赖小刚
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 供职机构：解放军第202医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 尼氟酸对大鼠体外心脏缺血-再灌注性心律失常及心功能的影响被引量：2
- 2005年
- 目的:观察氯通道阻断药尼氟酸(NFA)对大鼠体外心脏缺血再灌注性心律失常及心功能的影响。方法:采用大鼠Langendorff体外心脏灌注模型,阻断冠状动脉,模拟心肌缺血,观察心功能指标、心率和心律失常积分值的变化。结果:NFA(10μmol/L)可使缺血性心律失常分数值明显降低(P<0.01),但对再灌注性心律失常无明显影响;NFA对体外大鼠心脏具有明显的负性变时和变力作用(P<0.05),且呈剂量依赖性。结论:氯通道阻断药NFA具有明显的抗缺血性心律失常作用。
- 朱军王跃民马恒张鹏杨俊赖小刚周士胜
- 关键词：缺血-再灌注损伤心律失常氯通道
- siRNA干扰C1C-2转录对人神经胶质瘤细胞系U-87增殖和侵袭的抑制作用
- 本研究利用RNA干扰技术探讨容积激活性Cl-通道C1C-2对人神经胶质瘤增殖和侵袭的影响。构建针对人容积激活性Cl-通道C1C-12的mRNA干扰质粒pSp-C1C-2,以及对照质粒pSp-O,并将其分别转染U-87人神...
- 杨翔云赖小刚张勇周士胜裴建明
- 文献传递
- 干扰ClC-2基因表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响被引量：5
- 2006年
- 目的观察抑制容积调控氯通道ClC-2基因的表达对胶质瘤BT-325细胞生长的影响。方法设计和构建两个针对ClC2基因的小干扰RNA(siRNA)重组表达载体,用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒和两个重组质粒分别转染入BT-325细胞(依次为对照组、PP1组和PP2组);通过RTPCR检测ClC2基因mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期。结果与对照组相比较,干扰组ClC2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期。结论干扰胶质瘤细胞系BT-325细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的生长,提示ClC2基因可能成为控制胶质瘤恶性生长的新靶点。
- 杨翔云赖小刚张勇裴建明杨安钢周士胜
- 关键词：胶质瘤RNA干扰(RNAI)
- 人ClC-2基因小分子干扰RNA真核表达载体的构建和鉴定被引量：4
- 2006年
- 目的:构建靶向人C lC-2基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体。方法:根据DEQOR提供的siRNA设计原则和程序,设计两个靶向C lC-2基因的发夹状siRNA;通过化学合成的方法合成两对分别互补的寡核苷酸链,退火后得到编码该siRNA的C lC-2基因片段。将该片段连接至经BglⅡ和HindⅢ双酶切的真核细胞表达载体pSUPER.puro的多克隆位点,转化扩增提取质粒;对重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定。脂质体L ipofectam ineTM2000介导瞬时转染,通过RT-PCR检测人胶质瘤细胞系BT-325细胞中C lC-2mRNA表达。结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与真核细胞表达载体pSUPER.puro连接正确。转染两重组质粒细胞的C lC-2 mRNA表达明显降低。结论:成功构建人C lC-2基因干扰真核表达载体2个,分别命名为pSUPER.puro-siC lC-21和pSUPER.puro-siC lC-22,可用于进一步研究C lC-2基因对人胶质瘤侵袭和迁移活动的影响。
- 杨翔云张勇赖小刚裴建明杨安钢胡玉珍周士胜
- 关键词：人胶质瘤RNA干扰
- siRNA干扰ClC-2表达对人胶质瘤U-87细胞增殖的抑制作用被引量：9
- 2006年
- 背景与目的:利用小干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)抑制哺乳动物基因表达已成为研究基因功能的一种有效方法。本研究采用siRNA抑制人神经胶质瘤细胞系U-87细胞上容积调控氯通道ClC-2基因的表达,观察其受抑制后对细胞增殖能力的影响。方法:设计和构建两个针对人ClC-2基因的siRNA真核表达载体,并给予酶切鉴定和DNA序列分析鉴定;用脂质体LipofectamineTM2000介导转染,将空载体质粒pSUPER.puro-shRNA和两个重组质粒pSUPER.puro-shRNA-ClC-21、pSUPER.puro-shRNA-ClC-22分别转染入U-87细胞(依次为PP0组、PP1组和PP2组);采用RT-PCR检测ClC-2mRNA表达变化;MTT分析检测细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期;平板克隆形成实验检测克隆形成率。结果:目的片段成功地连接到真核细胞表达载体pSUPER.puro上。PP1组、PP2组与对照组、PP0组相比较,ClC-2基因的mRNA水平明显降低,细胞生长速度明显减慢,细胞周期进程被阻滞在G1期:细胞的G1期百分含量分别增加了约30.24%、18.04%(P<0.05)。平板克隆形成试验发现,克隆形成率PP1组[(11.0±1.0)%]、PP2组[(20±3.1)%]明显低于对照组[(46.5±1.6)%]和PP0组[(47.5±2.8)%](P<0.01)。结论:干扰人神经胶质瘤细胞系U-87细胞的ClC-2基因表达可以抑制细胞的增殖,提示ClC-2基因可能成为控制人恶性胶质瘤生长的新靶点。
- 杨翔云赖小刚张勇裴建明杨安钢周士胜
- 关键词：胶质瘤RNA干扰增殖
- 尼氟灭酸对大鼠心室肌细胞钠通道及动作电位的影响被引量：3
- 2005年
- 目的:观察尼氟灭酸(niflumicacid,NFA)对大鼠心室肌细胞钠电流及动作电位的影响。方法:分别用全细胞膜片钳及电流钳技术记录单个心室肌细胞电压门控钠电流(INa)和动作电位(AP)。结果:尼氟灭酸(100μmol/L)能可逆性地抑制INa和AP,与对照组比较,抑制的程度分别为:60.1%±12.1%(-30mV,n=6,P<0.01)及78.2%±10.3%(n=5,P<0.01)。天冬氨酸根离子(Asp-)替代细胞外液的氯离子可引起类似尼氟灭酸的作用。结论:尼氟灭酸对钠通道有抑制作用并影响动作电位。
- 杨俊陈艳明王跃民赖小刚周士胜
- 关键词：阴离子通道动作电位钠电流
