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侯艳
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1
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供职机构:
重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心
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发文基金:
国家教育部博士点基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
陈全
重庆医科大学基础医学院分子医学...
王瑜伟
重庆医科大学检验医学院感染性疾...
严莎
重庆医科大学基础医学院分子医学...
吕玉春
重庆医科大学基础医学院分子医学...
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细胞与分子免...
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2010
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抑制Coronin-1基因表达的siRNA载体的构建和筛选
2010年
目的:构建和筛选能高效、特异性抑制Coronin-1基因表达的siRNA表达载体。方法:提取鼠巨噬细胞总RNA,RT-PCR扩增Coronin-1基因目标序列,克隆入pSEB-HUS真核表达质粒,构建pSEB-HUS-C重组质粒。将设计、合成的3条siRNA及阴性对照分别克隆入pSEB-HUS-C,构建重组pSEB-HUS-C1、pSEB-HUS-C2、pSEB-HUS-C3及pSEB-HUS-CN质粒。将干涉质粒瞬时转染A549细胞,通过绿色荧光信号观察、实时定量PCR和Western blot法检测其对Coro-nin-1基因表达的影响。结果:经双酶切及测序证实,所构建siRNA表达载体目的基因大小、序列与预期相符。经瞬时转染A549细胞后,其中的pSEB-HUS-C3能明显抑制Coronin-1 mRNA的表达和Coronin-1蛋白的合成,抑制率分别是75.9%和75.1%。结论:成功构建并筛选出高效、特异性抑制Coro-nin-1表达的siRNA表达载体,为进一步研究Coronin-1在巨噬细胞中的作用奠定基础。
严莎
陈全
吕玉春
侯艳
王瑜伟
关键词:
RNA干扰
结核分支杆菌
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