刘芳
- 作品数：5 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院血液学研究所实验血液学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划天津市科技发展战略研究计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人4-1BBL胞外区基因的克隆与表达研究被引量：7
- 2005年
- 用RTPCR方法从人单核THP1细胞系克隆人41BBL胞外区基因,将其重组到pAYZ表达载体中,构建成人41BBL胞外区基因表达载体。将该载体转化大肠杆菌16C9,获得稳定表达,表达产物主要以可溶性状态存在;SDSPAGE和Westernblot分析显示,其分子量约为22kD,与预期结果一致。这是首次在大肠杆菌中获得41BBL胞外区可溶性表达。生物学活性检测显示41BBL对于维持T淋巴细胞系因子释放非常有益,同时PI单染表明它能抑制Jurkat细胞的凋亡。这将在抗肿瘤免疫治疗中具有潜在应用前景。
- 姜文国熊冬生邵晓枫王金宏许元富刘芳郭红星朱祯平杨纯正
- 关键词：4-1BBL协同刺激分子原核表达
- 抗人乳腺癌细胞膜表面角蛋白CK8的单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2008年
- 目的:建立针对多药耐药人乳腺癌细胞膜表面差异抗原的抗体库,并鉴定抗角蛋白CK8特异性的单克隆抗体。方法:采用细胞免疫和杂交瘤技术制备单克隆抗体库,经免疫沉淀得到抗原-抗体复合物,SDS-PAGE分离目的抗原,质谱测序,Western blot验证及激光共聚焦显微镜观察抗原分子的细胞膜定位。结果:成功筛选到稳定分泌抗CK8分子的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(7F9)。结论:文中所研制的单克隆抗体具有与乳腺癌细胞膜表面CK8分子特异结合的活性,在上皮来源肿瘤标志物CK8的临床检测及CK8相关生物学活性研究中具有广泛应用前景。
- 刘芳邵晓枫王金宏范冬梅许元富杨铭杨纯正熊冬生
- 关键词：膜蛋白单克隆抗体
- PHⅡ—7增强阿霉素杀伤HL-60／ADR细胞的作用及机制研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究PHⅡ-7增强阿霉素杀伤HL-60／ADR细胞的作用及其相关机制。方法用MTT法测定阿霉素、PHⅡ-7单独及联合用药对阿霉素杀伤人急性髓系白血病耐药细胞株（HL-60／ADR）及其亲代细胞系（HL-60）作用的，IC50值，提取不同浓度PHⅡ-7处理不同时间后HL-60和HL-60／ADR细胞的RNA，RT—PCR法分析PHⅡ-7对MRP基因表达水平的影响，通过激光共聚焦显微镜和流式细胞术观察PHⅡ-7处理前后HL-60和HL-60／ADR细胞内阿霉素浓度的改变。结果PHⅡ-7本身具有抗肿瘤活性，对HL-60和HL-60／ADR的，IC50值分别为（0．83±0．08）μmol／L，（1．74±0．56）μmoL／L。PHⅡ-7还能协同提高阿霉素的细胞毒作用，HL-60组两药相互作用指数（CDI）值为0．7，HL-60／ADR组CDI值为0．43，其对耐药细胞的协同作用更为显著。随PHⅡ-7作用时间延长及剂量增加，细胞MRP基因表达水平逐渐下降，细胞内阿霉素浓度逐渐提高，可达敏感细胞的55％。结论PHⅡ-7是有效的肿瘤细胞化疗药物，还具有下调MRP耐药基因表达的作用，从而有效逆转HL-60／ADR细胞的耐药现象，协同增强化疗药物对细胞的杀伤作用。
- 张砚君王锐邵晓枫范冬梅许元富周圆刘芳刘芳苏晔
- 关键词：多药MRP基因阿霉素HL-60细胞
- 过表达的细胞膜表面角蛋白8——乳腺癌多药耐药的一种新靶点被引量：5
- 2008年
- 目的研究细胞膜角蛋白8(CK8)过表达与乳腺癌多药耐药的相关性及其作为逆转乳腺癌耐药靶点的可行性。方法转染特异的CK8-siRNAs至人乳腺癌耐药细胞MCF-7/MX,用Western blot方法检测siRNAs对CK8蛋白表达的抑制,荧光染色用激光共聚焦显微镜观察细胞膜表面CK8表达量的改变,并用Sulforhodamine B的方法检测转染前后细胞对多种化疗药敏感性的变化。结果MCF-7/MX细胞导入CK8-siRNAs后,细胞膜CK8的表达水平明显抑制,同时对米托蒽醌等化疗药的敏感性明显提高,耐药表型明显逆转。结论CK8细胞内定位及表达水平的改变,在乳腺癌多药耐药表型的形成中起重要作用。作为一种新的耐药相关膜表面标志,细胞膜CK8有望成为逆转乳腺癌多药耐药诊断和治疗的新靶点。
- 刘芳高瀛岱郭红星张砚君代晓华师锐赞杨纯正熊冬生
- 关键词：多药耐药靶点RNAI乳腺癌
- 基于4-1BBL和CD3双信号的融合蛋白协同抗肿瘤作用研究
- 2010年
- 旨在研究4-1BBL/CD20融合蛋白增强抗CD3/抗CD20 diabody介导的特异性靶向杀伤活性。采用亲和层析法纯化本室构建的抗-CD3/抗-CD20 diabody和4-1BBL/CD20融合蛋白可溶性表达产物;采用calcein释放试验测定其介导的体外靶向杀伤活性;采用人B淋巴瘤细胞系Raji裸鼠移植瘤模型测定其介导的体内靶向杀伤活性。纯化4-1BBL/CD20融合蛋白在体外能增强抗-CD3/抗-CD20 diabody介导激活的T细胞杀伤Raji细胞;在人B淋巴瘤细胞系Raji裸鼠移植瘤模型联合人T淋巴细胞4-1BBL/CD20融合蛋白增强抗-CD3/抗-CD20 diabody高效抑制Raji细胞裸鼠移植瘤的生长,明显延长荷瘤裸鼠的生存时间。在体外和体内4-1BBL/CD20融合蛋白均能增强抗-CD3/抗-CD20 diabody介导激活的T细胞杀伤表达CD20抗原的肿增细胞,是一个有望用于B细胞恶性肿瘤临床治疗的特异性融合蛋白。
- 姜文国刘荣刘芳王金宏邵晓枫舍鸣朱慧芳
- 关键词：CD20靶向治疗融合蛋白
