目的:建立k-ras基因突变的焦磷酸测序方法,并分析该基因在结直肠癌中的突变率。方法:制备10份卫生部临床检验中心2013年全国kras基因突变检测室间质评模板DNA,对焦磷酸测序技术检测k-ras基因突变方法进行验证;制备230例结直肠癌标本g DNA,应用Pyro Mark Q24焦磷酸测序仪进行k-ras基因的焦磷酸测序。结果:建立了k-ras基因突变的焦磷酸测序新方法,检测正确率100%;230例结直肠癌标本中共检出基因突变型33例,总突变率14.34%(33/230),其中12号密码子上34G>T的突变率为1.74%(4/230),35G>A的突变率为5.22%(12/230),35G>T的突变率为3.04%(7/230),37G>A的突变率为0.43%(1/230),13号密码子上38G>A的突变率为3.91%(9/230)。结论:k-ras基因突变的焦磷酸测序新方法具有快速、准确和高通量的优点,适合于在科研和临床基因扩增检验中推广。