湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学湖南省重点实验室
- 作品数：57 被引量：142H指数：6
- 相关作者：王海龙单世平唐滢严礼魏薇更多>>
- 相关机构：湖南城市学院化学与环境工程系山东大学生命科学学院华中农业大学生命科学技术学院农业微生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 新型蛋白酶抑制剂基因hwtx-11在大肠杆菌中的克隆表达及杀虫功能研究被引量：2
- 2007年
- 将化学合成的蜘蛛毒素蛋白酶抑制剂基因hwtx-11克隆至载体pGEX4T-1上,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达.重组菌株在IPTG诱导下,经SDS-PAGE和Western blot分析表明,表达的GST-HWTX-11融合蛋白的相对分子量约为33 kD.对重组菌株诱导表达后的产物进行生物活性测定,GST-HWTX-11融合蛋白对甜菜夜蛾(Spodoptera exiguaHubner)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)在3d时的LC50分别为86.6μg/mL、119.4μg/mL;其与Cry1Ac对甜菜夜蛾和棉铃虫幼虫毒力也有明显的协同作用.
- 夏立秋曾智贺小红付祖姣单世平丁学知孙运军李文萍王海龙罗玉双
- 关键词：WESTERNBLOT生物活性测定
- 多杀菌素研究进展
- @@本实验室从436份土壤中分离出的两株放线菌刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa).经对多杀菌素成分分析和杀虫生物活性测定，呈现了较高的杀虫毒力，其中一株已成为国家发明专利菌种(CCTCC M...
- 夏立秋唐滢杨尉寇笑笑张友明黄科学余子全胡胜标罗玉双黄瑶易勇全梅芳
- 关键词：多杀菌素刺糖多孢菌原生质体
- 文献传递
- 应用计算机对比分析苏云金杆菌Cry1A类晶体蛋白被引量：1
- 2007年
- 蛋白质的结构数据量目前还远落后于其序列数据量。本文利用蛋白质数据库和CLUSTAL W、SWISS-MODEL、ExPASy工具等对已知序列的9种Cry1A的一级结构及基本性质、二级结构、三级结构进行预测分析对比,发现其序列和结构的均高度相似,从而找出序列上的主要突变区域和三维结构的差异部位,有助于进一步认识Cry1A蛋白的作用模式和功能异同、分析其进化关系,并为重新设计Cry1A蛋白提供参考。
- 王发祥黄璠夏立秋赵新民丁学知
- 关键词：CRY数据库
- 刺糖多孢菌多杀菌素工程菌研究
- 刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)多杀菌素(spinosyns)具有高效,广谱和安全的杀虫特点,给多年来发展缓慢的生物农药的研究带来了崭新的希望。但多杀菌素发酵周期长,产量低成为有待研究解决...
- 夏立秋张友明黄科学丁学知黄璠胡胜标王海龙罗玉双易勇张成全梅芳李文萍
- 文献传递
- 毕赤酵母发酵生产颗粒性乙肝表面抗原的条件优化(英文)被引量：2
- 2008年
- 乙型肝炎病毒的流行对人们的生命健康造成了极大的威胁，而有效准确的诊断和预防性疫苗是阻止其流行的主要手段，乙肝表面抗原是诊断试剂和疫苗的主要成分。本试验在构建稳定表达HBsAg的毕赤酵母菌株后，对其发酵条件进行了研究。采用摇瓶分批培养方法，探讨了不同培养基、溶解氧、诱导物甲醇的浓度以及pH值等因素对菌体生长与重组蛋白表达的影响。在10L发酵罐上采用分批补料培养的方法研究了进行扩大培养生产重组HBsAg。结果表明，FBS无机盐合成培养基是理想的工业发酵培养基，溶解氧对菌体的生长与表达有显著的影响，甲醇诱导最佳终浓度为1％（V／V），发酵的最适pH值为5．4～6．0。发酵罐放大培养后，ELISA和SDS—PAGE分析表明重组HBsAg获得了高效表达，最终菌体生物量达到310 OD600，表达量达到27mg／L。电子显微镜观察表达重组乙肝抗原可以自组装为22nm类病毒颗粒，为HBV的新一代早期血清学诊断和疫苗的大规模生产提供了一定的参考。
- 刘如石林亲录孙意邱义兰徐甜丁海郭向荣
- 关键词：发酵参数毕赤酵母重组乙肝表面抗原
- 抗肿瘤靶向工程菌的高密度发酵及菌粉研制
- 2018年
- 为获得侵袭性抗肿瘤靶向工程菌株Ec NA高菌体浓度的培养基配方,在单因素试验的基础上,通过PlackettBurman试验筛选出对菌体浓度影响最显著的因素为酵母抽提物、K_2HPO_4用量,对显著影响因素进行中心组合试验响应面分析。结果表明最佳培养基成分为:可溶性淀粉2 g/L、酵母抽提物50.3 g/L、K_2HPO_4 14.26 g/L、KH_2PO_43 g/L、MgSO_4 0.3 g/L、微量元素母液2 mL/L、接种量3%。发酵后溶液中菌体OD600 nm达到7.602,菌体生物量达到2.96×109 CFU/mL,比优化前提高了78.3%。以冻干保护剂在冷冻干燥过程中对工程菌株的保护效果为研究对象,通过正交试验得到制成菌粉的最佳保护剂配方为脱脂乳14.25 g/100 mL、蔗糖3 g/100 mL、抗坏血酸钠3 g/100 mL,优化后菌体冻干粉存活率可达86.32%,利于制成延长贮存期的口服菌粉胶囊。
- 王灿莫湘涛张峰吴柳娟李躺夏立秋
- 关键词：高密度发酵响应面分析法冻干保护剂
- 叶柄粘球菌CA3的分离鉴定及其抗肿瘤活性初步研究被引量：1
- 2018年
- 为寻找新的粘细菌次级代谢产物,分别采用滤纸片和大肠杆菌两种诱导法诱导粘细菌子实体的形成,挑取子实体多次转接以纯化菌株,从中筛选获得1株粘细菌CA3.通过菌体形态观察、生理生化试验和16S rDNA同源性分析的方法对其进行鉴定归类,确认其为叶柄粘球菌(Myxococcus stipitatus)新菌CA3.对粘球菌CA3发酵上清液进行细胞毒性试验,结果表明其对肿瘤细胞B16和SMMC-7721有很强的抑制效果,为后续的抗肿瘤活性组分结构解析和抗肿瘤机制的研究提供了重要基础.
- 廖继燕吴雨婧周偲龚亮夏立秋
- 关键词：粘细菌RDNA抗肿瘤活性
- 定点突变技术研究苏云金杆菌Cry1类晶体蛋白结构与功能的进展被引量：1
- 2007年
- 近年来利用定点突变技术研究苏云金杆菌(Bacillus thuringiesis,Bt)杀虫晶体蛋白(Insecticidal crystal proteins,ICP)作用机制已取得良好进展.杀虫晶体蛋白不同结构域上氨基酸残基的突变将影响其稳定性,与受体的结合,不可逆的昆虫中肠膜插入及离子通道活性的强弱等.突变研究表明,结构域Ⅰ参与不可逆结合及插入昆虫中肠膜过程;结构域Ⅱ参与受体结合,包括初始结合与不可逆结合;结构域Ⅲ在杀虫特异性和维持三维结构的稳定性方面起重要作用,同时,可能参与离子通道的形成,受体结合和插入昆虫中肠膜过程.利用各种定点突变技术对各位点进行突变可以研究单一位点的功能,到目前为止,已有很多关于这方面的研究,并且筛选到了毒力提高的工程菌株.
- 张春艳胡胜标单世平夏立秋
- 关键词：苏云金杆菌杀虫晶体蛋白定点突变
- 一种纯化苏云金杆菌Cry1Ac蛋白的方法被引量：1
- 2011年
- Cry蛋白的纯化技术在很大程度上制约了其结构与功能的研究。为此,提出了一种以等电点沉淀方法纯化苏云金杆菌Cry1Ac的原毒素,用分子筛层析纯化其活性毒素的方法。结果表明:Cry1Ac的原毒素在pH值5.05条件下沉淀纯化效果好;以纯化的原毒素激活进行分子筛层析,收集其最大峰便可获得较高浓度的活性毒素;该方法不仅纯化效果好,而且省去层析后的浓缩步骤,是Cry蛋白的纯化方法研究中的一次革新,对推动Cry蛋白的结构和功能研究具有重要的意义。
- 王发祥刘永乐丁学知夏立秋
- 关键词：苏云金杆菌CRY1AC纯化
- 苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白提取方法比较研究被引量：3
- 2007年
- 采用液体双相分层法和等电点沉淀法提取苏云金芽孢杆菌伴胞晶体蛋白．原子力显微镜观测，发现液体双相分层提取的晶体蛋白具有完整典型的晶体结构；等电点法提取的得率高，不能检测到完整的晶体结构．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，等电点法提取的蛋白质含量是液体双相法提取的蛋白含量的1～2倍．将2种方法提取的晶体蛋白对初孵棉铃虫幼虫生物测定均表现杀虫生物活性，经统计分析，液体双相法提取的蛋白质生测毒力比等电点法的高1．5～3倍．
- 罗朝辉夏立秋丁学知王海龙曾智
- 关键词：苏云金芽孢杆菌等电点原子力显微镜聚丙烯酰胺凝胶电泳
