张万锋
- 作品数：14 被引量：44H指数：4
- 供职机构：山西农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省青年科技研究基金山西省高等学校大学生创新创业训练项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- miR-186-5p调控猪原代前体脂肪细胞增殖和分化的研究被引量：3
- 2021年
- 旨在探究miR-186-5p对猪原代前体脂肪细胞增殖和成脂分化的调控作用及机制。本研究采集7日龄健康马身猪公猪的颈部皮下脂肪,分离培养马身猪原代前体脂肪细胞;猪原代前体脂肪细胞分为4组,分别转染miR-186-5p模拟物(mimics)及其对照组(mimics NC),miR-186-5p抑制剂(inhibitor)及其对照组(inhibitor NC),用CCK8和划痕试验分析猪原代前体脂肪细胞的增殖效果,油红O染色检测其成脂分化能力,qPCR检测其增殖和成脂分化相关基因的表达水平;预测miR-186-5p的靶基因,用双荧光素酶报告试验检测miR-186-5p与靶基因的相互作用。结果,当猪原代前体脂肪细胞中转染mimics时,miR-186-5p的表达量极显著升高(P<0.01),细胞增殖能力和增殖相关基因:增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinases 4,CDK4)的表达量以及预测靶基因去乙酰化酶2(sirtuins 2,SIRT2)的表达量都极显著降低(P<0.01),而细胞成脂分化能力和成脂分化相关基因:过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)、固醇调节元件结合转录因子1(sterol regulatory element binding transcription factor 1,SREBF1)、CCAAT增强子结合蛋白β(CCAAT enhancer binding proteinβ,C/EBPβ)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein 4,FABP4)、脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase,LPL)的表达量都极显著升高(P<0.01);当猪原代前体脂肪细胞转染inhibitor时,miR-186-5p的表达量极显著降低(P<0.01),细胞增殖能力以及增殖相关基因PCNA和CDK4的表达量、预测靶基因SIRT2的表达量都显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01),而细胞成脂分化能力以及成脂分化相关基因PPARγ、SREBF1、C/EBPβ、FABP4、LPL的表达量都极显著降低(P<0.01)。转染miR-186-5p mimics可以显著抑制SIRT23′UTR野生型双荧光素酶报告载体(SIRT2-Wt-psiCHECK-2)中荧光素酶的活性,但不影响SIRT23′UTR突变型�
- 蔡春波刘敏杨阳张万锋高鹏飞曹果清李步高郭晓红
- 关键词：增殖成脂分化靶基因
- UCP3基因调控C2C12细胞增殖的研究被引量：2
- 2021年
- [目的]本文旨在探究UCP3基因对C2C12成肌细胞增殖的调控作用。[方法]构建慢病毒包被的UCP3基因过表达和干扰载体,转染C2C12细胞,分别促进和抑制UCP3基因的表达;通过CCK-8和EDU染色试验检测C2C12细胞的增殖效果,采用qRT-PCR技术检测细胞增殖和凋亡的相关基因表达量的变化,利用Western Blot方法检测细胞增殖关键蛋白PCNA的变化。[结果]CCK-8和EDU染色试验结果发现,与过表达对照组(OE-NC)相比,UCP3基因过表达组(OE-UCP3)细胞的增殖速度极显著降低(P<0.01),细胞增殖相关基因PCNA和Ki67的mRNA表达量极显著降低(P<0.01),细胞凋亡相关基因Bax和caspase3的表达量极显著升高(P<0.01);细胞增殖关键蛋白PCNA的含量也极显著降低(P<0.01)。与干扰对照组(Sh-NC)相比,UCP3基因干扰组(Sh-UCP3)细胞的增殖速度显著增加(P<0.05),细胞增殖相关基因PCNA和Ki67的mRNA表达量极显著增加(P<0.01),细胞凋亡相关基因Bax和caspase3的表达量显著降低(P<0.05),细胞增殖关键蛋白PCNA的含量也显著升高(P<0.05)。[结论]UCP3基因可能通过抑制细胞增殖基因PCNA和Ki67的表达,促进细胞凋亡基因Bax和caspase3的表达而抑制C2C12细胞的增殖。该结果为骨骼肌中UCP3的功能研究提供基础数据。
- 何志强黑伟张万锋张燕伟吴怡琦蔡春波杨阳高鹏飞李步高郭晓红
- 关键词：C2C12细胞细胞增殖细胞凋亡
- CREB-H基因在猪不同组织中表达谱及肝脏中的表达规律
- 2019年
- 本研究旨在分析环腺苷酸应答元件结合蛋白H(cyclic AMP-responsive element-binding protein 3-like 3,CREB-H)在猪不同组织中的表达谱及其在马身猪和大白猪肝脏中的发育性表达规律。采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测1日龄猪12个组织(心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、小脑、下丘脑、背最长肌、股肌和腰肌)中CREB-H基因的表达谱,以及CREB-H在1、30、60、90、120、150和180日龄马身猪和大白猪肝脏中的表达规律。结果显示,CREB-H基因mRNA在马身猪的12个组织中广泛表达,其中在肝脏和小肠中高表达;CREB-H蛋白在肝脏组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),在心脏、脾脏和小脑中不表达。猪肝脏CREB-H基因mRNA和蛋白的发育表达受日龄、品种、品种与日龄相互作用的影响(P<0.01)。马身猪和大白猪肝脏中CREB-H基因mRNA和蛋白的表达量均在1日龄时达到最大值。在各发育阶段,马身猪CREB-H蛋白的表达量均极显著高于大白猪(P<0.01),且CREB-H主要在猪肝脏中表达。CREB-H在两猪种肝脏中的表达存在时空差异,可能与猪在不同发育期的脂质代谢能力有关,本试验结果为研究猪的脂质代谢调控机制提供一定的理论依据。
- 郭晓红刘翠翠李萌张万锋秦本源刘敏蔡春波高鹏飞曹果清李步高
- 关键词：肝脏表达谱
- 基于全基因组重测序对晋汾白猪单核苷酸多态性位点鉴定和筛选
- 2023年
- 旨在鉴定晋汾白猪单核苷酸多态性位点(SNP)并分析其特征,筛选特异性SNPs。本研究对30头晋汾白猪(9头公猪和21头母猪)耳组织DNA进行全基因组重测序,利用GATK和VEP软件检测变异位点和进行注释分类。整合晋汾白猪与其亲本的基因组重测序数据,基于等位基因频率检测晋汾白猪特异SNPs位点,并进行功能富集分析。经测序以及数据过滤后共获得约1761.73 Gb的Clean reads,Q30均值为91.77%,平均比对率为75.61%,平均覆盖度为14.7 X。去冗余后共得到14680807个SNPs,大部分SNPs位于1号染色体和基因非编码区。基于等位基因频率筛选到87366个晋汾白猪特异SNPs,主要分布于2号染色体和内含子区。此外,外显子区的错义突变SNPs位点分布于343个基因,这些基因显著富集于细胞器和细胞器组分等GO生物学过程,以及肠道免疫、脂肪酸降解等KEGG信号通路。利用全基因组重测序和生物信息学技术分析了晋汾白猪SNPs与其特征,并筛选了87366个特异SNPs位点,将为晋汾白猪分子标记开发、种质鉴定、分子育种等工作奠定研究基础。
- 路畅董磊张万锋高鹏飞郭晓红蔡春波曹果清李步高
- 关键词：单核苷酸多态性
- 广灵驴成纤维细胞系的建立及其相关生物学特性研究被引量：6
- 2018年
- 试验旨在建立广灵驴成纤维细胞库,以期在细胞水平上对广灵驴进行保护。本研究以1月龄广灵驴耳缘皮肤组织为试验材料,采用组织块贴壁法进行成纤维细胞培养,建立了广灵驴耳缘皮肤组织成纤维细胞系,并对其相关生物学特性进行了鉴定。结果发现,试验所建立的广灵驴成纤维细胞系大多数细胞呈长梭形,部分细胞呈三角状或星型。在培养过程中,广灵驴原代成纤维细胞在贴壁4d时开始有细胞从组织边缘游离出来,贴壁14d后,细胞汇合率达到80%,可以进行第一次传代培养;细胞生长态势良好,生长曲线呈典型的S型曲线;细胞冻存复苏后活率有所下降,但生长状态良好。细胞分裂中期染色体数2n=62,说明成功建立了广灵驴成纤维细胞系。通过本方法建立的广灵驴成纤维细胞系为后续广灵驴的相关研究奠定了基础。
- 张旭乐宝玉成志敏张宁芳张万锋郭玉龙刘泽军蔡明岐张琪琪高鹏飞郭晓红李步高曹果清
- 关键词：广灵驴成纤维细胞生物学特性
- NR2F2基因调控猪PK15细胞增殖和凋亡的研究
- 2023年
- 旨在探究NR2F2基因对猪PK15细胞增殖和凋亡的影响。本研究在猪PK15细胞中过表达NR2F2基因,通过qRT-PCR、Western blot、CCK-8、EdU、流式细胞术、划痕试验等方法检测了过表达NR2F2基因对细胞增殖的影响;采用CO-IP技术验证NR2F2与Smad4蛋白结合能力;用qRT-PCR方法检测了NR2F2基因对Smad 4基因表达以及下游基因Cyclin B、CDK1、CDK4、Cyclin D 1表达的影响;挽救试验过表达NR2F2基因且干扰Smad 4基因检测下游基因及增殖基因Ki67、PCNA的表达。结果发现,过表达NR2F2基因极显著上调了Ki 67基因的表达(P<0.01),显著上调了PCNA的表达(P<0.05),促进了细胞周期的进程,抑制了细胞凋亡,促进了细胞的增殖。CO-IP结果证明了NR2F2与Smad4蛋白物理性结合,且发现过表达NR2F2基因后,Smad 4基因表达显著上升(P<0.01),Smad 4基因调控的下游基因Cyclin B、CDK1、CDK4、Cyclin D 1表达显著升高(P<0.01);干扰NR2F2基因后,Smad 4基因表达显著下降(P<0.01),Smad 4基因调控的下游基因表达显著降低(P<0.01)。挽救试验发现,过表达NR2F2基因后,干扰Smad 4基因的表达,能显著降低Cyclin D1、Cyclin B、CDK 1以及Ki67、PCNA的表达(P<0.01,P<0.05)。本研究结果表明,过表达NR2F2基因后促进了细胞的增殖,抑制凋亡,且NR2F2蛋白能与Smad4蛋白结合并影响Smad 4基因的表达,进而影响下游基因的表达。
- 张万锋赵天枝李娇尤紫薇杨阳蔡春波高鹏飞曹果清郭晓红李步高
- 关键词：细胞增殖PK15细胞
- 基于RNA-Seq技术筛选影响猪肌纤维性状的候选基因被引量：12
- 2019年
- 旨在探究影响肌纤维性状的候选基因和信号通路。本研究以马身猪和大白猪为研究对象,采用HE染色法分析6月龄马身猪和大白猪背最长肌肌纤维直径和密度,利用RNA-Seq分析马身猪和大白猪背最长肌组织中基因表达情况,并对差异表达基因进行GO和KEGG富集分析,再通过qRT-PCR验证RNA-Seq结果的准确性。结果显示,马身猪背最长肌肌纤维直径极显著低于大白猪(P<0.01),而肌纤维密度极显著高于大白猪(P<0.01)。转录组测序结果显示,在6月龄马身猪和大白猪背最长肌中,差异倍数在2倍以上的基因共105个,其中,马身猪相对于大白猪上调的基因有55个,下调的基因有50个。GO富集分析表明,差异表达基因主要富集在与线粒体相关的细胞组分和骨骼肌分化有关的生物学过程中;KEGG分析结果显示,这些差异表达基因主要参与到与氧化磷酸化有关的信号途径。qRT-PCR和RNA-Seq对6个DEGs表达情况的检测结果表明它们的表达趋势相同,说明RNA-Seq结果准确可靠。结合差异基因表达丰度、GO和KEGG富集分析结果,本研究发现,MYL3、MYH3、MYH6基因通过影响肌纤维的组成而影响肌纤维特性,ND6基因通过参与线粒体氧化磷酸化过程影响肌纤维类型,MICU2基因通过维持线粒体Ca^(2+)浓度的稳态影响细胞功能,编码转录因子的EGR1和FOS基因通过调节细胞增殖、分化和凋亡等过程影响肌肉生长发育。本研究初步揭示了造成马身猪和大白猪肌纤维性状差异的主要原因,为猪肉品质的改善提供了相应的理论依据。
- 成志敏张宁芳王媛媛乐宝玉张万锋宋鹏康郭晓红高鹏飞蔡春波曹果清李步高
- 关键词：候选基因RNA-SEQ
- ‘马身猪’皮下前体脂肪细胞的分离培养及成脂诱导分化研究被引量：1
- 2019年
- 旨在建立‘马身猪’皮下前体脂肪细胞的体外培养体系,探讨其分化过程中脂质合成及代谢相关基因的表达。对8日龄仔猪的颈部皮下脂肪组织进行采样,用Ⅰ型胶原酶进行消化,分离出原代前体脂肪细胞,进行传代和诱导分化;在此过程中观察细胞的形态、绘制细胞的生长曲线,对诱导后的细胞进行油红O染色,并采用qRTPCR法检测脂肪沉积相关基因PPARγ、LPL、FABP4、FABP3和脂肪代谢相关基因ATGL与HSL的mRNA表达变化规律。结果显示,分离出的细胞形态呈不规则梭形,生长曲线呈S型,诱导15d后在细胞内有大脂滴融合,经油红O染色呈红色;PPARγ、LPL、FABP4、FABP3和HSL基因在诱导2d时表达量达到最高,极显著高于其他时间段(P<0.01),随后降低,到诱导10d时表达量与0d时基本无差异(P>0.05)。ATGL基因表达量在诱导2d时与对照组0d相比无差异(P>0.05),诱导4d后极显著降低(P<0.01),诱导8d时表达量最低。
- 刘敏张雪莲张万锋何志强黑伟蔡春波高鹏飞曹果清李步高郭晓红
- 关键词：诱导分化基因表达
- 猪骨骼肌卫星细胞分离培养、鉴定及其生物学特性被引量：9
- 2020年
- 【目的】建立猪骨骼肌卫星细胞体外分离、纯化及鉴定的方法,并对其生物学特性进行探讨,为进一步研究猪肌肉生长发育提供良好的细胞模型。【方法】选取1日龄仔猪背最长肌为材料,无菌状态下将背最长肌剪碎为肉糜状。此后采用浓度为0.2%的Ⅰ型胶原酶消化90 min,再加入浓度为0.25%的胰蛋白酶37℃联合消化30 min。经终止消化、过滤、重悬后将分离得到的细胞置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。选用反复差速贴壁法对骨骼肌卫星细胞进行纯化,第一次纯化选择在细胞接种2 h后,将未贴壁细胞转移至新培养皿。上清液继续培养18 h后,对卫星细胞进行第二次差速贴壁纯化。当细胞密度达70%-80%时可对细胞进行传代或冻存处理。利用细胞免疫荧光技术检测P2代卫星细胞标志基因Pax7、MyoD的蛋白表达情况,并绘制卫星细胞生长曲线。分别添加不同诱导分化液使卫星细胞定向分化为肌细胞、脂肪细胞、成骨细胞,检测成肌分化标志基因MHC的免疫荧光,鉴定卫星细胞肌管形成情况;油红O染色及油红O定量鉴定卫星细胞诱导成脂分化效果;茜素红染色鉴定卫星细胞成骨分化能力,qRT-PCR检测成肌、成脂、成骨进程中关键基因的表达。【结果】通过两步酶消化和反复差速贴壁法分离纯化得到了纯度较高的卫星细胞,刚分离的细胞折光性强,贴壁后呈梭形或纺锤形,此后细胞延展并开始快速增殖。卫星细胞特异标志蛋白Pax7、MyoD细胞免疫荧光鉴定结果呈阳性,表明分离细胞为骨骼肌卫星细胞。骨骼肌卫星细胞增殖过程经潜伏期、生长期最终达到平台期,细胞生长曲线呈"S"型。当细胞生长至90%密度时,卫星细胞会出现自融合现象。对分离的骨骼肌卫星细胞成肌诱导分化后,可见邻近卫星细胞融合形成大量粗长肌管,多核肌管呈方向性排列,成肌标志蛋白MHC染色呈阳性。qRT-PCR结果显示
- 秦本源杨阳张燕伟刘敏张万锋王海珍吴怡琦张雪莲蔡春波高鹏飞郭晓红李步高曹果清
- 关键词：卫星细胞分化
- 杏鲍菇菌糠生物饲料的研究被引量：7
- 2017年
- 本实验以杏鲍菇菌糠为研究对象,接种纤维降解菌和酵母菌的不同组合在最佳尿素浓度下对菌糠饲料发酵,分析发酵后菌糠饲料的营养成分变化,以期发现适合发酵杏鲍菇菌糠的菌种及组合。结果表明,尿素添加水平为0.5%时米曲霉(Ⅰ)组、白腐真菌(Ⅴ)组、白腐真菌+酵母AQ(Ⅵ)组和白腐真菌+产朊假丝酵母(Ⅶ)组,以及尿素添加水平为1%时米曲霉(Ⅰ)组发酵杏鲍菇菌糠,均提高了其CP含量,同时降低NDF含量,从而提高了菌糠饲料的营养价值。特别是,菌种组合白腐真菌+产朊假丝酵母能够使其NDF含量降低59%以上,可用于杏鲍菇菌糠生物饲料的生产。
- 闫芳张万锋易树洪裴彩霞
- 关键词：杏鲍菇菌糠微生物发酵体外产气甲烷
