韩雅婷
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- LSD1过表达及去甲基化作用缺失质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的 评估赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（LSD1）过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在人胚肾细胞HEK293T中的表达水平。方法 采用PCR扩增LSD1片段，重叠PCR扩增LSD1去甲基化作用缺失片段，构建大鼠特异性LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒，并经琼脂糖凝胶电泳和测序进行验证。将验证后的两种重组质粒与空白载体分别进行包病毒，感染HEK293T后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞，再用Western Blot和实时定量PCR检测稳定表达的HEK293T细胞内LSD1的表达情况。结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明，LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒构建成功。Western Blot和实时定量PCR检测结果显示，与空白对照组相比，LSD1过表达组和LSD1去甲基化片段缺失组HEK293T细胞中LSD1蛋白及mRNA的相对表达量均上调，差异均具有统计学意义（均P〈0.01）。结论 构建的LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在HEK293T细胞中实现了LSD1基因的过表达，为进一步研究LSD1基因与相关疾病的关系以及LSD1去甲基化作用奠定了基础。
- 武莉莉刘艺洁曹冰雁费乔曼赵秀娟李倩韩雅婷曹磊杨冰张玲
- 关键词：去甲基化重组质粒
- 基础医学模式生物酿酒酵母接合型的鉴定——PCR法
- 2016年
- 目的:利用PCR法鉴定酿酒酵母a、α单倍体或a/α双倍体三种接合型。方法:根据酿酒酵母a、α或a/α三种接合型MAT基因座及附近序列信息,分别设计特异的寡核苷酸引物。提取酿酒酵母DNA作为模版和利用单菌落PCR法,进行特异性PCR扩增。结果:MATa基因座特异性引物能在a和a/α接合型中扩增出特异性条带;MATα基因座特异性引物则能在α和a/α接合型中扩增出特异性条带。结论:利用PCR鉴定酿酒酵母接合型是一种操作简单、准确灵敏的方法,为基础医学单细胞真核模式生物的研究提供方便。
- 刘超韩雅婷杨冰孙琰王玺
- 关键词：酿酒酵母PCR鉴定
- 采用CRISPR knockin技术实现VEGF165定点敲入HEK293T细胞系的构建
- 2019年
- 目的构建定点敲入血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的人肾上皮细胞系HEK293T,避免由慢病毒感染等方法实现过表达时所带来的脱靶效应。方法根据EZH2基因的DNA序列设计、构建两端带有同源臂的VEGF165表达载体(pUCm-T-VEGF165质粒)和能定点切割基因组DNA的小向导RNA(sgRNA)表达载体[pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒],再将这两个质粒共转染HEK293T细胞,通过实时荧光定量PCR检测VEGF165和EZH2的mRNA表达情况,蛋白质印迹法(Western Blot)检测VEGF165和EZH2的蛋白表达情况。结果实时荧光定量PCR和Western Blot结果显示,与对照组、单独转染pUCm-T-VEGF165质粒和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒组比较,共转染pUCm-T-VEGF165和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sgRNA质粒组VEGF165的mRNA和蛋白相对表达量均升高(VEGF165 mRNA:3.42±0.30比1.02±0.21、1.13±0.16、0.98±0.18,均P<0.01;VEGF165蛋白:3.12±0.10比1.02±0.06、0.88±0.03、0.80±0.05,均P<0.01),EZH2的mRNA和蛋白相对表达量均降低(EZH2 mRNA:0.14±0.06比1.08±0.11、1.02±0.12、1.13±0.16,均P<0.01;EZH2蛋白:0.23±0.03比1.05±0.13、0.91±0.04、0.81±0.06,均P<0.01)。该结果表明VEGF165基因被定点插入EZH2基因的基因组DNA序列中,并干扰了EZH2的表达。结论采用CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入VEGF165基因的HEK293T细胞系。
- 郭再玉张合亮陈谦侯延伟水涛武莉莉刘艺洁费乔曼黄欢雷蕾孙琰孔雨赵秀娟韩雅婷杨冰张玲
- 关键词：血管内皮生长因子165
