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李敏: 作品数：12 被引量：5H指数：2; 供职机构：石河子大学动物科技学院更多>>; 发文基金：国际科技合作与交流专项项目国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学更多>>

合作作者

布鲁氏菌分泌蛋白VceA对HPT-8细胞自噬和调亡的影响: <正>布鲁氏菌病广泛流行于许多国家,在世界200多个国家和地区中有170多个国家和地区有布鲁氏菌病存在和流行[1],给畜牧业生产造成严重损失,我国新疆地区每年因布鲁氏菌病引起的流产、空怀等少生幼畜达100万—140万头,...; 史静雪李敏荆明龙豆晓霞刘洋李明启王小凤张辉; 关键词：布鲁氏菌基因缺失株细胞自噬分泌蛋白; 文献传递

牛种布鲁氏菌2308参考株Δ VceC基因缺失株的构建与鉴定被引量：2: 2017年; 为了研究布鲁氏菌四型分泌系统VceC蛋白的功能,构建牛种布鲁氏菌2308参考株△vceC的基因突变株,本研究以牛种布鲁氏菌参考株2308的分泌蛋白VceC为研究对象,以牛种布鲁氏菌参考株基因组为模板,高保真(pfu酶)扩增VceC基因的上下游同源臂基因;以卡那抗性基因质粒为模板高保真扩增卡那抗性基因,运用融合PCR将上下游同源臂和卡那抗性基因融合,用TA克隆的方法将融合片段连接到克隆载体上,再用电转化的方法将载体转入布鲁氏菌2308感受态细胞中,最后用卡那抗性筛选并检测其遗传稳定性。将亲本株2308缺失株2308△VceC在相同起始浓度下震荡培养,观察其生长变化趋势;侵染人胚胎滋养层细胞(HPT-8),比较其在胞内的生存能力。结果显示:利用T载体克隆和抗性替换的方法成功构建了2308的VceC的突变株,与亲本株相比,2308△VceC在体外培养生长趋势与亲本株相似,在12 h时进入对数生长期,30 h时进入平台期,胞内CFU显示侵染12 h后缺失株胞内细菌数量明显下降,亲本株2308和2308-Δ VceC缺失突变株在12 h时差异显著。本研究为布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统的功能研究奠定了基础。; 李敏史静雪李志强荆明龙刘洋陈创夫张辉; 关键词：布鲁氏菌同源重组

布鲁氏菌不同菌株间差异蛋白的研究进展: 2016年; 布鲁氏菌病是一种全球流行性的人兽共患病,严重威胁着人类的健康及畜牧业的发展。随着蛋白质组学研究技术的快速发展,通过不同布鲁氏菌菌株间蛋白质组学研究,分析羊种布鲁氏菌强毒株与疫苗株间的差异蛋白,牛种布鲁氏菌与羊种布鲁氏菌间的差异蛋白,猪种布鲁氏菌强毒株与疫苗株间的差异蛋白,可为探求布鲁氏菌在致病机制、毒力因子、代谢通路、诊断标志物以及新型疫苗的研制等热点研究方面提供理论依据和解决方法。通过对布鲁氏菌的蛋白质组学研究,以期在布鲁氏菌病诊断防治研究上取得重大突破。; 豆晓霞刘洋刘升王红红李敏荆明龙陈创夫张辉; 关键词：布鲁氏菌蛋白质组差异蛋白双向电泳质谱

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白基因VceA的原核表达、纯化及功能分析被引量：3: 2017年; 本研究对布鲁氏菌分泌蛋白VceA基因进行了原核表达与纯化,并分析其反应原性,致炎特性和分子特性。应用PCR技术从布鲁氏菌2308基因组中扩增VceA基因,亚克隆至PMD19-T载体后,进行测序,构建重组表达质粒PGEX-4T-1-VceA,然后转化至E.coli BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析,Western Blot检测其反应原性;用重组蛋白作用于细胞,检测炎症相关细胞因子的分泌量;并对该蛋白进行生物信息学分析。结果显示:PCR扩增出VceA基因,SDS-PAGE显示纯化的VceA融合蛋白大约在37 kD处,Western Blot也出现了杂交带。细胞实验表明重组蛋白刺激细胞后产生的IL-18,IL-1β,TGF-β1的含量均显著高于BSA对照组(P<0.05)。生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,存在信号肽,属于分泌型蛋白,二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,并利用Phyre2软件成功构建了该蛋白的三维模型。结果表明,成功克隆并表达了布鲁氏菌Vce A蛋白,该蛋白具有良好的反应原性,并具有致炎作用。这为进一步研究布鲁氏菌分泌蛋白的致病机制奠定了基础。; 史静雪刘来珍李敏荆明龙刘洋张豫刘航张辉; 关键词：布鲁氏菌

布鲁菌感染细胞NF-κB的表达水平检测及其干扰方法研究被引量：1: 2018年; 目的本文针对布鲁氏菌侵染宿主细胞过程中NF-κB的表达进行检测,并比较siRNA和shRNA对RAW264.7细胞中NF-κB表达沉默效果。方法根据NF-κB P65基因序列,设计siRNA干扰序列,通过干扰RAW264.7细胞筛选效率较高的siRNA设计shRNA序列,siRNA和shRNA同时干扰布鲁氏菌侵染的RAW264.7细胞,使用RT-PCR方法检测NF-κB P65基因的相对表达情况。结果与阴性对照mock组相比,P65-shRNA组表达降低;P65-siRNA组P65表达低于P65-shRNA组,均低于阴性对照mock组;布鲁氏菌侵染组,P65表达显著高于阴性对照组。结论布鲁氏菌侵染组促进了NF-κB P65的表达,P65-shRNA、P65-siRNA组均抑制了NF-κB P65的表达,siRNA可作为基因沉默中快速筛选的工具,在RNA干扰的应用中可与shRNA配合使用。; 荆明龙李敏王小凤李明奇霍凤娇张豫刘良波张静张辉; 关键词：布鲁氏菌 SIRNA SHRNA NF-ΚB

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达及功能分析: 2018年; 为构建布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因的原核表达载体,并进行表达、鉴定。从羊种布鲁氏菌(Brucella melitensis)16M株的基因组中克隆BMEI0742基因片段,亚克隆到pMD19-T载体中并测序,克隆至表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-28a-BMEI0742利用大肠杆菌进行表达,并进行Western-Blot检测,对该蛋白功能进行生物信息学分析。成功构建了pET-28a-BMEI0742原核表达载体,SDS-PAGE检测结果显示,重组蛋白的分子量约是50 ku,BMEI0742蛋白可与布鲁氏菌阳性血清发生特异性反应,表明其具有良好的反应原性。生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,不存在信号肽,二级结构以α-螺旋为主并利用Phyre2服务器成功构建了该蛋白的三维模型。本研究成功表达了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统蛋白BMEI0742基因,并成功获得了BMEI0742蛋白,该蛋白具有与布鲁氏菌自身蛋白相同的抗原性,为布鲁氏菌翻译延伸因子Tu,为进一步研究其免疫性和保护性以及在布鲁氏菌的致病机制奠定基础。; 豆晓霞刘洋李敏荆明龙李明奇王小凤陈创夫张辉; 关键词：布鲁氏菌原核表达反应原性

布鲁氏菌胞内寄生过程中LncRNAs对细胞自噬/凋亡的影响: 布鲁氏菌病是一类自然疫源性疾病。布鲁氏菌在对细胞自噬和凋亡的影响方面也有一定的研究,但是其具体的影响机制目前还不清楚。长链非编码RNAs被证实在机体内的多种生理和病理过程中都扮演着重要的角色。Lnc RNAs的相关研究主...; 张辉刘来珍史静雪豆晓霞李敏荆明龙刘洋李明启王小凤; 关键词：布鲁氏菌细胞自噬; 文献传递