王斌
- 作品数:4 被引量:15H指数:2
- 供职机构:浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所更多>>
- 发文基金:国家重点基础研究发展计划浙江省重大科技专项基金更多>>
- 相关领域:农业科学更多>>
- 利用高通量测序技术分析猪抗体库的组成特征
- 2021年
- 宿主适应性免疫系统通过产生种类多样的抗体保护其免受病原侵害,而传统的低通量测序方法无法完成对宿主抗体库的测序。本研究通过多重聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)从猪外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中扩增获得猪B细胞受体(B cell receptor,BCR)重链文库,经二代测序建立并分析健康猪抗体库的组成特征。结果表明:3周龄仔猪在正常情况下对抗体库IGHV、IGHD、IGHJ基因使用具有偏好性,其中IGHV1-4和IGHV1S2是使用最频繁的2种V(variable)基因,有8种IGHV基因的使用频率之和超过80%,另外发现重链互补决定区3(heavy chain complementarity determining region 3,HCDR3)的长度呈正态分布,平均长度约为15.8个氨基酸。本研究成功建立了适用于猪抗体库的高通量测序方法,可为未来进一步深入理解不同状态(生理、病理)猪抗体库的特异性组成提供有效的研究方法。
- 吉春苗王斌覃盼黄耀伟
- 关键词:抗体库高通量测序
- 中国东部5省猪呼肠孤病毒流行病学调查与分析被引量:1
- 2017年
- 从核酸和抗体水平对我国东部5省猪呼肠孤病毒的流行情况进行研究。针对L1基因设计特异性引物,成功建立了猪呼肠孤病毒巢式反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测方法,利用该方法对2013—2014年从浙江、江西、山东、河南、黑龙江等5省共58个猪场采集的224份腹泻猪粪便样品进行检测。同时,建立了血清型3型哺乳动物呼肠孤病毒(mammalian orthoreovirus,MRV)中和抗体检测方法和以病毒衣壳蛋白δ1重组蛋白为包被抗原的间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的血清学检测方法,并利用该方法分别测定了37份腹泻猪血清样品中和抗体滴度和抗σ1 Ig G抗体水平。结果表明,从55个猪场中共检出147份阳性样品,猪场阳性率和样品阳性率分别为94.8%和65.6%。在37份血清样本中,中和抗体效价高于4的有33份(89.2%);而采用间接ELISA方法测定在450 nm处的吸光度值高于临界值(0.32)的样品为32份(86.49%),二者具有较好的相关性:说明建立的间接ELISA检测方法比较可靠。此外,利用建立的间接ELISA方法检测了2015—2016年从江西、河南、浙江、黑龙江和山东等省收集的262份具有腹泻症状的母猪、初生仔猪和3周龄断奶仔猪血清样品。结果表明,抗σ1 Ig G抗体检出率为84.4%。根据核酸和抗体水平检测结果,我们认为呼肠孤病毒广泛存在于中国东部5省各个猪场中,应该引起足够的重视。
- 覃盼王经纬王斌雷喜梅李龙黄耀伟
- 关键词:L1基因中和抗体流行病学调查
- 猪流行性腹泻病毒血清学及临床诊断方法研究进展被引量:4
- 2018年
- 猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是急性、高度传染性猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)的致病原,可感染所有日龄的猪,并在哺乳仔猪中引起较高的死亡率。当前使用的疫苗难以对感染仔猪提供有效保护。因此,研制高效安全的PEDV疫苗是防控PED的关键。同时,建立敏感有效的血清学检测方法对于PEDV感染的临床诊断以及免疫后体液免疫应答水平的监测与评估至关重要。本文对当前主要的PEDV血清学研究结果进行概述,并对感染或免疫后抗体消长规律进行讨论,以期为PEDV的诊断与防控提供参考。
- 雷喜梅杨永乐许姝雅赵鹏伟王斌黄耀伟
- 关键词:猪流行性腹泻病毒血清学临床诊断方法疫苗
- 猪丁型冠状病毒荧光定量RT-PCR与S1蛋白间接ELISA检测方法的建立及应用被引量:10
- 2017年
- 最近,新发现的猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCo V)可导致仔猪腹泻,亟待建立有效准确的核酸及血清学检测方法并调查猪场的PDCo V感染情况。本研究采用针对病毒M基因的探针荧光定量RT-PCR检测方法,对2014-2015年间收集的河南、湖南、浙江、江西、安徽、河北、黑龙江、江苏、山东和上海等10个省市收集的共254份腹泻仔猪小肠匀浆或粪便样本进行检测,共检出11份PDCo V阳性样本,总阳性率为4.33%。采用在昆虫细胞表达纯化的PDCo V囊膜S1蛋白为包被抗原,建立间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,检测2015-2016年间收集的来自江苏、湖南、浙江等7个省份的609份具有腹泻症状的猪血清样品,抗PDCo V S1抗体检出率为44.17%(269/609)。上述建立的两种方法分别针对病毒的RNA或抗体对PDCo V进行特异性检测,可以应用于PDCo V流行情况的监控。
- 王经纬雷喜梅覃盼赵鹏伟王斌王逸雯李懿婷金颢蕊李龙黄耀伟
- 关键词:实时荧光定量RT-PCR