薛亚男
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：扬州大学生物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 缺失pk-1影响AcMNPV启动子表达的分析
- 2015年
- [目的]分析缺失pk-1对AcMNPV早期、晚期及极晚期基因表达的影响。[方法]将egfp基因片段分别插入到pFastBacDual载体上的p10和ph启动子下游,得到供体质粒pBac-Pp10-egfp和pBac-Pph-egfp。PCR扩增ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39启动子片段,插入到pBac-egfp载体上的egfp基因上游,得到供体质粒pBac-Pie1-egfp、pBac-Pie2-egfp、pBac-Plef2-egfp、pBac-Pp6.9-egfp、pBac-Pvp39-egfp。将供体质粒分别转化含缺失pk-1基因的AcMNPV bacmid和Helper质粒的大肠杆菌DH10Bac中,得到一系列重组的AcMNPV bacmid。提取Bacmid DNA,转染Sf9细胞,转染120h后荧光显微镜下观察eGFP蛋白的表达。[结果]缺失pk-1后ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子均能启动下游egfp基因的表达。[结论]缺失pk-1不影响ie1、ie2、lef2、p6.9、vp39、p10、ph启动子启动的基因表达。
- 赵淑玲戴雪娟薛亚男郝佳慧
- 关键词：ACMNPV启动子
- 水稻条纹病毒RNA聚合酶在昆虫细胞中的表达
- 2014年
- [目的]利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)RNA聚合酶(RdRp)基因。[方法]RT-PCR扩增RdRp基因功能区片段,克隆于转移载体p Fast Bac HTb上,转化到大肠杆菌DH10Bac中,得到重组杆状病毒表达载体Bacmid-rp。提取Bacmid-rp DNA,转染Sf9细胞获得重组病毒v Ac-rp。将重组病毒v Ac-rp感染Sf9细胞使目的蛋白在细胞内表达,并利用亲和层析纯化,SDS-PAGE检测RdRp的表达情况。将纯化的RdRp蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot分析RdRp的免疫原性。[结果]RSV RdRp基因功能区能够在Sf9细胞中表达,蛋白分子量约为45k Da,与预测大小一致,且可与RdRp抗血清发生特异性反应。[结论]在真核细胞中成功表达了RSV RdRp,并得到了纯化的RdRp和其多克隆抗体。
- 赵淑玲刘璐璐薛亚男郝佳慧
- 关键词：水稻条纹病毒RDRP杆状病毒表达系统纯化
