覃盼
- 作品数：3 被引量：11H指数：1
- 供职机构：浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 利用高通量测序技术分析猪抗体库的组成特征
- 2021年
- 宿主适应性免疫系统通过产生种类多样的抗体保护其免受病原侵害,而传统的低通量测序方法无法完成对宿主抗体库的测序。本研究通过多重聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)从猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中扩增获得猪B细胞受体(B cell receptor,BCR)重链文库,经二代测序建立并分析健康猪抗体库的组成特征。结果表明:3周龄仔猪在正常情况下对抗体库IGHV、IGHD、IGHJ基因使用具有偏好性,其中IGHV1-4和IGHV1S2是使用最频繁的2种V(variable)基因,有8种IGHV基因的使用频率之和超过80%,另外发现重链互补决定区3(heavy chain complementarity determining region 3,HCDR3)的长度呈正态分布,平均长度约为15.8个氨基酸。本研究成功建立了适用于猪抗体库的高通量测序方法,可为未来进一步深入理解不同状态(生理、病理)猪抗体库的特异性组成提供有效的研究方法。
- 吉春苗王斌覃盼黄耀伟
- 关键词：抗体库高通量测序
- 中国东部5省猪呼肠孤病毒流行病学调查与分析被引量：1
- 2017年
- 从核酸和抗体水平对我国东部5省猪呼肠孤病毒的流行情况进行研究。针对L1基因设计特异性引物,成功建立了猪呼肠孤病毒巢式反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法,利用该方法对2013—2014年从浙江、江西、山东、河南、黑龙江等5省共58个猪场采集的224份腹泻猪粪便样品进行检测。同时,建立了血清型3型哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)中和抗体检测方法和以病毒衣壳蛋白δ1重组蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的血清学检测方法,并利用该方法分别测定了37份腹泻猪血清样品中和抗体滴度和抗σ1 Ig G抗体水平。结果表明,从55个猪场中共检出147份阳性样品,猪场阳性率和样品阳性率分别为94.8%和65.6%。在37份血清样本中,中和抗体效价高于4的有33份(89.2%);而采用间接ELISA方法测定在450 nm处的吸光度值高于临界值(0.32)的样品为32份(86.49%),二者具有较好的相关性:说明建立的间接ELISA检测方法比较可靠。此外,利用建立的间接ELISA方法检测了2015—2016年从江西、河南、浙江、黑龙江和山东等省收集的262份具有腹泻症状的母猪、初生仔猪和3周龄断奶仔猪血清样品。结果表明,抗σ1 Ig G抗体检出率为84.4%。根据核酸和抗体水平检测结果,我们认为呼肠孤病毒广泛存在于中国东部5省各个猪场中,应该引起足够的重视。
- 覃盼王经纬王斌雷喜梅李龙黄耀伟
- 关键词：L1基因中和抗体流行病学调查
- 猪丁型冠状病毒荧光定量RT-PCR与S1蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用被引量：10
- 2017年
- 最近,新发现的猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)可导致仔猪腹泻,亟待建立有效准确的核酸及血清学检测方法并调查猪场的PDCo V感染情况。本研究采用针对病毒M基因的探针荧光定量RT-PCR检测方法,对2014-2015年间收集的河南、湖南、浙江、江西、安徽、河北、黑龙江、江苏、山东和上海等10个省市收集的共254份腹泻仔猪小肠匀浆或粪便样本进行检测,共检出11份PDCo V阳性样本,总阳性率为4.33%。采用在昆虫细胞表达纯化的PDCo V囊膜S1蛋白为包被抗原,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测2015-2016年间收集的来自江苏、湖南、浙江等7个省份的609份具有腹泻症状的猪血清样品,抗PDCo V S1抗体检出率为44.17%(269/609)。上述建立的两种方法分别针对病毒的RNA或抗体对PDCo V进行特异性检测,可以应用于PDCo V流行情况的监控。
- 王经纬雷喜梅覃盼赵鹏伟王斌王逸雯李懿婷金颢蕊李龙黄耀伟
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR
