王家典
- 作品数：5 被引量：29H指数：3
- 供职机构：首都医科大学中医药学院更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金北京市教育委员会科技发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- TwHMGR过表达对雷公藤甲素和雷公藤红素生物合成的影响被引量：7
- 2018年
- 雷公藤3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(Tripterygium wilfordii 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme-A reductase,Tw HMGR,Gen Bank:ALU11310.1 3)是MVA途径中的第一个限速酶,是细胞质中萜类代谢途径中的重要调控位点。为探讨Tw HMGR对雷公藤甲素和雷公藤红素生物合成的影响,对其进行了过表达研究。利用Gateway技术将Tw HMGR的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)构建到过表达载体中,通过基因枪介导过表达载体转入雷公藤悬浮细胞。q RT-PCR结果显示Tw HMGR的基因相对表达量在过表达组显著提高,是空载体组基因相对表达量的1.75倍;UPLC结果显示雷公藤甲素及雷公藤红素含量在过表达组中分别提高为空载组的163.93%和190.04%。本实验中Tw HMGR在雷公藤悬浮细胞中成功过表达,表现为基因相对表达量的上升和雷公藤甲素及雷公藤红素含量的上调,证明了Tw HMGR在雷公藤萜类成分生物合成途径上的正向调节作用,为雷公藤重要活性萜类成分的合成生物学研究奠定了基础。
- 王家典赵瑜君张逸风张逸风卢鋆卢鋆周家伟张睿张睿高伟
- 关键词：过表达雷公藤甲素雷公藤红素基因枪
- 雷公藤MCT基因RNAi对雷公藤萜类活性成分生物合成的影响被引量：6
- 2018年
- MCT是萜类生物合成MEP途径上重要的关键酶,本研究利用Gateway克隆重组技术构建TwMCT基因的RNAi表达载体,得到了大小为484 bp的载体片段。通过基因枪技术将TwMCT RNAi载体转入到雷公藤悬浮细胞。采用UPLC测定雷公藤萜类活性成分的含量,结果显示细胞中雷公藤甲素和雷公藤红素的含量相对于对照组p K7GWIWG2D分别下降了23.4%和42.8%。同时利用q RT-PCR检测TwMCT基因及萜类合成途径上主要基因的表达量,结果表明,相对于对照组p K7GWIWG2D,TwMCT表达量下降了29.2%,TwDXR、TwGGPS、TwHMGR和TwHMGS的相对表达量分别下降了36.3%、31.3%、62.2%和29.1%,但TwDXS的表达量上调了114.2%,而TwFPS没有显著性变化。本研究在体内验证了干扰TwMCT的表达对雷公藤萜类活性成分雷公藤甲素和雷公藤红素的积累有显著抑制作用,为进一步探究MCT基因对雷公藤萜类成分生物合成的调控机制奠定基础。
- 宋雅迪赵瑜君陈上胡添源张睿王家典卢鋆王秀娟高伟黄璐琦
- 关键词：雷公藤雷公藤甲素雷公藤红素
- 红花黄酮类糖基转移酶基因CtUGT49功能表征及酶学特性分析被引量：1
- 2023年
- 红花作为传统的活血化瘀中药,具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节等药理活性。黄酮糖苷是红花植物的主要生物活性组分,糖基转移酶作为活性糖苷化合物生物合成的下游后修饰酶,具有重要的研究意义。该研究基于红花转录组数据分析,挖掘到一条糖基转移酶基因CtUGT49,对其进行了系统的生物信息学分析和酶学性质考察。该基因开放阅读框(ORF)长度为1416 bp,编码471个氨基酸残基,相对分子质量约为52 kDa。系统进化分析表明,该糖基转移酶属于UGT73家族。体外酶促结果显示,CtUGT49可催化柚皮素查尔酮生成樱桃苷和南酸枣苷;催化根皮素生成的主产物为根皮苷和三叶苷,并且具有良好的底物宽泛性。通过蛋白异源表达与纯化得到较为纯净的重组蛋白CtUGT49后,进行CtUGT49催化柚皮素查尔酮的酶学性质考察。结果显示,CtUGT49催化反应的最适pH为7.0,最适温度为37℃,反应8 h后,底物转化率达到最高。采用米氏方程计算CtUGT49的酶活常数Km=209.90μmol·L^(-1),kcat=48.36 s^(-1)。该研究发现的新颖糖基转移酶CtUGT49对于丰富糖基化工具酶库具有重要意义,且能为进一步解析红花黄酮糖苷的糖基化过程奠定基础。
- 蔡鑫博刘楠李佳刘荣骆云峰张逸风王家典吴晓毅黄璐琦
- 关键词：红花糖基转移酶酶学性质
- 防晒霜组方优化及评价
- 2017年
- 目的 筛选和评价防晒霜优化配方.方法 采用正交试验设计,将一定量不同配方的防晒霜涂抹于贴有3M胶带的比色皿上,分别测定其在280～320 nm和320～400 nm之间各波长对应吸光度（A）的算术平均值,并通过比较A值大小,确定防晒效果以及影响防晒效果的主要因素,再将筛选出的优化配方用多点递增紫外辐照的方法进行人体防晒效果测试.结果 含有5种防晒剂的防晒霜处方1的长波紫外线（UVA）吸光度为1.02,中波紫外线（UVB）吸光度为3.62,防晒指数（SPF）为18左右,UVA防护指数等级PA为＋.防晒剂甲氧基肉桂酸辛酯（OMC）、天来施M、芦丁、珍珠粉、黄芩苷均具有防UVA的显著效果,OMC还具有防UVB的显著效果.结论 含5种防晒剂的处方1在UVA和UVB区均有较好的防晒效果.
- 王家典卢鋆崔淦徐俊达邢博宇郭思远龚慕辛
- 关键词：防晒霜正交试验防晒效果
- 右归丸“阴中求阳”配伍对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的作用被引量：16
- 2017年
- 目的探究右归丸及其拆方滋阴和补阳对肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的调节作用,阐释右归丸"阴中求阳"理论的科学内涵。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、右归丸组、滋阴方组和补阳方组5组,每组6只。采用肌肉注射氢化可的松注射液的方法建立大鼠肾阳虚模型。观察各组大鼠体重、胸腺、肾上腺和脾重量变化;采用放免法测定各组大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone,CRH),血清促肾上腺皮质激素(adreno cortico hormones,ACTH)和皮质酮(Corticosterone,Cort)含量。结果右归丸及其拆方对肾阳虚大鼠的体重、胸腺、肾上腺和脾重量有不同程度的改善作用,并且对大鼠下丘脑CRH、血清ACTH和Cort的含量也有调节作用,而右归丸在调节CRH和Cort方面的作用优于滋阴方。结论右归丸及其拆方均具有改善肾阳虚大鼠的作用,可能与调节肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴有关。右归丸治疗作用优于滋阴方或补阳方。
- 刘浩龙王家典卢鋆翟鹏云赵晖李明王蕾
- 关键词：肾阳虚大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴
