白雪娟 作品数:17 被引量:76 H指数:5 供职机构: 中国人民解放军总医院 更多>> 发文基金: 北京市自然科学基金 国家科技重大专项 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
应用基因芯片直接检测结核病患者各类标本中利福平和异烟肼耐药的价值 被引量:18 2019年 目的研究结核分枝杆菌(MTB)耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中利福平和异烟肼耐药相关基因的临床价值。方法回顾性分析125例通过硝基苯甲酸(PNB)和噻吩-2-羧酸肼(TCH)鉴别培养为MTB的临床标本,其中痰标本90例、支气管灌洗液12例、脓液12例、胸腔积液6例、组织标本3例、腹腔积液和尿液标本各1例,应用绝对浓度法同时进行利福平(RFP)和异烟肼(INH)药物敏感性试验(简称“绝对浓度法药敏试验”),并用基因芯片直接检测临床标本中MTBrpoB、katG和inhA基因型。以绝对浓度法药敏试验为标准,评价基因芯片检测RFP、INH耐药和耐多药(MDR)的敏感度和特异度,并且比较两种检测结果的一致性。结果在125例结核病患者临床标本中,绝对浓度法药敏试验显示对RFP、INH的耐药率和MDR发生率分别为20.0%(25/125)[其中高耐占88.0%(22/25)、低耐占12.0%(3/25)]、17.6%(22/125)[其中高耐占18.2%(4/22)、低耐占81.8%(18/22)]、16.8%(21/125)。初治和复治结核病患者临床标本中MDR-MTB的检出率分别为7.6%(7/92)和39.4%(13/33)。以绝对浓度法药敏试验为标准,应用基因芯片直接检测临床标本中MTBrpoB、katG和inhA基因型,预示对RFP、INH耐药和MDR的敏感度分别为72.0%(18/25)、63.6%(14/22)和61.9%(13/21),特异度分别为91.0%(91/100)、86.4%(89/103)和89.4%(93/104),两种方法的一致率分别为87.2%(109/125)、82.4%(103/125)和84.8%(106/125)。结论应用耐药基因芯片直接检测结核病患者临床标本中MTB对RFP和INH耐药的相关基因突变具有中等的敏感度和较高的特异度,可快速检出对RFP、INH耐药和MDR-TB患者,为临床早期开展有效化疗提供实验依据。 白雪娟 刘银萍 张俊仙 王杰 吴雪琼关键词:标本制备 核酸探针 微生物敏感性试验 异烟肼 Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究 被引量:1 2010年 目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M+S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的"亚G1"峰(即凋亡峰),提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。 李晓利 王强 白雪娟 黄仲曦 崔春平 丁彦青 张金萍 姚开泰 许红民关键词:质粒 流式细胞术 细胞周期 大肠癌差异表达基因的筛查 目的筛查人大肠癌组织与相应正常大肠粘膜差异表达基因,为寻找大肠癌分子标记物和从整体上探讨大肠癌发生的分子机制奠定基础。方法应用美国affymetrix HG-U133寡核苷酸芯片(代表迄今所知的32264个人类全基因,包... 许红民 王强 白雪娟 钟定荣 曹秀堂 张金萍 丁彦青 姚开泰文献传递 结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗与抗痨药物联合治疗小鼠结核病 被引量:3 2008年 目的研究结核分枝杆菌Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗及其与抗痨药物联合治疗小鼠结核病的效果。方法用结核分枝杆菌临床分离的利福平和异烟肼敏感株HB240-1尾静脉注射17~19g的6~8周龄雌性BALB/c小鼠后,将小鼠随机均匀地分为5组,感染后第3d开始,分别用pVAX1空载体(A组)、利福平和异烟肼(B组)、利福平、异烟肼和Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗(C组)、Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗(D组)、HSP65基因DNA疫苗(E组)治疗40d,每组10只小鼠。治疗结束后2w,分别取肺、肝和脾观察病理改变、称取重量、做菌落计数。结果小鼠感染5w后,肺内菌量可达到1.8×106CFU,脾内菌量达到1.7×106CFU。治疗结束后2w,B组和C组肺、脾脏器重量指数显著低于D组和E组,D组和E组脾脏器重量指数低于A组,但差别不显著。A组肺脏病变程度最重,病变范围80%~100%,干酪样坏死灶为弥漫性;D组和E组肺脏病变范围50%,干酪样坏死灶为片状;B组和C组肺脏病变程度较轻,病变范围较小,干酪样坏死灶为点状。A组脾脏9只重度肿大;B组和C组脾脏未见明显病变;D组和E组脾脏各有4只重度肿大。与A组相比,E组、D组、B组和C组肺脏菌落数分别减少了45%、50%、98.9%、99%;脾脏菌落数依次减少了50%、55%、99.2%、98.4%。与pVAX1空载体治疗组相比,各治疗组均有不同程度的疗效,Ag85A/ESAT-6嵌合基因疫苗组与HSP65基因疫苗组疗效相当。结论Ag85A/ESAT-6嵌合基因DNA疫苗组联合化疗的疗效明显强于Ag85A/ESAT6嵌合基因DNA疫苗单独应用。 梁艳 吴雪琼 李宁 张俊仙 阳幼荣 余琦 白雪娟 宋晶莹 刘瑞 李忠明 王兰 史迎昌关键词:DNA疫苗 结核病 利用全基因组寡核苷酸筛选大肠癌差异表达基因 被引量:8 2005年 目的筛查人大肠癌组织与相应正常大肠粘膜差异表达基因。方法应用美国AffymetrixHG-U133寡核苷酸芯片(代表迄今所知的32264个人类全基因,包括19308个已知的人类基因和12956个EST簇)检测9例大肠癌组织及相应正常大肠粘膜基因表达谱,并以实时荧光定量PCR技术对基因芯片检测结果进行验证;综合运用交集补集、秩和检验及t检验比较两组表达谱数据。结果获得大肠癌组织与正常大肠粘膜组织差异表达基因和ESTs3125个(包括肿瘤上调基因ESTs974个、下调基因ESTs2151个);大肠癌组织表达而相应正常粘膜不表达的ESTs245个;大肠癌组织不表达而正常粘膜表达的ESTs162个;最重要的大肠癌差异表达基因ESTs17个。本研究所筛得之大肠癌差异表达基因80.1%未见报道。结论综合运用交集补集分析、t检验、秩和检验对基因谱数据进行挖掘的策略,可为寻找大肠癌分子标记物和从整体上探讨大肠癌发生的分子机制奠定基础。 许红民 王强 白雪娟 钟定荣 曹秀堂 张金萍 丁彦青 姚开泰关键词:大肠癌 基因表达谱 数据挖掘 对ASC-H的妇女行高危人乳头状瘤病毒DNA检测的临床意义 被引量:2 2010年 目的探讨高危人乳头瘤病毒DNA(hrHPV DNA)辅助检测对宫颈非典型鳞状上皮,不除外高度鳞状上皮内病变(ASC-H)女性疾病的风险评估。方法对1187例ASC-H妇女进行hrHPV感染的流行病学和组织病理学资料调查及分析。结果在277,400例宫颈细胞学检查中判读为ASC-H的1187例中,589例(49.6%)hrHPV DNA检测结果为阳性。对其中505例的组织病理学随访,32.7%hrHPV DNA阳性者系宫颈高度鳞状上皮内病变(CIN2/3),hrHPV DNA阴性妇女仅有1.2%呈CIN2/3改变。hrHPV DNA检测结果提示CIN2/3改变的阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)、敏感性和特异性分别是32.7%、98.8%、96.6%和58.6%。该PPV约是单纯细胞学结果ASC-H预测CIN改变的2倍。宫颈/移行区(EC/TZS)样本的存在与否并不影响hrHPV DNA或CIN2/3级的检出率。结论对细胞学判为ASC-H的妇女行hrHPV DNA检测具有较高的临床价值。对hrHPV DNA阴性患者可单纯行常规细胞学随访和hrHPV DNA检测,而不需要进行阴道镜检查,尤其是对40岁以上妇女。 Sudeshna Bandyopadhyay R.Marshall Austin David Dabbs Chengquan Zhao 白雪娟 杨敏 赵澄泉 傅新文关键词:ASC 高度鳞状上皮内病变 妇女 宫颈细胞学检查 肺结核并发糖尿病患者临床特征及淋巴细胞亚群检测结果分析 被引量:2 2020年 目的探讨肺结核并发糖尿病(pulmonary tuberculosis complicated with diabetes mellitus,PTB-DM)患者临床特征及淋巴细胞亚群特点。方法回顾性收集2018年4月1日至2019年5月31日在解放军总医院第八医学中心结核二科住院的符合纳入标准的肺结核患者。根据是否并发糖尿病将其分为两组:PTB-DM组85例,单纯肺结核组(PTB组)96例。对两组患者临床特征包括性别、年龄、治疗史和胸部CT检查结果进行比较分析;对两组患者淋巴细胞亚群和结核分枝杆菌特异性反应T细胞检测结果分别进行比较分析。结果PTB-DM组男性和女性分别占76.4%(65/85)和23.6%(20/85),PTB组分别占57.3%(55/96)和427%(41/96),差异有统计学意义(χ^2=7.42,P=0.006)。PTB-DM组<25岁、25-60岁和>60岁的患者分别占24%(2/85)、68.2%(58/85)和29.4%(25/85);PTB组则分别占25.0%(24/96)、63.5%(61/96)和11.5%(11/96),差异有统计学意义(χ^2=23.55,P=0.000)。PTB-DM组初治和复治患者分别占74.1%(63/85)和25.9%(22/85),PTB组分别占84.4%(81/96)和15.6%(15/96),差异无统计学意义(χ^2=2.92,P=0.088)。PTB-DM组胸部CT扫描显示无空洞、有空洞、病变范围<3个肺叶和≥3个肺叶者分别占23.5%(20/85)、76.5%(65/85)、31.8%(27/85)和68.2%(58/85);PTB组分别为53.1%(51/96)、46.9%(45/96)、54.2%(52/96)和45.8%(44/96);PTB-DM组胸部CT有空洞和病变范围≥3个肺叶的患者明显多于PTB组,差异有统计学意义(χ^2=16.56,P=0.000和χ^2=9.20,P=0.002)。PTB-DM组结核分枝杆菌特异性反应T细胞阳性率为81.3%(65/80),PTB组阳性率为74.2%(66/89),差异无统计学意义(χ^2=1.22,P=0.270)。PTB-DM组总T淋巴细胞绝对计数、CD4+T淋巴细胞绝对计数、CD8+T淋巴细胞绝对计数、自然杀伤细胞(NK细胞)绝对计数、NK样T淋巴细胞绝对计数和总B淋巴细胞绝对计数的中位数(四分位数)值分别为1069.00(753.50,2372.50)、548.00(381.00,787.50)、380.00(270.50,574.50)、184.00(111.00,294.50)、60.00(36.00,120.50)和162.00(80.50,244.00 梁建琴 白雪娟 王金河 陈志 郭东霖 吴雪琼关键词:糖尿病 共病现象 淋巴细胞亚群 C8orf4基因在大肠癌中的表达 被引量:4 2005年 目的:筛查大肠癌分化相关分子标志物。方法:应用美国A ffym etrix HG-U133寡核苷酸芯片对不同分化程度大肠癌组织和正常大肠黏膜组织的基因表达谱进行检测。采用肿瘤样品分类法(T-c lass)对各样品进行基因分类。并应用实时荧光定量RT-PCR检测候选基因在不同分化程度大肠癌中的差异表达。结果:T-c lass分析获得分类精度100%的大肠癌分化差异表达基因&ESTs 8个。其中C8orf4基因(chromosom e 8 open read ing fram e4)经非多元统计分析,在大肠癌组较正常黏膜表达下调。实时荧光定量RT-PCR检测该基因在不同分化程度大肠癌组间表达,其标准化表达值与基因芯片该基因探针组信号值相关性分析,呈线性相关。两种方法检测C8orf4基因在不同分化程度大肠癌组表达趋势相符。结论:C8orf4基因与大肠癌分化密切相关,可作为大肠癌分化的候选分子标志物。 王强 李晓利 白雪娟 过伟 张金萍 丁彦青 姚开泰 许红民关键词:肠肿瘤 聚合酶链反应 构建大肠癌细胞相关基因Nrf3融合蛋白真核表达载体及其体外转染的初步功能分析 被引量:2 2007年 目的:应用基因芯片生物信息学分析思路筛查大肠癌细胞相关基因Nrf3,构建融合蛋白真核表达载体,检测其对体外转染癌细胞周期与凋亡的影响。方法:实验于2004-01/2006-07在南方医科大学病理解剖教研室及肿瘤研究所与中国农业大学农业生物技术国家重点实验室完成。①实验材料:大肠癌细胞组织及其配对的正常大肠黏膜各3例,由解放军总医院病理科提供;大肠癌LoVo细胞系由南方医科大学肿瘤研究所提供;肝癌SMMC7721细胞系由解放军军事医学科学院放射医学研究所提供;真核表达载体pEGFP-N1(Clontech公司)。②实验方法:分别应用Excel表、Affymetrix Microarray Suite Software 5.0分析软件和STATA7.0分析软件,对基因芯片表达谱数据行交集补集分析、秩和检验及T检验,筛选"最重要的大肠癌细胞差异表达基因&ESTs",差异表达P<0.05,差异倍数>2。应用文献轮廓法进一步分析确定首选研究基因为Nrf3,提取组织样品总RNA,cDNA合成,PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后回收纯化,插入T载体中,SalⅠ和BamHⅠ双酶切后连接到pEGFP-N1载体,获得重组pEGFP-N1-Nrf3质粒。LoVo细胞在体外加入含体积分数为0.1小牛血清、100u/mL青链霉素的RPMI-1640培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中,待转染质粒pEGFP-N1-Nrf3与阴性对照质粒pEGFP-N1转染36h后,荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位,FCM分选术观察其在体外对LoVo细胞周期和凋亡的影响。同法观察重组pEGFP-N1-Nrf3质粒体外转染对SMMC7721细胞周期和凋亡的影响。结果:①首选研究大肠癌细胞相关基因的确认:多种统计学方法分析获得最重要的大肠癌细胞相关基因17个,文献轮廓法进一步确认Nrf3为首选研究基因。②Nrf3基因表达:RT-PCR法检测Nrf3在3例大肠癌细胞组织均有表达,而在与其相配对的正常黏膜中表达较弱或不表达,与芯片检测结果基本一致;Nrf3在LoVo细� 王强 李晓利 白雪娟 黄仲曦 崔春平 丁彦青 张金萍 姚开泰 许红民关键词:基因表达谱 质粒 大肠癌 流式细胞术 MSI和VEGF在NSCLC组织中的表达及临床病理相关性研究 被引量:5 2007年 目的:研究微卫星不稳定性和血管内皮生长因子在非小细胞肺癌中的表达及其之间的相关性。方法:应用PCR-变性聚丙烯酰胺技术检测94例非小细胞肺癌肿瘤组织及相应正常肺组织的D 3S1067、D 3S659、D 3S966及AR四个位点的微卫星不稳定性。采用免疫组织化学方法测定94例非小细胞肺癌病理切片中血管内皮生长因子的表达情况,并对二者与患者的年龄、性别、病理类型、组织分化程度、临床分期、淋巴结转移和生存时间相关性进行统计分析。结果:在所有病例中64.89%呈现至少一个位点的微卫星不稳定性阳性。微卫星不稳定性阳性组与阴性组相比较,其淋巴结转移率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。血管内皮生长因子阳性率为62.8%,其基因的表达与肺癌患者的细胞分化程度、TNM分期、5年生存率和淋巴结转移状态密切相关(P<0.05)。微卫星不稳定性和血管内皮生长因子阳性患者的生存时间显著低于微卫星不稳定性阴性患者(P<0.05)。COX回归模型分析显示,微卫星不稳定性和血管内皮生长因子对非小细胞肺癌患者是一个重要的预后判断因素(P<0.01)。结论:微卫星不稳定性和血管内皮生长因子的表达与非小细胞肺癌的临床病理学特征密切相关,二者的检测将有助于肺癌的诊断,评估肺癌患者的恶性程度和预后。 韩永 徐燕杰 石炳毅 王强 杨敏 白雪娟关键词:微卫星不稳定性 血管内皮生长因子