王斌
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：青岛农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项山东省农业良种工程项目更多>>
- 相关领域：生物学天文地球农业科学更多>>
- 条斑紫菜TPS基因0.6Kb片段的原核表达及抗血清的制备
- 2013年
- 以pET22b为起始载体,构建了条斑紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PyTPS)0.6Kb片段的原核表达载体,并命名为pET22b-PyTPS0.6。重组菌BL21(pET22b-PyTPS0.6)经ITPG诱导后,SDS-PAGE分析显示菌体总蛋白的电泳图谱上有分子量约为23kDa的特异性蛋白条带,即PyTPS基因0.6Kb片段得到了原核表达。用溶菌酶裂解细菌提取包涵体,再利用镍离子亲和层析柱从包涵体中纯化出TPS重组蛋白。用获得的高纯度重组蛋白作抗原免疫家兔获得了抗血清,间接ELISA测定显示一份抗血清的效价为1∶16000,另一份为1∶32000。本研究制备的抗血清为进行转基因植物中PyTPS基因翻译产物的免疫学检测奠定了基础。
- 孟庆芹王斌徐丽娟孙牧君郭宝太
- 关键词：原核表达重组蛋白抗血清
- 条斑紫菜Rab11基因的克隆、序列分析及原核表达被引量：2
- 2012年
- Rab蛋白是小GTP结合蛋白家族最大的亚族,调控着植物的生长发育、形态建成,参与植物对病原菌的应答等过程,有些成员还受多种逆境胁迫的诱导表达。本研究通过RT-PCR技术克隆了1个条斑紫菜Rab基因,测序结果显示其cDNA含有长648 bp的完整开放阅读框.与拟南芥Rab比较时,该基因与拟南芥Rab11编码产物同源性最高,因此命名为PyRab11。条斑紫菜Rab11基因与多种生物的Rab11基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性,是典型的Rab蛋白编码基因。以pET28a为起始载体,构建了该基因的原核表达载体pET28a-PyRab11。重组大肠杆菌BL21(pET28a-PyRab11)经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示得到了分子量约24 KDa的特异性重组蛋白,该基因的表达可提高重组菌的耐盐能力。
- 王斌郭宝太牛孟华隋炯明
- 关键词：条斑紫菜原核表达耐盐性
- 坛紫菜TPS基因的克隆及其原核表达被引量：3
- 2013年
- 以叶状体总DNA为模板,用3对DNA引物进行PCR扩增,获得了坛紫菜6-磷酸海藻糖合成酶基因(PhTPS)3个重叠的片段,大小分别为1.3,1.1,0.7 kb。用pMD18-T载体克隆这些片段,经测序与序列拼接获得了该基因完整的ORF序列,其长度为2 727 bp。在已经构建条斑紫菜TPS基因原核表达载体pET22b-PyTPS的基础上,用PhTPS基因替代该表达载体中的PyTPS基因,获得了PhTPS基因的原核表达载体pET22b-PhTPS。重组菌BL21(pET22b-PhTPS)经IPTG诱导,SDS-PAGE显示获得了约100 kDa的特异性蛋白条带;目测及OD600的测定结果表明重组菌的耐盐性明显高于对照菌,即PhTPS基因的表达提高了重组菌的耐盐性。为利用PhTPS基因进行作物耐盐等抗逆转基因改良提供了依据。
- 邓淑贞王斌高磊牛倩雅刘涛翁曼丽郭宝太
- 关键词：坛紫菜原核表达重组菌
