孙小琴
- 作品数：7 被引量：25H指数：3
- 供职机构：南昌大学生命科学与食品工程学院更多>>
- 发文基金：江西省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 寒兰基因组DNA ISSR-PCR反应条件的优化被引量：5
- 2009年
- 以改良的CTAB法提取的寒兰（Cymbidium kanran Makino）基因组DNA为模板，通过单因子试验建立最适的寒兰的ISS-PCR反应体系。结果表明，适宜寒兰ISSR-PCR反应体系的扩增条件为：25 μl PCR 反应体积中，1×PCR buffer，2.0 mmol/L MgCl2，300 ng 模板 DNA，200 μmol/L dNTP，1.40 U Taq DNA 聚合酶，0.4 μmol/L 引物。最佳扩增程序为：94 ℃预变性 5 min，然后进行40个循环：94 ℃ 变性 30 s，复性温度根据各引物的Tm值略低1～2 ℃，30 s，72 ℃ 延伸 50 s，循环结束后 72 ℃ 延伸7 min。
- 孙小琴李恩香贾文杰彭德镇孔令杰杨柏云
- 关键词：寒兰
- 建兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化(摘要)(英文)被引量：3
- 2010年
- [目的]研究建兰[Cymbidium ensifolium(Linn.) Sw]总基因组DNA的提取方法,并对建兰ISSR-PCR反应体系进行优化,建立更为完善的反应体系。[方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,用1.0%琼脂糖电泳检测DNA质量;用分光光度计测定其纯度和浓度,DNA纯度以OD260/OD280的比值来估算,浓度估算法为:DNA浓度(ng/μl) =OD260×50×稀释倍数。计算DNA获得率(DNA量/所用叶片量×100%)。对建兰ISSR-PCR反应的4项影响因素(DNA模板、TaqDNA聚合酶、Mg2 +和dNTPs)逐个作5水平进行研究,以筛选最优的建兰ISSR-PCR反应体系。[结果]获得高质量的建兰基因组DNA,以及优化了的建兰ISSR-PCR反应体系,即25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.5 mmol/LMgCl2,240 ng模板DNA,160μmol/LdNTPs,1.25 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,双蒸水15.78μl。最佳扩增程序为:94℃预变性5min,然后进行40个循环:94℃变性30 s,50 ～60℃退火(退火温度随引物不同而定) 30 s,72℃延伸50 s,72℃延伸7 min。[结论]建立了建兰ISSR-PCR反应体系最适合的条件,为进一步利用ISSR分子标记技术进行建兰遗传多样性研究提供了基础。
- 王朝雯孙小琴杨柏云
- 关键词：建兰ISSR分子标记ISSR-PCR反应体系
- 钩距虾脊兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化被引量：4
- 2009年
- [目的]为钩距虾脊兰种质资源研究奠定基础。[方法]以钩距虾脊兰为试验材料,利用改良的CTAB法提取钩距虾脊兰基因组DNA,并对影响ISSR扩增反应的各因素进行优化。[结果]获得了高质量的钩距虾脊兰基因组DNA;同时,建立了最适的钩距虾脊兰ISSR-PCR体系,即25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,100 ng模板DNA,240μmol/L dNTPs,1.75 UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物;最佳扩增程序为94℃预变性5 min,然后进行40个循环:94℃变性30 s,复性温度根据各引物的TM值略低1～2℃,30 s,72℃延伸50 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存。[结论]这一优化系统的建立为进一步利用ISSR分子标记技术进行钩距虾脊兰遗传多样性研究提供了基础。
- 彭德镇孙小琴孔令杰李恩香杨柏云
- 关键词：DNA提取ISSR分子标记
- 蕙兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化(英文)被引量：2
- 2010年
- [目的]以蕙兰(Cymbidium faberi Rolfe)基因组DNA为模板,对影响ISSR-PCR扩增结果的因素进行筛选和优化,建立适合蕙兰的ISSR-PCR的最佳反应体系。[方法]利用改良的CTAB法提取蕙兰基因组DNA,并对影响ISSR-PCR扩增结果的因素进行优化。[结果]获得了高质量的蕙兰基因组DNA并建立了最适的蕙兰ISSR-PCR体系(25μl),即2.5μl10×PCRbuffer,2.0mmol/LMgCl2,60ng模板DNA,160μmol/LdNTPs,1.25UTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,双蒸水15.85μl;最佳扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性30s,复性温度比引物的Tm值低2～3℃,30s,72℃延伸50s,40个循环;72℃延伸7min。[结论]该优化体系的建立可为今后利用ISSR标记技术进行蕙兰遗传多样性研究提供依据。
- 汤秀菲孙小琴彭德镇杨柏云
- 关键词：蕙兰ISSR
- 台兰ISSR-PCR反应体系的建立与优化被引量：2
- 2014年
- [目的]建立台兰稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系。[方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,并对影响台兰ISSR-PCR反应体系的主要成分进行筛选和优化。[结果]台兰的ISSR-PCR优化反应体系为：25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,100 ng模板DNA,0.5 mmol/L dNTPs,0.22 U Taq DNA聚合酶,0.4μmol/L引物,15.78μl双蒸水。最佳扩增程序为：94℃预变性5 min,然后进行40个循环：94℃变性30 s,复性温度根据各引物的TM值略低1～2℃,30 s,72℃延伸50 s,循环结束后72℃延伸7 min。[结论]台兰ISSR-PCR优化反应体系为今后利用ISSR技术进行台兰种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。
- 王朝雯王云艳肖春宏孙小琴杨柏云
- 关键词：ISSR分子标记ISSR-PCR反应体系
- 江西省野生寒兰的ISSR遗传多样性研究
- 本研究采用ISSR分子标记主要对江西省寒兰/(Cymbidium kanran Makino/)的遗传多样性进行了分析,目的在于了解寒兰居群的遗传多样性水平、遗传结构以及居群间的遗传分化,为寒兰资源的保护与开发利用提供理...
- 孙小琴
- 关键词：寒兰ISSR分子标记遗传分化
- 文献传递
- 春兰ISSR-PCR反应体系的建立和优化被引量：10
- 2008年
- [目的]为进一步从分子水平上研究春兰种群的遗传多样性奠定基础。[方法]以春兰基因组DNA为模板,通过单因子试验研究ISSR反应体系中主要成分对扩增结果的影响,以寻找适合春兰ISSR分析的反应体系。[结果]春兰的ISSR反应体系较适宜的扩增条件为：25lμPCR反应体积中,15.78μl双蒸水,2.5μl 1×CR buffer,1.1 UTaqDNA聚合酶,100 ng基因组DNA,2.0 mmol/L MgCl2,150μmol/LdNTPs,2μmol/L引物。最佳扩增程序为：94℃预变性5 min,然后进行40个循环;94℃变性45 s,复性温度比各引物的TM值略低1～2℃,45 s,72℃延伸75 s,循环结束后72℃延伸7 min,4℃保存。[结论]该优化系统的建立为进行春兰鉴定及种质遗传多样性分析提供了一个标准化程序。
- 马丽娅孙小琴贾文杰李恩香杨柏云
- 关键词：春兰ISSR反应体系优化
