刘璐璐
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：扬州大学生物科学与技术学院更多>>
- 发文基金：江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 甲型肝炎病毒VP4-VP2在昆虫细胞膜表面的表达
- 2013年
- 目的:利用杆状病毒表面展示系统将甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)的衣壳蛋白VP4-VP2展示在昆虫细胞膜表面,为甲型肝炎病毒的免疫检测奠定基础。方法:将HAV VP4-VP2基因片段插入杆状病毒膜蛋白基因gp64信号肽序列和水疱口膜炎病毒G蛋白跨膜区基因片段之间得到重组质粒pBac-sp-VP0-VSVtm。利用Bac-to-Bac系统获得含有该融合基因的重组病毒Ac-VP0-VSV。重组病毒感染昆虫Sf9细胞,免疫荧光分析目的蛋白在昆虫细胞的表达。结果:免疫荧光结果显示HAV VP4-VP2蛋白可在Sf9细胞的膜表面大量表达。结论:昆虫细胞膜表面展示系统构建成功,利用该系统HAV VP4-VP2蛋白可在昆虫细胞内表达并被展示到了细胞膜表面。
- 梁昌镛蓝丹丹刘璐璐赵淑玲陈雅婷
- 关键词：甲型肝炎病毒杆状病毒
- 水稻条纹病毒RNA聚合酶在昆虫细胞中的表达
- 2014年
- [目的]利用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)RNA聚合酶(RdRp)基因。[方法]RT-PCR扩增RdRp基因功能区片段,克隆于转移载体p Fast Bac HTb上,转化到大肠杆菌DH10Bac中,得到重组杆状病毒表达载体Bacmid-rp。提取Bacmid-rp DNA,转染Sf9细胞获得重组病毒v Ac-rp。将重组病毒v Ac-rp感染Sf9细胞使目的蛋白在细胞内表达,并利用亲和层析纯化,SDS-PAGE检测RdRp的表达情况。将纯化的RdRp蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,Western blot分析RdRp的免疫原性。[结果]RSV RdRp基因功能区能够在Sf9细胞中表达,蛋白分子量约为45k Da,与预测大小一致,且可与RdRp抗血清发生特异性反应。[结论]在真核细胞中成功表达了RSV RdRp,并得到了纯化的RdRp和其多克隆抗体。
- 赵淑玲刘璐璐薛亚男郝佳慧
- 关键词：水稻条纹病毒RDRP杆状病毒表达系统纯化
