刘亚伟
- 作品数：8 被引量：50H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军第一军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金军队杰出人才基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白被引量：13
- 2003年
- 目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。
- 李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇
- 关键词：P38结合蛋白靶蛋白
- 人His-AWP1融合蛋白表达载体的构建及其在原核生物的表达被引量：7
- 2003年
- 目的 获取人His-AWP1融合蛋白,为下阶段深入研究AWP1的结构、功能及筛取与其相互作用的蛋白打下基础 方法 应用逆转录聚合酶链反府(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞系中克隆AWP1 cDNA,并将其重组于能表达6个组氨酸残基的原核表达质粒DET-14b中。经酶节、序列鉴定,选择正确重组克隆,将其质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用Ni2+-NTA His柱纯化和SDS-PAGE分离蛋门。结果克隆到一个627 bp的AWP1 cDNA片段.重组质粒目的DNA测序正确.纯化出了一个分子量约为38 kD的融合蛋白。结论用基因工程方法在原核细胞表达并成功纯化出His-AWP融合蛋白。
- 莫永炎曹永宽刘亚伟龚小卫姜勇
- 关键词：ECV304细胞
- 用T7噬菌体筛选系统筛选TLR4胞浆内段的结合蛋白
- 为了研究hTLR4的功能及筛选与其相互作用的蛋白,以hTLR4胞浆内段为靶蛋白,通过结合→洗脱→扩增3个步骤,用T7噬茵体展示筛选系统筛选了人肺cDNA文库,结果获得了9个与靶蛋白hTLR4C有结合关系的序列,其中6个克...
- 刘靖华赵克森姜勇李志杰刘亚伟赵善超黄浩龚小卫秦清和邓鹏孙学刚
- 关键词：TOLL样受体4蛋白质相互作用噬菌体结合蛋白
- 文献传递
- 人Toll样受体4胞浆内段融合蛋白表达载体的构建与表达被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。
- 刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇
- 关键词：TOLL样受体融合蛋白蛋白表达
- 人FAT10与PRAK的相互作用研究
- 丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号转导通路调节着细胞的生长、分化、分裂、对环境的应激适应、炎症反应等多种重要的细胞生理／病理过程。目前在哺乳动物细胞已发...
- 刘亚伟
- 关键词：FAT10泛素信号通路蛋白相互作用细胞周期
- 文献传递
- 用T7噬菌体展示筛选系统筛选与靶蛋白相结合的蛋白被引量：1
- 2003年
- 刘靖华李志杰刘亚伟黄浩邓鹏秦清和赵善超赵克森姜勇
- 关键词：靶蛋白
- 人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备被引量：8
- 2003年
- 为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗 。
- 莫永炎刘亚伟王静珍邓鹏秦清和杨志刚姜勇
- 关键词：信号传导分子原核表达多克隆抗体
