范文俊
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：南通大学医学院更多>>
- 发文基金：南通市科技计划项目江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于谷氨酸棒杆菌NCgl1221蛋白的新型细菌表面展示系统被引量：1
- 2012年
- 【目的】开发一种新型的大肠杆菌表面展示系统,为C末端截短NCgl1221蛋白作为锚定蛋白提供科学依据,丰富并优化细菌表面展示系统。【方法】扩增C末端截短NCgl1221序列和β-淀粉酶基因,构建融合蛋白表达载体。将重组载体PET-NA和空载体PET-28a分别转入Rosetta(DE3)pLysS中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定融合蛋白表达情况。将诱导表达菌株进行免疫荧光染色,荧光显微镜观察和流式细胞分析检测β-淀粉酶的展示。酶活测定和淀粉水解分析验证被展示β-淀粉酶的活性。【结果】融合蛋白成功地在大肠杆菌中表达,有活性的β-淀粉酶通过与锚定蛋白C末端的融合被展示在了宿主菌表面,展示β-淀粉酶的重组菌可以水解利用培养基中的淀粉。【结论】成功开发了一种以C末端截短NCgl1221为锚定蛋白的新型大肠杆菌表面展示系统,并以此系统展示了分子量大小为56 kDa的活性酶,为该系统在全细胞催化剂或吸附剂等方面的应用奠定了基础。
- 姚文娟范文俊许小乐张伟邓小昭
- 关键词：Β-淀粉酶
- γ-聚谷氨酸合成酶系PgsBCA结构的生物信息学分析被引量：2
- 2012年
- 利用ProtParam、TopPred、PredictProtein、PSORT-B Prediction、SWISS-MODEL等软件分别分析蛋白质的理化性质、跨膜区、二级结构、亚细胞定位、三维结构.结果显示:PgsB是亲水不稳定蛋白,通过豆蔻酰锚钩锚定于质膜上,催化作用需与ATP结合提供能量;PgsC是疏水稳定蛋白,通过4个跨膜区和多个豆蔻酰锚钩定位于质膜,具有酰胺化位点;PgsA是亲水稳定蛋白,通过N端一个跨膜区和豆蔻酰锚钩结合于质膜,具有多种磷酸化位点.说明γ-聚谷氨酸(Polyγ-glutamic acid,γ-PGA)合成酶系3个组分蛋白形成复合物定位于质膜上,其中PgsB在胞内催化γ-PGA合成,PgsC固定于质膜,连接PgsB和PgsA组分,PgsA在胞外负责γ-PGA的运输.通过对γ-PGA合成酶系各组分蛋白结构的分析,为日后在谷氨酸高产菌株中的表达奠定了基础.
- 姚文娟范文俊许小乐邓小昭张伟
- 关键词：Γ-聚谷氨酸生物信息学
- 二苯乙烯苷对动脉粥样硬化大鼠主动脉波形蛋白表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨二苯乙烯苷(TSG)抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制,并筛选新的TSG作用靶分子。方法采用高脂饲料喂饲+VitD3复制大鼠动脉粥样硬化模型,随机分为5组:正常对照组(普通饲料组)、模型组(高脂饲料)、TSG低剂量组(30 mg·kg-1·d-1)、TSG中剂量组(60 mg·kg-1·d-1)、TSG高剂量组(120 mg·kg-1·d-1)。造模给药12周后分离大鼠主动脉,提取总蛋白和总RNA。双向凝胶电泳分析差异蛋白质点并初步定量,切割出差异蛋白质点,酶解并进行质谱分析。Western blot检测各组中波形蛋白(差异蛋白质点)表达的变化,RT-PCR检测各组中波形蛋白(差异蛋白质点)转录的变化。结果双向凝胶电泳和质谱分析结果显示,TSG作用后的差异蛋白质为波形蛋白,与正常组相比,AS模型组的波形蛋白呈高表达,TSG作用后波形蛋白表达受到明显的抑制。Western blot和RT-PCR结果表明,TSG对波形蛋白表达的抑制作用可能是在转录水平。结论TSG的抗AS作用很可能与波形蛋白的下调作用有关,波形蛋白有望成为新的TSG作用靶分子。
- 姚文娟范文俊顾承静金翔王慧敏张伟
- 关键词：二苯乙烯苷动脉粥样硬化波形蛋白主动脉二维电泳质谱分析
