山东省自然科学基金(Y2007C134)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：青岛大学医学院附属医院青岛大学菏泽市立医院更多>>
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- 非p53依赖通路c-myc基因对p14^ARF基因的调控及细胞凋亡的诱导被引量：1
- 2012年
- 目的了解非p53依赖通路突变型与野生型c-myc基因对p14^ARF基因表达调控及细胞凋亡的诱导功能。方法分别用携带突变型与野生型c-myc基因的慢病毒载体感染p53缺失型乳腺癌HCC1937细胞并得到二者过表达的稳定细胞株，未感染组及感染不携带c-myc基因的慢病毒细胞作空白对照和感染对照，采用反转录（RT）-PCR、Western印迹分别检测突变型与野生型c-myc及p14^ARF基因mRNA和蛋白表达，采用MTT、原位末端标记（TUNEL）检测突变型与野生型c-myc基因过表达乳腺癌HCC1937细胞增殖与凋亡情况。结果RT-PCR和Western印迹均显示突变型组与野生型组c-myc基因mRNA和蛋白过表达，突变型与野生型组c-myc蛋白[c-myc／β-肌动蛋白（actin）]表达量分别为0．560±0．010、0．651±0．010，与两对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）；野生型组p14^ARF蛋白（p14^ARF／β-actin）表达量为0．382±0．013，与两对照组相比差异均有统计学意义（均P〈0．05）；突变型组p14^ARF蛋白（p14^ARF／β-actin）表达量为0．154±0．011，与两对照组相比，差异均无统计学意义（均P〉0．05）。突变型组细胞增殖活性显著高于野生型组（P〈0．05），突变型组与两对照组细胞凋亡率比较差异均无统计学意义（均P〉0．05），野生型组细胞凋亡率显著高于突变型组与两对照组（空白对照组为3．8％±0．5％，感染对照组为3．8％±0．4％，突变型组为3．2％±0．4％，野生型组为7．1％±0．7％）（均P〈0．05）。结论非p53依赖性通路中，野生型c-myc基因过表达能明显上调p14^ARF基因表达、诱导细胞凋亡，其促进增殖功能与诱导凋亡功能保持平衡，而突变后此作用丧失，致瘤性增加。
- 刘香娟李福年姜丹丹王新刚刘相萍张佃良孟春晖
- 关键词：基因MYC基因表达调控细胞分裂细胞凋亡
- 基底细胞样乳腺癌细胞HCC1937中p21^wafl抗凋亡机制分析
- 2013年
- 目的探讨基底细胞样乳腺癌细胞HCC1937中p21^wafl抗凋亡机制。方法采用RNAi技术干扰HCC1937乳腺癌细胞中p21^wafl基因表达，以未做处理的HCC1937为对照1组，感染空白载体慢病毒的HCC1937为对照2组，感染p21^wafl-shRNA慢病毒HCC1937为实验组。RT-PCR、Western印迹检测各组p21^wafl、bim基因的mRNA及蛋白表达。原位末端转移酶标记技术（TUNEL法）检测各组的细胞凋亡。结果实验组p21^wafl基因mRNA及蛋白表达量分别为0．260±0．004、0．293±0．006，对照1组分别为0．879±0．028、0．483±0．071，对照2组分别为0．870±0．025、0．469±0．047，与两对照组相比，实验组p21^wafl基因mRNA及蛋白表达量均显著降低，均P〈0．01。实验组bim基因mRNA及蛋白为0．420±0．013、0．355±0．007，对照1组分别为0．258±0．005、0．142±0．012，对照2组分别为0．259±0．002、0．147±0．013，与两对照组相比，实验组bim基因mRNA及蛋白表达量均显著增高，均P〈0．001。实验组细胞凋亡系数为0．279±0．012，对照1组为0．145±0．008，对照组2为0．148±0．012，均P〈0．001。结论在基底细胞样乳腺癌细胞HCC1937中，p21^wafl可通过抑制bim表达，发挥其抗线粒体凋亡功能。
- 陈亚琳姜丹丹刘相萍王新刚李福年
- 关键词：乳腺肿瘤P21
- c-myc基因慢病毒载体的构建及其意义被引量：7
- 2011年
- 目的构建携带c—myc基因野生型及T58A突变型的慢病毒载体。方法应用聚合酶链反应（PCR）方法扩增c—myc野生型及T58A突变型基因，利用Gateway技术构建携带绿色荧光蛋白（GFP）基因的慢病毒载体，经PCR及基因测序鉴定后，转染293FT包装细胞，产生相应慢病毒，测定其滴度。结果PCR和测序证实，构建分别携带c—myc野生型及T58A突变型基因的慢病毒载体，并包装慢病毒，病毒滴度测定结果分别为6．10×10^7、5．65×10^7TU／ml。结论成功构建含有c—myc野生型及T58A突变型基因的慢病毒载体并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒。
- 孟春晖李福年张佃良
- 关键词：C-MYC基因慢病毒GATEWAY技术
- 非p53依赖途径c-myc对乳腺癌细胞p21Cipl基因调控及细胞凋亡的影响被引量：3
- 2013年
- 目的观察非P53依赖途径突变型（T58A）与野生型c-myc（WT）对乳腺癌细胞P21cip1基因调控及细胞凋亡的影响。方法携带c-myc T58A与WT基因慢病毒表达载体分别感染乳腺癌细胞株HCC1937（细胞感染率为85% ）,未感染者及仅感染慢病毒者为A组（空白对照组）、B组（感染对照组），感染c-myc T58A及WT者为实验组C、D组。慢病毒P21cipl/SiRNA载体感染以上各组细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot检测感染前后各组c-myc、P21cip1的mRNA和蛋白表达,原位末端转移酶标记（TUNEL）检测细胞凋亡。结果与A、B组比较，C组和D组c-myc过表达（P 〈0. 001）。感染前，C组P21CipI含量显著高于A、B、D组（P 〈 0. 001），D组P21Cipl含量最低（p〈0.01），C组细胞凋亡率显著低于A、B、D组,D组凋亡率最高，凋亡率：A组为（5.5 ±0.5）%、B 组为（5. 8 ±0.3）%、C 组为（2. 8 ±0.3）%、D 组为（9. 8 ±0.8）% （P 〈0.01）;感染后，各自组内凋亡率较前明显提高（P〈0.05）。结论非P53依赖途径中，野生型c-myc可通过下调P21eipl基因表达促进细胞凋亡，突变后（T58A）此功能减弱，诱导细胞凋亡能力降低。
- 任红李福年王宇张佃良
- 关键词：乳腺癌C-MYC脱噬作用
- 突变型与野生型c-myc在非p53依赖性通路中对Bim基因表达的影响
- 2012年
- 目的探讨突变型与野生型c-myc基因在非p53依赖性通路中对Bim基因表达调控及细胞凋亡的诱导功能。方法分别用携带突变型与野生型c-myc基因慢病毒载体感染p53缺失型乳癌HCC1937细胞,并得到二者过表达的稳定细胞株,以未感染组及感染不携带c-myc基因的慢病毒细胞做空白对照和感染对照,RT-PCR检测突变型与野生型c-myc及Bim基因mRNA表达,MTT、TUNEL检测突变型与野生型c-myc基因过表达乳癌HCC1937细胞增殖与凋亡情况。结果 RT-PCR结果显示,突变型组与野生型组c-myc基因mRNA过表达,野生型组Bim基因mRNA表达量与突变型组比较,差异有显著性(F=125.191、157.974,P<0.05)。突变型组细胞增殖活性显著高于野生型组(F=769.64,P<0.05)。突变型组与两对照组细胞凋亡率较低,三者相比差异无显著性,野生型组细胞凋亡率显著高于突变型组与两对照组(F=61.57,P<0.05)。结论非p53依赖性通路中,野生型c-myc基因过表达能明显上调Bim基因表达,通过Bim诱导细胞凋亡,而突变后此作用丧失,致瘤性增高。
- 刘香娟李福年孟春晖姜丹丹刘世海
- 关键词：细胞增殖
