董剑
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- 结核分枝杆菌去乙酰化酶2的克隆及酶学研究
- 2015年
- 目的构建结核分枝杆菌去乙酰化酶2(Sir2)原核表达载体,并进行表达纯化及酶学研究。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,聚合酶链反应扩增Sir2基因,构建pET-28a-Sir2重组质粒,在E.coli BL2(DE3)中诱导表达蛋白,经Ni 2+-NTA柱纯化,最后通过去乙酰化酶试验测定Sir2酶活的最适反应温度和pH值,以及吡嗪酰胺对其酶活的影响。结果成功构建了Sirt2原核表达载体,并能在E.coli BL21(DE3)中高效表达。随后对纯化的Sir2蛋白进行依赖于NAD+的去乙酰化活性研究,得到该酶的最适反应温度是25℃,最适反应pH值是9.0。在偏酸性环境中,吡嗪酰胺对酶活有抑制,而在偏碱性环境中,没有抑制作用。结论利用分子克隆技术,获得了高纯度的Sir2蛋白并获得其酶活最适反应温度和最适pH值,及吡嗪酰胺对其有抑制效果,为研究抗结核药物吡嗪酰胺的抑菌机制提供一定基础。
- 林雅宁董剑徐忠玉
- 关键词：结核分枝杆菌去乙酰化酶基因克隆蛋白纯化吡嗪酰胺
