王小武
- 作品数：3 被引量：28H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：黑龙江省科技攻关计划黑龙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪圆环病毒2型去核定位信号ORF2基因的原核表达与初步应用被引量：3
- 2008年
- 根据PCV2-871病毒株的已知序列设计一对引物,PCR扩增其去核定位信号的Cap基因(ORF2),通过BamHⅠ/HindⅢ双酶切位点将其克隆到表达载体pQE-32中,转化大肠杆菌M15。经IPTG诱导表达、SDS-PAGE鉴定,表明去核定位信号的Cap蛋白可以大量表达。Western blot、ELISA鉴定蛋白活性,继而,以重组蛋白为抗原包被ELISA板,对28份临床样品进行检测。结果表明,该蛋白具有良好的抗原活性,可以作为抗原应用于临床样品的检测。
- 苗丽娟符芳王小武陈微晶鲁晶红李曦
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白原核表达
- 猪生殖与呼吸综合征病毒的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR检测被引量：3
- 2008年
- 根据猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白基因核酸序列设计引物,经BLAST比较发现,该引物既可以扩增较早发现的PRRSV毒株,也可以扩增近期发现的在Nsp2基因上有较大变异的PRRSV毒株,以含有该引物扩增序列的重组质粒作为标准品建立了检测PRRSV的SYBR Green-Ⅰ荧光定量PCR方法。结果表明,该方法标准曲线的相关系数大于0.99,敏感性可以达到1×101拷贝/μL,约为普通PCR的100倍;用该方法检测人工感染PRRSV的猪全血,结果阳性检出率为100%。敏感性、特异性和稳定性试验表明,该方法具有很高的敏感性、特异性和稳定性,可以用来快速检测PRRSV。
- 王小武符芳许红喜周艳君童光志李曦
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒SYBR荧光定量PCR
- PRRSV和PCV-2以及PRV多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立被引量：23
- 2008年
- 根据GenBank中登录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白基因、猪圆环病毒2型(PCV-2)rep蛋白基因和猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因的核苷酸序列分别设计了3对特异性引物,成功建立了同时检测PRRSV、PCV-2、PRV的多重SYBR Green-Ⅰ实时荧光PCR方法。敏感性试验结果显示,PRRSV、PCV-2的敏感性可达250拷贝/μL,PRV的敏感性可达500拷贝/μL。表明,该方法具有较好的特异性、重复性和敏感性,可以用于PRRSV、PCV-2和PRV的快速检测。
- 王小武符芳柴政孔令达蔡雪辉宋淑萍许红喜李曦
- 关键词：猪生殖与呼吸综合征病毒猪伪狂犬病病毒
