张瑾
- 作品数：9 被引量：7H指数：1
- 供职机构：石家庄市第二医院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省教育厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CRE-decoy ODN对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞中相关信号分子的影响
- 2009年
- 目的:以环磷酸腺苷(cAMP)反应元件结合蛋白(Cyclic-AMP response-element-binding protein,CREB)为靶点,体外合成CRE转录因子诱骗寡核苷酸(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoy ODN),观察其对慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的人神经母细胞瘤细胞株(SK-N-SH)细胞cAMP含量、磷酸化CREB-1及CREB-1表达的影响,为在分子水平上寻找阿片类依赖的干预靶点提供实验依据。方法:体外合成CRE-decoy ODN,以DOTAP(1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium propane)为转移介质,将CRE-decoy ODN与慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK-N-SH细胞共同孵育,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测CRE-decoy ODN与转录因子CREB结合的序列特异性;采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测CRE-decoy ODN细胞摄取;放射免疫分析法(RIA)检测细胞cAMP含量;Western blot检测CREB-1及磷酸化CREB-1表达。结果:单纯吗啡组较生理氯化钠溶液对照组细胞cAMP水平显著升高(P<0.05),单纯CRE-decoy ODN组与生理氯化钠溶液对照组无明显差异(P>0.05),但能明显抑制吗啡及纳络酮组的cAMP水平(P<0.05);单纯吗啡组与生理氯化钠溶液对照组比较,磷酸化CREB-1表达明显增高(P<0.01),吗啡+纳络酮组较单纯吗啡组轻度降低,与对照组比较仍有显著差异(P<0.01);CRE-decoyODN可抑制单纯吗啡组及吗啡+纳络酮组磷酸化CREB-1表达明显增高(P均<0.05)。结论:CRE-decoyODN可抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断引起SK-N-SH细胞cAMP和磷酸化CREB表达的升高。
- 段立华张瑾
- 关键词：吗啡ODN
- CREB诱骗寡核苷酸抑制吗啡依赖诱导SK-N-SH细胞神经元型一氧化氮合酶及fosB基因表达上调
- 2005年
- 目的研究转录因子CREB的结合位点cAMP反应元件(cAMPresponseelement,CRE)的诱骗寡核苷酸(CREtranscriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide,CREdecoyODN)对吗啡依赖SKNSH细胞的神经元型一氧化氮合酶(Neuronalnitricoxidesynthase,nNOS)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法建立吗啡依赖SKNSH细胞模型,体外合成含CRE序列的寡核苷酸,作为CREdecoyODN,与阳离子脂类N[1(2,3dioleoyloxy)propyl]N,N,Ntrimethylammoniummethylsulfate(DOTAP)混合后导入细胞。采用放射自显影检测细胞内参入的CREdecoyODN。采用电泳迁移率改变分析(Electrophoresismobilityshiftassay,EMSA)及RTPCR技术,分别检测CREdecoyODN对吗啡依赖诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响。结果CREdecoyODN可在细胞内稳定存在,特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞CREB的DNA结合活性升高、nNOS和fosBmRNA表达上调。结论CREdecoyODN通过特异抑制吗啡依赖SKNSH细胞的CREB的DNA结合活性而下调nNOS及fosBmRNA表达。
- 苏彦君丛斌张国忠张瑾姚玉霞李淑瑾付丽红
- 关键词：一氧化氮合酶FOSB
- CRE-decoy ODN对慢性吗啡诱导SK-N-SH细胞CCK及fosB mRNA表达上调的抑制作用
- 2005年
- 目的:研究以转录因子cAMP反应元件结合蛋白(CREB)为靶点的CRE -decoyODN对慢性吗啡诱导SK -N -SH细胞胆囊收缩素(CCK)及fosBmRNA表达上调的抑制作用。方法:体外合成含cAMP反应元件CRE序列TGACGTCA的单链寡核苷酸,将自身杂交形成发卡结构。将终浓度为15 0nmol/L的CRE -decoyODN与SK -N-SH细胞孵育1h后,加入终浓度为10 0 μmol/L的吗啡作用4 8h ,随后加入终浓度为10 μmol/L的纳络酮,戒断15min。采用电泳迁移率改变分析(EMSA)检测CRE -decoyODN与CREB结合的序列特异性及其对慢性吗啡诱导的CREB的DNA结合活性升高的影响;细胞掺入的CRE -decoyODN用酚:氯仿法提取,经2 0 %非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测;采用RT -PCR检测CCK及fosBmRNA表达。结果:慢性吗啡作用及纳络酮急性戒断使SK-N -SH细胞CREB的DNA结合活性、CCK和fosBmRNA表达明显升高,CRE -decoyODN可特异抑制其升高。结论:CRE -decoyODN通过特异抑制慢性吗啡诱导SK -N -SH细胞CREB的DNA结合活性而下调CCK及fosBmRNA表达。
- 苏彦君丛斌张国忠张瑾姚玉霞李淑瑾付丽红
- 关键词：吗啡OLIGODEOXYNUCLEOTIDE
- 吗啡长时程作用对培养SK-N-SH细胞表达fosB基因的影响
- 2005年
- 目的探讨吗啡长时程作用时SK-N-SH细胞fosB基因表达的改变。方法建立慢性吗啡依赖SK-N-SH细胞模型,分别采用放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)、电泳迁移率改变分析(electrophoresis mobility shift assay,EMSA)和RT-PCR检测cAMP(cyclic adenosine3′,5′-monophosphate)、CREB(cyclic AMP-responsive element-binding protein)的DNA结合活性和fosBmRNA表达。结果吗啡长时程作用SK-N-SH细胞CREB的DNA结合活性及fosBmRNA水平升高。结论吗啡长时程作用诱导SK-N-SH细胞fosB基因表达上调可能通过CREB的DNA结合活性升高而调控。
- 苏彦君张国忠丛斌张瑾李淑瑾姚玉霞付丽红
- 关键词：吗啡SK-N-SH细胞CREBFOSB
- 多沙唑嗪对映体对麻醉猫心血管功能的选择性作用被引量：1
- 2011年
- 目的研究多沙唑嗪对映体对麻醉猫心血管功能的影响。方法采用八道生理仪记录麻醉猫股动脉血压、心率以及左心室收缩压、左心室舒张末期压和左心室内压最大变化率(±dp/dtmax)。结果十二指肠给予右旋多沙唑嗪[(+)doxazosin,(+)DOX]0.03～1.0 mg.kg-1剂量依赖性降低麻醉猫收缩压、舒张压、平均动脉压和左心室收缩压(P<0.05)。十二指肠给予同等剂量的左旋多沙唑嗪[(-)doxazosin,(-)DOX]和消旋多沙唑嗪[(±)doxazosin,(±)DOX]对麻醉猫收缩压、舒张压、平均动脉压和左心室收缩压无影响(P>0.05)。3种药物对左心室舒张末期压、左心室-dp/dt、左心室+dp/dt和心率无影响(P>0.05)。结论麻醉猫十二指肠给药时,(+)DOX降低动脉血压并抑制心室收缩功能,相同剂量的(-)DOX无作用;提示DOX的手性结构对药物的心血管效应具有明显的影响。
- 段立华田河林张瑾卢海刚任雷鸣
- 关键词：多沙唑嗪对映体左心室内压心率
- 转录因子CREB激活介导吗啡依赖SK-N-SH细胞的nNOS及fosB基因表达的调控机制被引量：5
- 2005年
- 目的 探讨吗啡依赖的SK- N -SH细胞表达神经元型一氧化氮合酶 (neuronalnitricoxidesynthase ,nNOS)及fosB基因的调控机制。方法 建立吗啡依赖及戒断细胞模型 ,体外合成含cAMP反应元件 (cAMPresponseelement ,CRE)序列的寡核苷酸 ,经硫代磷酸化修饰 ,作为单链寡核苷酸 (CRE transcriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide ,CRE decoyODN)。分别采用电泳迁移率改变分析 (electrophoresismobilityshiftassay ,EMSA)及RT -PCR技术 ,检测CRE decoyODN对吗啡依赖及纳络酮急性戒断诱导的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA表达的影响。结果 吗啡依赖及纳络酮急性戒断使SK- N- SH细胞的CREB的DNA结合活性、nNOS及fosBmRNA明显升高 ,CRE decoyODN可特异抑制上述指标升高。结论 CREB的激活介导了吗啡依赖SK- N
- 苏彦君丛斌张国忠张瑾李淑瑾姚玉霞付丽红
- 关键词：SK-N-SH细胞吗啡依赖NNOSCREBFOSB转录因子
- 外源CRE顺式元件对慢性吗啡作用SK-N-SH细胞CREB蛋白表达及DNA结合活性的影响被引量：1
- 2005年
- 目的: 研究以cAMP反应元件结合蛋白 (cAMPresponseelementbindingprotein,CREB)为靶点的CREB转录因子诱骗 (CRE transcriptionfactordecoyoligodeoxynucleotide、CRE decoyODN)对慢性吗啡作用SK N SH细胞CREB相关指标的影响.方法: 体外合成含cAMP反应元件 (cAMPresponseelement,CRE)的单链寡核苷酸,以DOTAP为转移介质,将CRE decoyODN与慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK N SH细胞共同孵育,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影检测CRE decoyODN细胞掺入;EMSA检测CRE decoyODN与转录因子CREB结合的特异性以及其对慢性吗啡作用SK N SH细胞CREB的DNA结合活性影响;WesternBlot检测CREB 1及磷酸化CREB 1蛋白表达.结果: 以DOT AP为介质,将CRE decoyODN成功导入SK N SH细胞;慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断使SK N SH细胞CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1 蛋白表达明显增高 (P值均<0 01),CREB 1蛋白无明显改变,CRE decoyODN可抑制CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1蛋白表达的改变(P<0 01),对CREB 1蛋白表达无明显影响.结论: CRE de coyODN可特异抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断SK N SH细胞CREB的DNA结合活性和磷酸化CREB 1蛋白表达的增高,对CREB 1蛋白表达无明显影响.
- 张国忠马春玲苏彦君张瑾左敏谷振勇姚玉霞李淑瑾丛斌
- 关键词：吗啡ODN
- CRE-decoy ODN对SK-N-SH细胞中cAMP含量的影响
- 2007年
- 目的本实验以环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element-binding protein,CREB)为靶点,观察CREB转录因子decoy(CRE-transcription factor decoy oligodeoxynucleotide,CRE-decoyODN)对慢性吗啡作用和纳络酮催促戒断的SK-N-SH细胞cAMP含量,为在分子水平上寻找阿片类依赖的干预靶点提供实验依据。方法放射免疫分析法(RIA)检测细胞cAMP含量。结果单纯吗啡组较生理盐水对照组细胞cAMP水平显著升高(P<0.05),纳络酮戒断组较单纯吗啡组轻度降低,与对照组比较差异显著(P<0.05);单纯CRE-decoy ODN组与生理盐水对照组差异无显著性,(P>0.05),但能明显抑制吗啡及纳络酮组的cAMP水平(P<0.05),mismatch ODN、nonsense ODN和DOTAP对吗啡及纳络酮引起的cAMP水平改变无明显影响(P>0.05)。结论CRE-decoy ODN可抑制慢性吗啡作用及纳络酮催促戒断引起SK-N-SH细胞cAMP的升高。
- 段立华张瑾
- 关键词：吗啡ODN环磷酸腺苷
- nNOS基因在慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞的表达及调控
- 2005年
- 苏彦君丛斌张国忠张瑾李淑瑾姚玉霞付丽红
- 关键词：吗啡NNOSCREB
