1.80),SF_2、α/β均低于TE13(0.53、2.67 vs 0.73、8.00)。TE13R120的细胞群体倍增时间为20.70 h,长于亲代TE13(17.67 h)。该结果与此前初次建系时结果相似。结论应用射线反复照射并逐步筛选建立辐射抗性细胞系的方法可靠,能建立具有稳定辐射抗性表型的细胞系。
