尹东
- 作品数：7 被引量：39H指数：4
- 供职机构：江西省分子医学重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丝/苏氨酸激酶Pim-3基因对急性肝功能衰竭肝保护效应的实验研究被引量：8
- 2006年
- 急性肝功能衰竭（ALF）是常见的临床急重病症，缺乏特殊有效的治疗药物，现基因治疗成为该病治疗研究的热点。作为丝/芬氨酸激酶Pim家族的重要成员，Pim-3基因在细胞生长通路中起重要作用，已知Pim-3基因在损伤周围组织和增殖活跃的肝组织内均出现极高水平的表达。这提示Pim-3基因可能在损伤肝组织的修复中扮演重要角色。
- 刘亮明邓欢张吉翔罗杰孙水林尹东
- 关键词：急性肝功能衰竭激酶氨酸治疗药物急重病症
- 人剪切修复基因XPD对肝癌细胞生长的抑制作用被引量：7
- 2009年
- 目的探讨野生型人剪切修复基因着色性干皮病基因D(xeroderma pigmentosum D,XPD)对肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,并探讨其机制。方法用脂质体转染法瞬时转染SMMC-7721细胞,转染重组质粒XPD-N2和空载质粒N2,并用未转染的与XPD-N2、N2具有相同遗传背景和代数的SMMC-7721细胞作为空白对照。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,流式细胞仪检测细胞周期,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测细胞中XPD、c-myc、cdc25A、cdK2表达量变化,MTT法观察细胞增殖的活力。结果提取出的重组质粒pEGFP-N2-XPD用酶切鉴定,与Genebank上的相符。在荧光显微镜下,可以在SMMC-7721-pEGFP-N2、SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞中观察到绿色荧光蛋白的表达,质粒的转染效率为30%左右。流式细胞仪结果显示,pEGFP-N2-XPD重组质粒转染入细胞后,肝癌细胞进入S期发生阻滞,停滞在G1期。RT-PCR、Western blot检测发现SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞与SMMC-7721-pEGFP-N2和SMMC-7721两对照组相比,其XPD表达明显增高(P<0.05)。c-myc、cdc25A、cdK2相对表达量明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与两对照组相比,SMMC-7721-pEGFP-N2-XPD细胞增殖率明显减弱(P<0.05)。结论野生型XPD基因可以在转录和翻译水平抑制SMMC-7721细胞内c-myc、cdc25A、cdK2的表达。而且野生型XPD基因通过抑制cdK2的表达作用于S期DNA损伤检控点,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。
- 黄神安徐江晶张吉翔熊瑛尹东李军
- 关键词：肝癌XPDC-MYCCDC25ACDK2
- 鼠尾静脉流体力学转染技术对绿色荧光蛋白表达质粒器官靶向分布的影响被引量：7
- 2007年
- 目的:观察流体力学尾静脉注射对绿色荧光蛋白基因器官靶向性的影响,为今后质粒载体的基因治疗和功能研究寻找潜在的靶器官。方法:实验于2005-12/2006-04在江西省分子医学重点实验室完成。选用健康雄性昆明鼠40只,将32只小鼠按随机数字表法分为流体力学注射和常规注射两大组,每大组再分为转染组和对照组两个小组(n=8),并设正常对照组(n=8)。①流体力学转染组将100μg/只绿色荧光蛋白表达质粒溶液2mL在5s内快速注入尾静脉;对照组仅在5s内注入林格氏液2mL。②常规注射组则将2mL林格氏液或绿色荧光蛋白表达质粒溶液在30s左右注入尾静脉。注射结束后24h采集各组小鼠血清检测转氨酶,并采集肝、脾、心、肾、肺和脑组织进行冰冻切片,部分肝组织采用多聚甲醛固定后切片,荧光显微镜下观察。结果:40只小鼠全部进入结果分析,无脱失。①流体力学注射组和常规注射组小鼠血清转氨酶与正常对照组比较差异均无显著性意义(P>0.05)。②常规尾静脉注射引起少数肾小球细胞表达绿色荧光蛋白,而肝、脾、心、肺及脑等组织未见明显绿色荧光蛋白表达。③流体力学注射引起肝内绿色荧光蛋白高水平表达,肝细胞表达率接近45%,其他组织则无绿色荧光蛋白表达。结论:流体力学方法是肝靶向性的活体基因转染方法,绿色荧光蛋白可作为该方法进行目的基因研究的一个可靠和方便的示踪剂。
- 刘亮明罗杰张吉翔郭宏兴邓欢徐江晶尹东熊高飞
- 关键词：发光蛋白质类质粒
- 原癌基因pim-3的克隆及其对肝癌细胞凋亡的影响被引量：10
- 2006年
- 目的:克隆大鼠原癌基因pim-3并构建真核表达重组质粒pEGFP-N2／pim-3,观察他在真核细胞SMMC-7721中的表达情况以及对细胞凋亡的影响．方法:利用TRIzol从液氮保存的大鼠骨骼肌组织中提取总RNA,采用RT-PCR方法获取pim-3 cDNA,并构建重组质粒pEGFP-N2／pim-3,转化用CaCl2法制备的大肠杆菌JM-109菌株,酶切以及测序鉴定．将重组质粒通过脂质体介导转染肝癌SMMC-7721细胞后利用倒置荧光显微镜观察基因表达情况,并利用流式细胞术及MTT比色实验对转染细胞的生物学行为进行检测．结果:将RT-PCR产物全部用于低熔点琼脂糖凝胶电泳、回收,在DL 2000 Marker 1000 bp附近可见清晰条带,与实验设计符合;阳性克隆质粒的酶切电泳和测序结果表明,大鼠pim-3 cDNA的克隆和重组质粒pEGFP-N2／pim-3的构建成功;重组质粒pEGFP-N2/pim-3转染组凋亡细胞占3．5％,质粒pEGFP-N2转染组凋亡细胞占10．7％,而仅加入转染液的空白组凋亡细胞占11．0％,重组质粒转染组与两对照组之间差异有统计学意义(P<0．05);倒置荧光显微镜可以观察到pim-3在SMMC-772 1细胞中的正常表达;MTT比色实验显示原癌基因pim-3能够明显抑制细胞凋亡．结论:真核表达重组质粒pEGFP-N2/pim-3构建成功;原癌基因pim-3能明显抑制肝癌细胞凋亡．
- 邓欢刘亮明张吉翔罗杰尹东熊瑛汤蕾谢正元
- 关键词：肝癌克隆凋亡荧光显微镜流式细胞术
- 亲子鉴定工作中的伦理道德探析被引量：2
- 2006年
- 亲子鉴定会引起一系列有关亲情、婚姻、财产、名誉等多方面的伦理问题,为了确保鉴定的公正性,必须建立健全各项规章制度,从严掌握各项操作规程。
- 邱小华徐卫戴育成尹东
- 关键词：亲子鉴定医学伦理社会公德婚外性行为
- Pim-3质粒构建体在大鼠活体肝组织的表达和活性的研究被引量：4
- 2007年
- 目的构建大鼠 Pim-3绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒并观察其在活体肝组织的表达和活性。方法采用逆转录 PCR 的方法获取目的 cDNA,重组质粒经酶切鉴定和测序;大鼠活体基因肝靶向性转染通过尾静脉流体力学注射法完成,肝细胞凋亡的诱导采用腹腔内注射内毒素和 D-半乳糖胺(D-GalN)来实现。动物分为 A、B、C 和 D 组(即正常、对照、空质粒和重组质粒组,每组8只);肝组织 GFP 表达通过荧光显微镜、Pim-3表达通过逆转录(RT)-PCR 方法检测;肝细胞凋亡采用缺口末端标记技术(TUNEL)分析和半胱天冬酶-3活性检测。结果成功构建 GFP 表达质粒 pEGFP-N2/Pim-3;重组质粒和空质粒 DNA 通过流体力学注射法被成功转染入大鼠活体肝组织内;4组 Pim-3的相对表达水平分别为0.06±0.02、0、0、0.49±0.15。D 组与其他3组差异均有统计学意义(均 P<0.01);4组肝细胞的凋亡指数(AI)分别为:(3.1±0.7)%,(72.5±6.1)%、(69.8±5.7)%和(4.9±1.2)%;肝组织半胱天冬酶-3活性分别为(60±15)、(147±55)、(142±50)和(76±27)pmol·min^(-1)·mg^(-1),D 组与 B、C 两组间差异有统计学意义(均 P<0.01)。结论构建的重组体质粒 pEGFP-N2/Pim-3能在大鼠活体肝组织内有效表达,并发挥其对肝细胞凋亡的抑制效应。
- 刘亮明邓欢张吉翔罗杰尹东郭宏兴
- 关键词：脱噬作用质粒
- 增强型绿色荧光蛋白标记技术示踪组织工程化骨形成被引量：3
- 2007年
- 目的:观察以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法:实验于2005-07/2006-11在南昌大学第二附属医院分子医学实验室完成。选取12个月龄中国青山羊2只作为骨髓基质干细胞供体。另取BACB/un裸鼠9只作为骨髓基质干细胞-珊瑚复合物受体。①将已转化pEGFP-N2大肠杆菌109菌种,进行质粒提取并经AvaⅡ酶切鉴定。②脂质体lipofectamine2000介导转染羊骨髓基质干细胞。分别于转染24h、6个月后计算荧光的转染效率。标记与未标记细胞经成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶活性和四环素钙结节染色,以未标记的同期细胞作对照。③将标记细胞接种于珊瑚支架,形成骨髓基质干细胞-珊瑚复合物,分别于体外培养4,7,14d后进行电镜扫描观察。④将体外培养7d的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物移植于裸鼠皮下,8周后取出,荧光显微镜下进行示踪观察,苏木精-伊红染色观察组织结构。以未标记的骨髓基质干细胞-珊瑚复合物、单纯珊瑚作对照。结果:共纳入中国青山羊2只,BACB/un裸鼠9只,作为受体的9只裸鼠进入结果分析。①质粒经酶切后电泳,可见3条带,分别为445bp,1938bp,2354bp,确定所提质粒为pEGFP-N2。②转染24h后绿色荧光表达率35%;经G418筛选,转染6个月后绿色荧光表达率75%;与对照组相比,标记细胞碱性磷酸酶活性差异无统计学意义(P>0.05),均具有钙结节形成能力。③标记细胞与材料贴附生长良好,并分泌胶原纤维及钙盐结晶样基质。④组织学示新生骨样组织围绕材料孔隙生成;新生组织细胞内有绿色荧光表达,同时对照组未观察到绿色荧光。结论:脂质体介导法转染的pEGFP-N2标记骨髓基质干细胞,可用于裸鼠体内示踪,是一种理想的组织工程化骨组织的示踪方法。
- 戴江华胡琼华戴闽尹东戴育成张吉翔
- 关键词：组织工程化骨增强型绿色荧光蛋白珊瑚
