吴秀秀
- 作品数：5 被引量：4H指数：1
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：广东省科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学理学更多>>
- 耐高温耐酸稳定假密环菌(Armillariella tabescens)MAN47β-甘露聚糖酶体外分子定向进化被引量：2
- 2012年
- 从已经建立的易错PCR初级突变文库中筛选得到的16个兼具耐酸、高温稳定、高酶活力的克隆出发,将其作为DNA shuffling的亲本基因,利用DNA shuffling技术,结合易化筛选和96微孔板通量筛选的方法获得耐酸、高温稳定的克隆。并且,对筛选出来的耐酸高温稳定的突变子进行测序分析和同源建模,比较分析β-甘露聚糖酶突变基因序列的生物学信息。经过两轮DNAshuffling,最终筛选得到一个耐酸高温稳定突变体1108,其在90℃时酶活力还能维持在70%;在pH 3.0时酶活力维持在70%;在高温80℃和pH 4.0的条件下,酶活力是野生型的10倍;常规条件下(pH 6.0,40℃),酶活力是野生型酶的5倍。序列比对发现耐酸、高温稳定突变体1108有三个碱基发生了改变(T289A、A535T、T1085C),导致相应的氨基酸发生了改变(Ser97Thr、Val362Ala、Ile179Leu)。根据同源建模结果和氨基酸性质研究发现,突变位点位于催化中心附近,推测第97位的突变与酶的耐酸性和活性有关,第179位和第362位的突变与酶的高温稳定性有关。实验结果为进一步了解β-甘露聚糖酶MAN47的结构与功能之间的关系提供有用参考。
- 吴秀秀吕晓慧胡亚冬谢春芳刘大岭姚冬生
- 关键词：定向进化Β-甘露聚糖酶DNASHUFFLING
- 基于分子结构评价的Bacillus subtilis β-1,4-内切木聚糖酶胰蛋白酶抗性的理性设计被引量：1
- 2016年
- 饲料用酶在饲喂过程中,不可避免地会受到消化道中蛋白酶的破坏而令其使用效率受到影响,因此,饲料酶的蛋白酶抗性是其十分重要的性质之一。基于酶反应原理与计算化学理论对Bacillus subtilis 168β-1,4-内切木聚糖酶(Xyn A)的胰蛋白酶抗性进行理性设计,最终得到三个突变体——Xyn A^(R121C)、Xyn A^(R121C/K98Q)和Xyn A^(K39I)。酶学性质分析显示Xyn A^(R121C)和Xyn A^(R121C/K98Q)与野生型(Xyn A)的最适反应温度均为60℃,Xyn A^(K39I)为40℃;突变体酶与野生型酶的最适p H都是6.0;人工肠液(p H 6.8,10 mg/ml胰蛋白酶溶液)处理野生型及其突变体后,Xyn A^(R121C/K98Q)和Xyn A^(R121C)的残留酶活力均明显比野生型高,它们的半衰期分别是野生型的2.02倍和1.52倍,Xyn A^(K39I)在胰蛋白酶溶液中的半衰期为90min,比野生型缩短了37 min。
- 虞晓丹吴秀秀姚冬生刘大岭谢春芳
- 关键词：木聚糖酶酶稳定性
- 对胰蛋白酶抗性提高的β-1,4-内切木聚糖酶及其制备方法与用途
- 本发明公开了一种对胰蛋白酶抗性提高的β‑1,4‑内切木聚糖酶。该酶是由氨基酸序列为SEQ ID NO.1的β‑1,4‑内切木聚糖酶中制造两个氨基酸取代而产生的，对胰蛋白酶抗性更强的β‑1,4‑内切木聚糖酶，所述的氨基酸取...
- 姚冬生吴秀秀谢春芳刘大岭
- 文献传递
- 对胰蛋白酶抗性提高的β-1,4-内切木聚糖酶及其制备方法与用途
- 本发明公开了一种对胰蛋白酶抗性提高的β-1,4-内切木聚糖酶。该酶是由氨基酸序列为SEQ？ID？NO.1的β-1,4-内切木聚糖酶中制造两个氨基酸取代而产生的，对胰蛋白酶抗性更强的β-1,4-内切木聚糖酶，所述的氨基酸取...
- 姚冬生吴秀秀谢春芳刘大岭
- Bacillus subtilis 168β-1,4-内切木聚糖酶胰蛋白酶抗性的理性设计
- 目的：蛋白质工程产生于20世纪80年代，其实施策略有两种：以定点突变为代表的理性设计和以定向进化为代表的非理性设计。理性设计是蛋白质改造的基本技术，其中，最关键的问题是弄清酶蛋白分子结构与功能之间的关系，有目标的选取突变...
- 吴秀秀
- 关键词：蛋白质工程木聚糖酶同源建模重叠延伸PCR
- 文献传递
