黄文娟
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 雷帕霉素诱导细胞自噬促进乙型肝炎病毒的复制被引量：3
- 2014年
- 目的研究雷帕霉素诱导细胞产生自噬对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响。方法通过雷帕霉素诱导人肝癌细胞HepG2 2.15产生自噬,荧光显微镜和透射电镜下观察自噬小体形成,Western blot检测诱导后HepG2 2.15细胞自噬标志蛋白LC3-II/LC3-I的表达水平;荧光定量PCR检测HBV mRNA水平;加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA),Western blot检测自噬抑制后LC3-II/LC3-I的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的表达,Southern blot检测HBV DNA水平,验证HBV复制情况。结果雷帕霉素诱导后,HepG2 2.15细胞在荧光显微镜和透射电镜下观察到自噬小体的形成,LC3-II/LC3-I比值显著上升(P<0.05);细胞诱导自噬后HBsAg和HBV mRNA显著增加(P<0.05),而加入自噬抑制剂3-MA后,HBsAg和HBV DNA均显著减少(P<0.05)。结论雷帕霉素可能通过诱导细胞自噬促进HBV的复制。
- 李霞黄文娟朱素菲陈维贤
- 关键词：雷帕霉素自噬乙型肝炎病毒
- 丙型肝炎病毒核心蛋白对Dicer切割功能的影响
- 2013年
- 目的探讨核心蛋白与Dicer的相互作用及其对Dicer功能的影响。方法构建丙型肝炎病毒核心蛋白真核表达质粒,采用免疫荧光染色和Western blot检测核心蛋白的表达,Western blot检测核心蛋白对细胞内Dicer表达的影响,免疫共沉淀技术检测真核细胞内核心蛋白与Dicer的相互作用。体外转录合成dsRNA,检测核心蛋白对Dicer切割dsRNA作用的影响。结果在细胞内,核心蛋白能够明显恢复被shRNA抑制的虫荧光素酶基因的表达(P<0.05),而对siRNA引发的RNAi无拮抗作用。在真核细胞内,加入核心蛋白后,Dicer的表达量无明显改变,并能检测到两者相互结合。在体外抑制实验中,重组表达的Dicer能切割dsRNA产生siRNA;核心蛋白加入后,dsRNA的切割受到抑制。结论核心蛋白在真核细胞内可以结合Dicer,并通过抑制Dicer对dsRNA的切割作用,抑制RNA干扰作用。
- 黄文娟李霞胡琴陈维贤
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白DICER酶免疫共沉淀
- 丙型肝炎病毒核心蛋白抑制shRNA介导的RNA干扰作用被引量：2
- 2012年
- 目的研究丙型肝炎病毒编码的蛋白对RNA干扰的抑制作用,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。方法构建丙型肝炎病毒不同蛋白质的真核表达质粒,加入萤火虫荧光素酶基因的RNA干扰体系,共转染HeLa细胞,检测萤火虫荧光素酶活性以观察RNA干扰效果的变化,筛选出有作用的RNA干扰抑制因子。在针对内源性GFP的RNA干扰体系中进一步确证该种抑制作用。利用共转染方法观察该蛋白抑制RNA干扰的剂量效应关系、在不同细胞系中的作用以及对siRNA介导的RNA干扰是否有相同的拮抗作用。结果加入核心蛋白后,萤火虫荧光素酶活性恢复到80%,与空白对照比较有显著性差异(P<0.05)。在绿色荧光蛋白RNA干扰体系中,核心蛋白使绿色荧光蛋白的表达强度明显增加。该种对抗RNA干扰的作用在HepG2、HEK293和HeLa细胞中均存在,且呈剂量依赖关系。在siRNA介导的RNA干扰体系中,加入核心蛋白后萤火虫荧光素酶活性无显著性变化(P>0.05)。结论核心蛋白能够对抗shRNA介导的RNA干扰作用,但不能对抗siRNA介导的RNA干扰作用,这种作用具有普遍性。核心蛋白对抗RNA干扰的作用可能有利于提高丙型肝炎病毒在宿主细胞内的生存能力并导致持续感染,亦可能在丙型肝炎病毒致病机制中发挥重要作用。
- 易敏黄文娟宋彩虹陆水英李升锦陈维贤
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白RNA干扰
