孙卫华
- 作品数：5 被引量：21H指数：3
- 供职机构：上海交通大学医学院附属瑞金医院更多>>
- 发文基金：上海-联合利华研究与发展基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ_2基因克隆及其真核细胞表达产物鉴定
- 2001年
- 目的 克隆小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体 (PPAR)γ2 基因并经真核细胞短暂表达系统表达 ,然后对表达产物进行鉴定。方法 采用RT PCR方法从中国昆明小鼠附睾脂肪垫总RNA中扩增出PPARγ2 cDNA全长基因 ,亚克隆入载体pcDNA3中 ,形成重组载体pcDNA3/小鼠PPARγ2 ,对其进行测序后 ,在真核细胞COS 7中进行短暂表达 ,并用免疫荧光染色法及Western印迹法对其表达产物进行鉴定。结果 克隆出中国昆明小鼠PPARγ2 基因 ,其cDNA序列与Genbank的小鼠PPARγ2 基因序列基本相同 ,仅在 383位氨基酸由Asn(AAC)变成了Ser(AGC)。经鉴定小鼠PPARγ2 基因有效地在真核细胞COS 7中获得了表达。结论 本研究为进一步研究PPARγ2
- 左祥生李果罗敏骆天红蔡东升李纪平刘赟孙卫华
- 关键词：分子克隆真核细胞小鼠脂肪细胞
- 2型糖尿病性心脏病变早期相关基因的筛选和分析被引量：10
- 2002年
- 目的 筛选 2型糖尿病性心脏病变早期相关基因并探讨其发病机制。方法 (1)SD大鼠高热量饮食 2个月后链脲佐菌素 (STZ ,15mg/kg)一次性尾静脉注射 ,建立 2型糖尿病大鼠模型。(2 )分别于模型建立后 0 5、1 5、6 0个月取大鼠心脏组织进行电镜观察。 (3)模型建立后 15d抽提大鼠心脏组织总RNA进行荧光标记的mRNA差异显示分析 ,用Northernblot证实差异表达基因并对未知序列进行生物信息学分析。结果 (1)建立的 2型糖尿病模型大鼠 ,具有外周胰岛素抵抗和胰岛功能仅轻微受损等特征。 (2 )心肌超微结构观察结果证实糖尿病心脏病变出现于模型建立后 1 5个月的大鼠心脏 ,并随着病程延长而加重。 (3)应用mRNA差异显示分析技术筛选得到的克隆中 ,已知序列有肌型肉碱棕榈酰转移酶 ;未知序列分别命名为DCM1、2、5、6、8、11、12、16 ,已提交Genbank。结论 糖尿病心脏病变早期在超微结构发生改变前已出现能量代谢途径相关酶类基因表达差异 ,对其进一步研究将为早期干预逆转糖尿病心脏病变提供思路。
- 张芳林李果丁伟刘优萍谢超张迪周文中孙卫华杨架林罗敏
- 关键词：相关基因基因筛选发病机制动物模型超微结构
- 糖尿病大鼠早期肾脏病变相关新基因Dmrs91克隆及其生物信息学分析
- 2005年
- 对合并早期肾脏病变的糖尿病大鼠肾脏进行cDNARDA获得的新EST序列进行全长cDNA克隆即新基因Dmrs91,并对该基因进行生物信息学分析。
- 杨架林李果杨义生张迪周文中孙卫华张芳林罗敏
- 关键词：糖尿病肾脏病变生物信息学
- 过氧化物酶体增殖体激活受体γ2表达诱导NIH3T3细胞向脂肪细胞分化被引量：7
- 2001年
- 目的 通过应用重组逆转录病毒介导小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ２（ｍＰＰＡＲγ２）基因整合入ＮＩＨ３Ｔ３细胞基因组中进行表达，并研究其功能。方法 从经测序证实含正确序列ｍＰＰＡＲγ２的重组质粒ｐｃＤＮＡ３／ｍＰＰＡＲγ２中，双酶切下ｍＰＰＡＲγ２全长ｃＤＮＡ序列，亚克隆入逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ中构建重组逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ｍＰＰＡＲγ２。对ｐＧＣＥＮ／ｍＰＰＡＲγ２及ｐＧＣＥＮ进行包装及Ｇ４１８抗性筛选，收集病毒上清，感染靶细胞ＮＩＨ３Ｔ３细胞，进行Ｇ４１８抗性筛选并进行扩增。在含过氧化物酶体增殖体激活受体γ（ＰＰＡＲγ）激活物５，８，１１，１４二十碳四烯酸等分化介质中，诱导ＰＰＡγ２表达增加，使ＮＩＨ３Ｔ３细胞向脂肪细胞分化。结果 构建了含ｍＰＰＡＲγ２全长ｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体，获得了滴度分别为５ ｘ １０４ ＣＦＵ／ｍｌ和６ｘ１０５ ＣＦＵ／ｍｌ的ｐＧＣＥＮ／ｍＰＰＡＲγ２及ｐＧＣＥＮ的病毒上清。经油红Ｏ染色证实分化１０ｄ的表达ｍＰＰＡＲγ２的ＮＩＨ３Ｔ３细胞中明显积聚了较多的中性脂肪，其细胞形态也与体内成熟脂肪细胞相似。结论 本研究在体外建立了由ＰＰＡＲγ２诱导ＮＩＨ３Ｔ３细胞向脂肪细胞分?
- 左祥生李果骆天红李纪平刘赟孙卫华罗敏
- 关键词：NIH3T3细胞逆转录病毒科脂肪细胞分化肥胖
- 糖尿病性心肌病变凋亡相关新基因2ass-bnip3的电子克隆及其功能预测被引量：5
- 2003年
- 对应用荧光标记的mRNA差异显示分析技术筛选获得的 2型糖尿病性心肌病变凋亡相关新基因 2ass bnip3 ,进行全长克隆及其结构 /功能预测 ,获得 15 94bp的新基因全长及其编码的具 187个氨基酸的蛋白 2ass bnip3 p ,它可能通过钙调 凋亡调节通路而在糖尿病心肌病变的发生中发挥重要作用。
- 张芳林李果谢超张迪周文中许光武陈刚孙卫华罗敏
- 关键词：糖尿病性心肌病变电子克隆
