胡琴
- 作品数：10 被引量：15H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市渝中区科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HBx促进ZO1的泛素化降解增加肝癌细胞迁移与侵袭
- 2021年
- 目的研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对HepG2细胞ZO1表达水平的影响及闭锁小带蛋白1(ZO-1)对肝癌细胞迁移和侵袭的作用。方法分别转染HBV全基因质粒(pcDNA3.1-HBV1.1或pcDNA3.1-HBV1.3)、空载质粒(pcDNA3.1)和HBV编码蛋白质粒(pHBc、pHBs、pHBp、pHBx)至肝癌细胞,蛋白质印迹法(Western blot)和RT-PCR检测细胞中ZO1蛋白水平及mRNA水平;转染pHBx,免疫共沉淀和Western blot检测ZO1泛素化水平,Transwell小室检测细胞的迁移与侵袭。转染靶向ZO1的siRNA,乳酸脱氢酶实验检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞的凋亡及周期,Transwell小室检测细胞的迁移与侵袭。两组数据间比较用独立样本t检验,多组数据比较用单因素方差分析。结果瞬时转染pHBV1.1和pHBV1.3后,相较于空载体对照,HepG2细胞中ZO1的蛋白水平分别下降了42.99%±6.8%和55.0%5±4.56%,其mRNA水平无显著变化;Huh7细胞中ZO1的蛋白水平分别下降了17.46%±4.94%和47.53%±3.38%。转染pHBx后,ZO1蛋白水平下降了47.02%±3.4%,而转染pHBc、pHBs和pHBp后ZO1蛋白水平比较,差异无统计学意义。转染pHBx未影响ZO1的mRNA水平。转染pHBx导致HepG2细胞中ZO1泛素化水平显著增加,细胞迁移和侵袭能力增强。转染靶向ZO1的siRNA后HepG2细胞的增殖、凋亡和周期无明显变化,而迁移和侵袭能力显著升高。结论HBx可通过促进ZO1蛋白的泛素化降解,增加肝癌细胞的迁移与侵袭。
- 杨盛君蒋林珊胡琴谢聪詹茜陈维贤
- 关键词：肝细胞癌泛素化迁移
- 磷酸化Y盒结合蛋白1的抗体制备及其辅助诊断原发性肝癌合并肺转移的临床价值被引量：3
- 2015年
- 目的制备Y盒结合蛋白1磷酸化抗体（pAb／YB-1S102）;探讨腹水中磷酸化YB-1（pYB-1）作为标志物辅助诊断原发性肝癌合并肺转移的临床价值。方法通过生物信息学预测并化学合成102位丝氨酸磷酸化YB-1多肽，耦联载体蛋白后免疫家兔；protein A亲和层析法纯化抗血清pAb／YB-1S102，并验证其特异性。收集109例患者腹水并富集腹水中pYB-1，其中原发性肝细胞癌（HCC）36例，HCC合并肺转移44例，肝硬化29例l采用Westemblot定性检测腹水中pYB-1，并对定性结果进行回归判别与受试者工作特征（ROC）曲线分析。计数资料采用x2检验。结果酶联免疫吸附法与十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示制备的pAb／YB-1渤观效价≥1：1×106，且纯度较高。Westernblot结果证实pAb／YB-1S102能特异性识别内源性pYB-1S102。肝硬化患者腹水中未检出pYB-1S102,HCC合并肺转移患者腹水pYB-1勖02阳性率（77．3％）显著高于HCC（30．6%，X2=11．69，P〈0．01）；回归分析与ROC曲线结果表明pYB-1乳衄辅助诊断HCC合并肺转移的灵敏度为77．3％，符合率为73．8％（X2=17．56，P〈0．01）。结论成功制备可识别内源性pYB-1的抗体pAb／YB-1S102通过定性检测腹水pYB-1，可鉴别诊断HCC合并肺转移。
- 聂红史静王玎麦力赵清胡琴陈维贤李朴
- 关键词：腹水
- HCV核心蛋白与ZEB2的相互作用抑制E-cadherin的表达
- 2019年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)核心蛋白通过与E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)相互作用抑制E-cadherin表达的分子机制。方法转染HCV核心蛋白真核表达质粒至HepG2细胞,并通过G418筛选构建稳定表达HCV核心蛋白的细胞株,以未转染HCV核心蛋白真核表达质粒的细胞作为对照组,采用RT-PCR和Western blot观测核心蛋白对ZEB2和E-cadherin表达水平的影响;采用荧光素酶报告系统分析核心蛋白对E-cadherin启动子活性的调控作用;通过免疫共沉淀及染色质免疫共沉淀技术检测核心蛋白与ZEB2的相互作用及与E-cadherin启动子的结合情况。结果与对照组比较,在表达HCV核心蛋白的HepG2细胞中,E-cadherin的蛋白和mRNA表达水平显著降低(P<0.01),而ZEB2的蛋白和mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。转染HCV核心蛋白的HepG2细胞中,E-cadherin启动子介导的荧光素酶活性显著降低(P<0.01),当利用RNA干扰技术敲减ZEB2后,E-cadherin启动子介导的荧光素酶活性明显恢复(P<0.05)。免疫共沉淀实验显示,HCV核心蛋白可与ZEB2结合,染色质免疫共沉淀实验表明,HCV核心蛋白增强了ZEB2与E-cadherin启动子的结合。结论 HCV核心蛋白可增强ZEB2的表达并促进其结合至E-cadherin启动子,从而抑制E-cadherin的表达。
- 刘传丽毛金菊叶媛媛胡琴张利军陈维贤
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白肝细胞癌
- 缺血修饰清蛋白对急性冠脉综合征诊断价值的荟萃分析被引量：7
- 2013年
- 目的系统评价缺血修饰清蛋白(IMA)对急性冠脉综合征(ACS)的诊断价值。方法计算机检索PubMed、Em-base、ScienceDirect、Springer、Ovid、万方、维普等数据库中的文献,按照纳入排除标准筛选文献,采用QUADAS工具评价纳入文献质量,采用SPSS 17.0、Meta-Disc 1.4及Review Manager 4.2进行统计分析。结果最终纳入13篇文献,包括8篇中文文献及5篇英文文献,样本量为2 381例,异质性检验示存在非阈值效应,采用随机效应模型合并统计量。13项研究汇总灵敏度为78%(75%～80%),汇总特异度为66%(63%～68%),汇总阳性似然比为2.57(1.69～3.61),汇总阴性似然比为0.28(0.16～0.48)。SROC曲线下面积为0.848 9。IMA对ACS诊断的灵敏度(72%)高于肌钙蛋白(cTnT)(39%),IMA的特异度(57%)低于cTnT(72%)。结论 IMA对ACS诊断的灵敏度明显高于cTnT,因而可以作为诊断ACS的新指标。同时,IMA值位于正常水平时对排除ACS有更高的临床价值。
- 胡琴陈维贤詹茜王曦
- 关键词：血清白蛋白冠状动脉疾病META分析
- 人BRIT1基因在宫颈癌组织中的表达及其临床意义分析被引量：1
- 2016年
- 目的检测宫颈癌组织和配对的宫颈非癌组织中的BRIT1表达情况,比较两者之间的表达差异。方法分别应用实时荧光PCR(RT-PCR)、免疫组化技术检测宫颈癌组织及其配对的宫颈非癌组织中BRIT1 mRNA和蛋白的表达水平,分析BRIT1蛋白表达水平与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤类型、肿瘤的病理分级和临床分期之间的关系。结果 RT-PCR结果揭示宫颈癌组织中BRIT1mRNA的表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化技术结果揭示63例标本中的44例(69.8%)宫颈癌组织BRIT1蛋白表达水平低于配对的宫颈非癌组织,差异有统计学意义(P<0.05);在高级的病理分级和临床分期中,BRIT1蛋白的表达减少更为明显。结论 BRIT1在宫颈癌癌组织和非癌组织中的表达差异提示BRIT1可能在宫颈癌的发生、发展中具有一定的作用。
- 麦力王玎胡琴聂红赵清陈维贤邓淋曼
- 关键词：宫颈癌免疫组化实时荧光定量PCR
- 骨髓基质细胞抗原2抑制乙肝病毒复制与释放被引量：1
- 2015年
- 目的研究骨髓基质细胞抗原2(bone marrow stromal antigen 2,BST-2)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制与释放的影响。方法以不同浓度干扰素处理人肝癌细胞株Hep G2.2.15,Western blot和荧光定量PCR检测BST-2蛋白水平和RNA水平;分别用构建的BST-2真核表达质粒p CDNA3.1-BST2-FLAG和BST-2拮抗蛋白HIV Vpu真核表达质粒,转染Hep G2.2.15细胞,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)和乙肝病毒e抗原(HBe Ag),荧光定量PCR检测HBV mRNA,Southern blot检测HBV DNA。结果转染p CDNA3.1-BST2-FLAG后,HBV mRNA降低26%,细胞内HBV DNA降低31%,细胞培养液中HBV DNA降低33%(P<0.05),细胞培养液中HBs Ag下降至82%,HBe Ag下降至77%(P<0.05);加入Vpu蛋白后,BST-2的抑制作用受到对抗,HBV mRNA恢复至92%,细胞内HBV DNA恢复至93%,细胞培养液中HBV DNA升至98%,细胞培养液中HBs Ag恢复至102%,HBe Ag恢复至99%,HBV复制与释放明显增强。结论 BST-2对HBV复制与释放具有抑制作用,该抑制作用可被HIV Vpu蛋白拮抗。
- 朱素菲贺巧胡琴黄英陈维贤李月
- 关键词：乙肝病毒干扰素
- 建立非均衡竞争叶酸定量测定的化学发光免疫分析法被引量：2
- 2017年
- 目的制备抗人叶酸(FA)抗血清并应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立可常规应用的定量检测血清FA的化学发光免疫分析(CLIA)法。方法 FITC-FA类似物、FA抗体-HRP依次加入包被有抗FITC抗体的化学发光板,形成FITC抗体-FITC-FA类似物-FA抗体-HRP的免疫反应复合物;并进行方法学评价,同时与非FITC检测系统及罗氏化学发光免疫分析系统检测结果进行比较。结果成功制备FA抗血清并建立基于FITC系统的非均衡竞争CLIA;经方法学评价,自研法的线性相关系数绝对值大于0.990 0,灵敏度1.21nmol/L,线性范围1.21~38.80nmol/L,批内变异系数小于5%,自研法定量检测性能优于非FITC系统;与罗氏检测系统结果有较好相关性(R=0.908 1)。结论建立的非均衡竞争定量检测血清FA的CLIA法,具有良好的检测灵敏度与特异性,可应用于常规检测。
- 聂红陈维贤赵清王玎胡琴刘萍李朴
- 关键词：FITC非均衡竞争叶酸化学发光免疫分析法
- 丙型肝炎病毒核心蛋白对Dicer切割功能的影响
- 2013年
- 目的探讨核心蛋白与Dicer的相互作用及其对Dicer功能的影响。方法构建丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达质粒,采用免疫荧光染色和Western blot检测核心蛋白的表达,Western blot检测核心蛋白对细胞内Dicer表达的影响,免疫共沉淀技术检测真核细胞内核心蛋白与Dicer的相互作用。体外转录合成dsRNA,检测核心蛋白对Dicer切割dsRNA作用的影响。结果在细胞内,核心蛋白能够明显恢复被shRNA抑制的虫荧光素酶基因的表达(P<0.05),而对siRNA引发的RNAi无拮抗作用。在真核细胞内,加入核心蛋白后,Dicer的表达量无明显改变,并能检测到两者相互结合。在体外抑制实验中,重组表达的Dicer能切割dsRNA产生siRNA;核心蛋白加入后,dsRNA的切割受到抑制。结论核心蛋白在真核细胞内可以结合Dicer,并通过抑制Dicer对dsRNA的切割作用,抑制RNA干扰作用。
- 黄文娟李霞胡琴陈维贤
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白DICER酶免疫共沉淀
- 自噬相关基因ATG4A rs807185位点单核苷酸多态性与重庆地区人群肺癌的相关性研究被引量：1
- 2020年
- 目的研究自噬相关基因ATG4A rs807185位点单核苷酸多态性与重庆地区人群肺癌风险的相关性。方法收集225例癌症患者(病例组)和257例健康对照者(对照组)的血液标本及相关病历资料,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析方法对自噬相关基因ATG4A的rs807185位点进行基因分型,比较病例组和对照组的基因型差异;按照性别、年龄、吸烟史、饮酒史及肺癌病理分型等因素进行分层分析。结果对照组rs807185位点的突变A等位基因频率高于病例组(37.7%vs.24.9%,P=0.006),校正优势比为1.989(95%置信区间:1.223~3.236)。与野生T等位基因相比,ATG4A基因rs807185位点的突变A等位基因与肺癌风险降低相关(校正优势比=0.605,95%置信区间:0.456~0.803,P<0.001)。分层分析表明,在不同年龄、吸烟、饮酒及病理型别中,rs807185位点的纯合突变基因型(AA)均可降低肺癌的患病风险。结论在重庆地区人群中,ATG4A基因rs807185突变体与肺癌风险的降低显著相关,表明ATG4A基因rs807185AA突变可能是肺癌的保护因子。
- 陈姝贺巧胡琴陈维贤胡锐
- 关键词：自噬肺癌单核苷酸多态性
- E盒结合锌指蛋白2抑制乙型肝炎病毒的复制和表达
- 2016年
- 目的研究转录因子E盒结合锌指蛋白2（ZEB2）对HBV复制和表达的影响。方法分别培养HepG2、HepG2．2．15和HepAD38细胞，Westemblot检测ZEB2表达水平。培养HepG2．2．15细胞，转染ZEB2表达质粒或针对ZEB2的shRNA，采用Westemblot检测ZEB2和HBV核心蛋白表达水平，实时荧光定量PCR检测HBV3．5kbRNA和HBVDNA，Southernblot检测HBV复制中间体，酶联免疫吸附法检测HBsAg和HBeAg表达水平，明确ZEB2对HBV复制表达的影响。采用双荧光素酶报告系统检测ZEB2对HBV启动子的影响，染色质免疫共沉淀法检测ZEB2与HBV启动子的结合情况。组间均数比较采用Studentf检验。结果在HBV复制的细胞中，ZEB2表达受到抑制。过表达ZEB2可使HBV复制和表达水平下降约50％，差异有统计学意义（P〈0．05）。采用shZEB2-1和shZEB2-2下调ZEB2后，HBV复制中间体的相对表达量由58．53±3．43分别上升到112．80±5．03、128．30±2．31，HBV3．5kbRNA的相对表达量由1．00±0．01分别增加到2．03±0．02、2．32±0．03，HBsAg的相对表达量由35．63％±1．57％分别上升到81．87％±0．43％、100．00%±2.18％，HBeAg的相对表达量由37.00%±0.70%分别上升到88．00％±2．60％、100．00％±0．75％。ZEB2可以抑制HBV核心启动子的转录活性，并可与HBV核心启动子结合。结论ZEB2通过结合HBV核心启动子并抑制其转录活性，从而抑制HBV的复制和表达。
- 李小平胡琴贺巧陈维贤
- 关键词：核心启动子
