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张永泽
作品数:
1
被引量:6
H指数:1
供职机构:
河北师范大学
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发文基金:
中国博士后科学基金
博士科研启动基金
国家自然科学基金
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相关领域:
生物学
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合作作者
张洁
河北师范大学
段相林
河北师范大学
樊玉梅
河北师范大学
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PCDNA3
机构
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河北师范大学
作者
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樊玉梅
1篇
段相林
1篇
张洁
1篇
张永泽
传媒
1篇
生物技术
年份
1篇
2014
共
1
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铁蛋白轻链真核表达载体的构建
被引量:6
2014年
目的:为进一步研究铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)的表达对细胞内信号转导途径的影响提供平台。方法:利用PCR扩增技术得到小鼠552 bp的FTL基因编码序列,并在基因的C端引入Flag标签,将此序列插入到真核表达载体pcDNA3多克隆位点区域中限制性内切酶HindⅢ和BamHⅠ之间,得到带有Flag标签的FTL基因的真核表达载体pcDNA3-FTL-Flag。分别经酶切和测序鉴定。用脂质体lipofectamineTM2000将构建成功的pcDNA3-FTL-Flag及其对照空载体pcDNA3分别转染到RAW264.7细胞中,提取蛋白后利用Western blot方法检测细胞中带有Flag标签的FTL蛋白表达。结果:重组质粒酶切鉴定得到预期片段,测序结果显示所构建的小鼠FTL基因的cDNA序列正确,并在细胞内检测到分子量约为21kDa的蛋白的强烈表达信号。结论:实验成功构建小鼠FTL基因的真核表达载体pcDNA3-FTL-Flag。
张洁
张永泽
柳彩芝
段相林
樊玉梅
关键词:
PCDNA3
分子克隆
免疫印迹
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