郭晓丹
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：河南农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河南省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 含正确木聚糖酶基因转化子的活性筛选被引量：1
- 2010年
- 为有效地筛选到带有正确基因的转化子,探讨了活性筛选方法。将木聚糖酶基因与pET20b重组,转化BL21(DE3)大肠杆菌,选取转化子,放入0.5mLLB培养基过夜培养,补加9.5mL培养基2.5h后诱导,收集并冻融裂解细胞,检测酶活性。通过对10个转化子的筛选,其中7个转化子酶活性接近或高于阳性对照菌落,认定为阳性转化子,经DNA测序证明基因序列正确。这个过程只要2～3天,具有快速简便特点。与以往筛选方法中针对转化子中的基因不同,作者直接检测转化子酶活性,筛掉不能表达活性酶的突变基因;其次,用冻融裂解细胞方法简化裂解过程,便于自动化高通量操作;最后,通过比较初筛酶活性,可以筛选高酶活转化子。
- 刘亮伟李运峰郭晓丹
- 关键词：转化子活性检测木聚糖酶
- 载体大小对木聚糖酶过量表达的影响被引量：2
- 2010年
- 将黑曲霉Aspergillus niger木聚糖酶基因与表达载体pET21a(5 443 bp)和pET20b(3 716 bp)重组,而后转化E.coliBL21(DE3)细胞,发现大载体细胞和小载体细胞中质粒DNA浓度为(4.6±0.01),(5.5±0.01)g.L-1,木聚糖酶含量为(57.2±10.6),(140.2±22.1)mg.L-1,木聚糖酶酶活性为(6.6±0.2),(69.6±11.2)U.mL-1.相对于大载体细胞,小载体细胞质粒浓度增加19.5%,木聚糖酶含量增加1.45倍,木聚糖酶活性增加9.5倍,说明载体大小对外源蛋白表达的影响效应呈递增趋势.由此可见,小型载体在表达外源蛋白时更利于减少宿主细胞的负担,利于质粒扩增并提高基因拷贝数,最后提高木聚糖酶含量及活性.
- 刘亮伟郭晓丹王宝
