张鹏
- 作品数：10 被引量：18H指数：3
- 供职机构：江苏大学临床医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金江苏省“333”工程基金项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物调节A7r5表型转化及脂质转运分子表达被引量：3
- 2019年
- 目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体复合物(oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab complex)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A7r5)表型转化和细胞表面脂质转运分子的影响,以及toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)信号通路在其中的作用。方法分别用oxLDL、oxLDL/β2GPⅠ复合物、oxLDL/抗β2GPⅠ抗体复合物、β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物、oxLDL/β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物刺激A7r5,收集总RNA和蛋白质,利用实时定量PCR、western blot及免疫荧光染色等方法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、巨噬细胞表面标志CD68、半乳糖凝集素3(galectin-3,LGALS3)、B类清道夫受体3(CD36)和ATP结合盒转运体(ATP-binding cassette transporter)A1/G1(ABCA1/ABCG1)的表达情况;用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或c-Jun氨基末端激酶1/2(c-Jun N-terminal kinases 1/2,JNK 1/2)阻断剂SP600125(90 nmol/L)预处理的方式,观察TLR4及下游信号分子在oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物诱导A7r5表型转化和脂质转运分子表达变化的作用。结果 oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物明显上调细胞CD68和LGALS3水平,降低α-SMA表达,而TAK-242能够反转该现象;oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物能够促进细胞表达CD36,同时抑制ABCA1/ABCG1表达,TAK-242和SP600125能够逆转该过程。结论 oxLDL/β2GPⅠ/β2GPⅠ-Ab复合物促进A7r5细胞向"巨噬样"细胞发生表型转变,调节脂质转运相关分子的表达,增强脂质向细胞内转运的能力;TLR4和JNK1/2与该过程密切相关。
- 张鹏周红何超陈芋丹王婷张贵婷姚雨叶吴倩倩王韧
- 关键词：平滑肌细胞表型改变
- β2GPI/aβ2GPI通过激活TLR4抑制THP-1巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取被引量：1
- 2018年
- 目的探讨β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物(β2GPI/aβ2GPI)对巨噬细胞脂质摄取功能和B型清道夫受体CD36表达的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在该过程中的作用。方法用100 ng/mL佛波酯(PMA)将THP-1人单核细胞诱导为THP-1巨噬细胞,通过形态学变化和1,1'-二十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚碳花菁高氯酸盐标记的氧化低密度脂蛋白(DiI-oxLDL)吞噬试验加以鉴定。用RPMI1640培养液、β2GPI、抗β2糖蛋白I抗体(aβ2GPI)和β2GPI/aβ2GPI处理THP-1巨噬细胞,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4 mRNA和蛋白水平。用RPMI1640培养液、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI和oxLDL联合LPS处理THP-1巨噬细胞,油红O染色观察胞内脂质积累,免疫荧光细胞化学染色法检测CD36的表达,实时荧光定量PCR检测CD36 mRNA水平,Western blot法检测CD36蛋白水平。利用TLR4阻断剂TAK-242(1μg/mL)预处理THP-1巨噬细胞,观察抑制TLR4对上述刺激下THP-1巨噬细胞脂质积累和CD36表达的影响。结果PMA处理后,THP-1细胞呈现巨噬细胞形态并具备脂质吞噬能力;与RPMI1640相比,β2GPI/aβ2GPI处理可显著增加THP-1巨噬细胞TLR4表达;与单独oxLDL处理相比,oxLDL联合β2GPI/aβ2GPI能够抑制THP-1巨噬细胞的脂质积累和CD36表达,阻断TLR4可以部分逆转这一现象。结论β2GPI/aβ2GPI能激活TLR4抑制巨噬细胞对oxLDL的摄取和CD36表达。
- 何超周红张贵婷陈芋丹张鹏王韧吴倩倩姚雨叶匡铭
- 关键词：THP-1巨噬细胞
- 外泌体转运linc-UFC1促进胃癌细胞增殖和迁移被引量：1
- 2018年
- 目的探讨外泌体(exosome)来源linc-UFC1对胃癌细胞增殖和迁移的作用及机制。方法采用linc-UFC1高表达的胃癌细胞系BGC-823来源的外泌体处理胃癌细胞系MKN-45 48 h后,q RT-PCR检测linc-UFC1含量变化,细胞生长曲线和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力;采用sh RNA敲减BGC-823细胞来源的外泌体中的linc-UFC1,作用于MKN-45细胞系,检测MKN-45细胞的linc-UFC1含量、增殖和迁移能力。结果与胃黏膜上皮细胞GES-1来源的外泌体相比,BGC-823细胞来源的外泌体中linc-UFC1的水平明显升高(q=56.12,P<0.01),而MKN-45来源的外泌体中linc-UFC1表达水平明显降低(q=5.98,P<0.01);经BGC-823外泌体处理后,与PBS组相比,MKN-45细胞内linc-UFC1水平明显升高(q=20.03,P<0.01),细胞增殖速率加快(q=25.84,P<0.01),平板克隆形成能力(q=48.73,P<0.01)和细胞迁移能力也明显增强(q=57.95,P<0.01);Linc-UFC1经敲减后,BGC-823外泌体中linc-UFC1水平明显降低(t=11.67,P<0.01);与对照外泌体处理组相比,外泌体上调胃癌细胞内linc-UFC1水平的作用被减弱(q=14.08,P<0.01),促进细胞增殖(q=14.45,P<0.01),平板克隆形成(q=18.58,P<0.01)及迁移(q=16.61,P<0.01)的作用被抑制。结论外泌体可通过转运linc-UFC1促进胃癌细胞增殖及迁移。
- 梁炜臧雪燕张宇张鹏钱晖许文荣张徐
- 关键词：外泌体长链非编码RNA胃癌
- oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进A7r5细胞趋化和迁移及脂质累积被引量：4
- 2017年
- 目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab)复合物对A7r5大鼠胸主动脉平滑肌细胞迁移、趋化和脂质累积的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用。方法体外传代细胞株,分别以oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、β2GPI、抗β2GPI抗体、β2GPI/β2GPI-Ab复合物、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TLR4阻断剂TAK-242预处理和未经预处理的A7r5细胞。提取细胞总RNA,实时荧光定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、乙酰辅酶A乙酰基转移酶1(ACAT1)的mRNA水平;收集培养上清,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、MMP-9的蛋白水平;划痕实验观察A7r5细胞的迁移。以oxLDL、oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物刺激经TAK-242预处理和未经处理的A7r5细胞,用胆固醇试剂盒检测细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量并计算胆固醇酯(CE)的含量。结果oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物促进A7r5细胞的迁移,加速胞内胆固醇的累积,促进MCP-1、MMP-9、ACAT1的表达,而TLR4阻断剂TAK-242能够抑制上述现象。结论 oxLDL/β2GPI/β2GPI-Ab复合物能经TLR4依赖的方式促进A7r5细胞趋化、迁移和脂质累积,参与动脉粥样硬化进程。
- 欧阳航周红何超张贵婷陈芋丹王婷王晓燕张鹏
- 关键词：平滑肌细胞
- oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞黏附分子表达的机制被引量：7
- 2017年
- 目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达黏附分子的影响,以及Toll样受体4(TLR4)信号通路在其中发挥的作用。方法用单纯培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、LPS分组刺激HUVEC,收集总RNA和蛋白,利用实时定量PCR和Western blot法检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管黏附分子1(VCAM-1)和冯·维勒布兰德因子(v WF)的mRNA和蛋白水平;采用TLR4阻断剂TAK-242(5μmol/L)或p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)阻断剂SB203580(10μmol/L)预处理的方式,探索阻断TLR4通路后,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附分子表达的影响,通过THP-1细胞黏附实验检测oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对HUVEC黏附能力的影响。结果与培养基对照组相比,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够显著提高HUVEC的ICAM-1、VCAM-1和v WF表达,并且能够增强HUVEC对THP-1细胞的黏附,TAK-242或SB203580处理能够抑制该过程。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够增强HUVEC的黏附分子表达和对THP-1细胞的黏附,TLR4和p38MAPK与该过程密切相关。
- 张贵婷周红何超陈芋丹欧阳航张鹏王韧
- 关键词：黏附分子
- oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物通过激活AKT通路抑制小鼠RAW264.7细胞自噬被引量：1
- 2019年
- 目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对RAW264.7小鼠巨噬细胞自噬的影响及机制。方法分别用培养基、oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物和β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理RAW264.7细胞。采用Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62的蛋白水平,采用携带双荧光蛋白和LC3基因的腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染巨噬细胞检测自噬体形成以及自噬流情况,采用蛋白激酶B(AKT)通路抑制剂LY294002(50μmol/L)预处理,观察AKT通路在oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物介导的RAW264.7细胞自噬中的作用。结果oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够降低LC3Ⅱ蛋白水平,减少自噬体数量,增加P62蛋白水平,阻断自噬流;LY294002预处理可部分恢复细胞自噬水平,改善自噬流阻断情况。结论oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物可以通过激活AKT通路抑制RAW264.7细胞的自噬。
- 吴倩倩周红何超张贵婷姚雨叶陈芋丹张鹏匡铭
- 氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞活性氧生成并诱导其凋亡被引量：3
- 2019年
- 目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响以及ROS活性氧(ROS)在其中的作用。方法分别用β2GPI、 aβ2GPI、β2GPI/aβ2GPI复合物、 oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、 oxLDL/β2GPI/兔IgG(R-IgG)复合物、 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物刺激HUVEC,利用Western blot法检测凋亡相关蛋白BAX、 Bcl2和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡率、二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)标记结合流式细胞术检测细胞ROS水平; CCK-8法检测各处理组对HUVEC活力的影响;采用抗氧化剂罗布麻宁(apocynin)或二苯基碘氯化物(DPI)预处理后观察ROS水平的改变以及对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡的影响。结果 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物能显著降低HUVEC的活力,增加细胞BAX、 c-caspase-3蛋白水平,降低Bcl2蛋白水平,促进HUVEC凋亡; oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物引起细胞ROS水平升高,抗氧化剂处理后,细胞内ROS水平降低,细胞凋亡减少。结论 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物可以通过提高ROS来诱导HUVEC凋亡。
- 陈芋丹周红何超王婷张贵婷张鹏王韧吴倩倩姚雨叶
- 关键词：凋亡
- β2GPⅠ/抗β2GPⅠ抗体复合物抑制oxLDL介导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和FAK活化
- 2019年
- 目的探讨β2糖蛋白Ⅰ/抗β2糖蛋白Ⅰ抗体复合物(β2/aβ2)对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)介导的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和黏着斑激酶(FAK)活化的影响,以及Toll样受体4(TLR4)在该过程中的作用。方法用PMA(100 ng/mL)将THP-1细胞诱导为THP-1巨噬细胞。用RPMI 1640培养液、oxLDL、oxLDL+β2/aβ2和oxLDL+脂多糖(LPS)处理THP-1巨噬细胞,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脂质转运相关分子ACAT1、ABCA1和ABCG1的mRNA水平;利用Trinder法检测THP-1巨噬细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)含量,并计算胆固醇酯(CE)含量和其占TC的比例;利用免疫荧光和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测FAK的蛋白质和mRNA表达并采用western blot检测其磷酸化;最后,利用TLR4阻断剂TAK-242(1μg/mL)预处理的方式,观察TLR4对上述过程的影响。结果β2/aβ2复合物能够抑制oxLDL引起的THP-1巨噬细胞脂质蓄积和FAK表达与磷酸化,阻断TLR4可以部分逆转这一现象。结论β2/aβ2可以抑制oxLDL引起的巨噬细胞的脂质蓄积和FAK活化,该过程与TLR4有关。
- 何超周红张贵婷陈芋丹张鹏王韧吴倩倩姚雨叶匡铭
- 关键词：黏着斑激酶THP-1巨噬细胞
- 血清外泌体lncRNA UFC1作为胃癌诊断标志物的应用和机制研究
- 目的：外泌体(exosome)携载的非编码RNA可作为新的肿瘤分子标志物,参与肿瘤发生发展.UFC1是新近发现的长度为2791Bp的长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA),在胃癌中尚无相关...
- 梁炜臧雪雁张鹏钱晖许文荣张徐
- 关键词：外泌体胃癌分子标志物
- β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对人绒毛膜细胞株JEG-3表达黏附分子及趋化因子的影响被引量：2
- 2019年
- 目的:探讨β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对人绒毛膜细胞株JEG-3表达黏附分子及趋化因子的影响,分析TLR4-MyD88信号通路在其中的作用。方法:将JEG-3细胞分组刺激:抗β2GPI抗体(100μg/ml)组,β2GPI(100μg/ml)/抗β2GPI抗体(100μg/ml)复合物组,同行对照抗体(RIgG,100μg/ml)组,无血清培养基(Media)组,β2GPI(100μg/ml)组,牛血清白蛋白组(BSA,100μg/ml)。应用RT-qPCR和Western blot及ELISA检测刺激后细胞间黏附分子VCAM-1和ICAM-1以及趋化因子IL-8在mRNA和蛋白水平上的表达;RT-qPCR和Western blot检测TLR4和MyD88在mRNA和蛋白水平上的表达;应用TLR4阻断剂TAK-242预处理的方式,进一步探讨TLR4在β2GPI/抗β2GPI抗体复合物对JEG-3黏附分子及趋化因子表达的影响。结果:β2GPI(100μg/ml)/抗β2GPI抗体(100μg/ml)复合物组相对于Media组能够显著提高JEG-3的VCAM-1、ICAM-1和IL-8表达,同时诱导TLR4-MyD88的表达,两组之间差异有统计学意义(P<0.01);TAK-242(5μmol/L)能够明显抑制该过程;抗β2GPI抗体(100μg/ml)单独组也能诱导TLR4-MyD88的表达。结论:β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够增强人绒毛膜细胞株JEG-3的黏附分子及趋化因子表达,TLR4/MyD88信号通路在其中发挥重要作用。
- 王韧周红王婷李娜何超张贵婷张贵婷张鹏张鹏
- 关键词：JEG-3
