王海伟
- 作品数：48 被引量：46H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省科技攻关计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 表达A型口蹄疫病毒衣壳蛋白重组腺病毒的构建被引量：3
- 2012年
- 为构建表达A型口蹄疫病毒(FMDV)衣壳蛋白的重组腺病毒,本研究通过人工合成A型FMDVP1-2A、2B和3C融合基因,将其克隆到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,利用E.coli BJ5183内同源重组将目的基因插入腺病毒骨架质粒pAdEasy-1中,获得携带A型FMDV P1-2A-2B-3C基因的重组AdEasy-1。该重组质粒经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rAd-A09。经PCR检测,该重组腺病毒在传代过程中目的基因稳定存在,病毒滴度在第8代时可达到108.5TCID50/mL。间接免疫荧光检测和western blot分析表明,rAd-A09在AD-293细胞中产生FMDV的结构蛋白VP0、VP1和VP3。该重组腺病毒的构建为口蹄疫新型疫苗的研究奠定了基础。
- 宋姗姗王海伟周国辉于力
- 关键词：A型口蹄疫病毒重组腺病毒衣壳蛋白
- 单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位及其应用
- 本发明公开了单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位及其应用。本发明首先公开了单克隆抗体3D9识别的口蹄疫病毒血清型共享性表位，其氨基酸序列为SEQ ID NO：2所示。本发明所述口蹄疫病毒血清型共享性表位是七个...
- 于力周国辉王海伟杨德成
- O型泛亚谱系口蹄疫病毒cDNA感染性克隆的建立被引量：10
- 2009年
- 本研究采用RT-PCR技术将O型口蹄疫病毒(FMDV)O/YS/CHA/05株全长基因组分4个cDNA片段进行克隆、拼接,构建了具有感染性的FMDV cDNA克隆pOKT7-O/YS/CHA/05。将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05在细胞外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞,经培养可见典型的细胞病变(CPE)。同时,将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05与含有编码T7 RNA聚合酶的真核表达重组质粒共转染BHK-21细胞,同样也观察到典型的CPE。对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记,即在病毒核酸的3510位人工消除了XbaⅠ酶切位点。免疫电镜观察和间接免疫荧光试验进一步表明,拯救出了FMDV。病毒生长比较试验表明,拯救病毒与亲本病毒具有相似的增殖特性。本研究构建了O型口蹄疫病毒的感染性克隆并获得了拯救病毒,为深入研究FMDV的致病机理以及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台。
- 杨德成涂亚斌王海伟周国辉于力
- 关键词：口蹄疫病毒全长CDNA病毒拯救
- 分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系及其应用
- 本发明公开了分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系及其应用。本发明首先公开了一株分泌口蹄疫病毒共享型单克隆抗体3D9的杂交瘤细胞系，其微生物保藏编号为CGMCC No.13293。本发明还公开了由所述杂交瘤细...
- 于力周国辉王海伟杨德成
- O型和Asia1型口蹄疫病毒感染RT-PCR鉴别诊断方法的建立被引量：9
- 2007年
- 根据GenBank中O型和Asia1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的vp3、vp1和2A基因序列,并与其它血清型FMDV的对应基因序列进行比较,设计用于扩增O型和Asia1型FMDV vp1基因的特异性引物,建立O型和Asia1型FMDV RT-PCR鉴别诊断方法。本方法首先用通用型引物进行RT-PCR,确定是否为FMDV感染,然后用特异性引物鉴别O型或Asia1型FMDV的感染。用vp1基因序列分析进行符合性试验,验证了该方法所具有的特异性和敏感性。本方法可用于O型和Asia1型FMD的快速诊断及流行病学调查。
- 涂亚斌周国辉张亚科王志国张守红王海伟于力
- 关键词：O型口蹄疫病毒ASIA1型口蹄疫病毒RT-PCR鉴别诊断方法
- Asia1型口蹄疫病毒耐酸株的筛选及其耐酸表型的分子决定因素
- 口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的,主要侵害偶蹄动物的一种急性和热性传染病.FMDV是微RNA病毒科口蹄疫病毒属的成员,属于单股正链RNA病毒.在发展中国家,口蹄疫的防控主要依靠灭活疫苗的免疫接种.对于口蹄...
- 王海伟宋姗姗曾健雄谢小春杨德成周国辉于力
- 表达亚洲1型口蹄疫病毒VLP的重组腺病毒及其应用
- 本发明公开了表达亚洲1型口蹄疫病毒VLP的重组腺病毒及其应用。本发明将FMDV衣壳蛋白前体P1-2A基因和3C基因拼接在一起而得到一种融合基因，其碱基序列为SEQ ID NO：1所示。将SEQ ID NO：1所示的碱基序...
- 于力周国辉王海伟王芳
- 高致死性牛传染病在我国的发生、流行和危害
- 引言近年来在牛群中发生和流行的高度致死性牛传染病,对我国养牛业造成极其严重的危害,是牛存栏量急剧下降、牛肉价格暴涨、奶源紧张的最主要因素。本研究小组自2005年开始对牛群中的高度致死性传染病进行病原流行病学调查、病原变异...
- 于力常继涛姜志刚周国辉王海伟杨德成王芳
- 关键词：变异株口蹄疫传染病
- 猪圆环病毒2型病毒样颗粒和塞内卡病毒灭活二联疫苗免疫效力实验被引量：4
- 2022年
- 为评价猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP)和塞内卡病毒(SVV)全病毒灭活二联疫苗免疫效果,本研究将PCV2-VLP与SVV全病毒灭活疫苗等体积混合,加入ISA201佐剂乳化制备成PCV2-VLP和SVV全病毒灭活二联疫苗,并以PCV2-VLP疫苗和SVV全病毒灭活疫苗分别作为对照,3组疫苗免疫仔猪后于不同时间采集血清,通过间接ELISA检测血清中PCV2特异性抗体,采用中和试验法检测SVV中和抗体,结果显示单独使用PCV2疫苗免疫组仔猪PCV2特异性抗体水平稍高于二联疫苗免疫组,但二者无显著差异(P>0.05);二联疫苗免疫组与单独使用SVV疫苗免疫组仔猪SVV中和抗体效价也相当。首免后28 d相应实验组分别经滴鼻肌注各2 mL感染PCV2(10^(5)TCID50/mL)或SVV(10^(9.5)TCID50/mL),进行攻毒保护试验,结果显示二联疫苗免疫效果与PCV2单苗免疫效果相当,针对PCV2的攻毒保护率均为80%;针对SVV攻毒,二联疫苗免疫组及SVV单苗免疫组仔猪均无明显临床症状,保护率均为100%。以上结果表明PCV2-VLP和SVV全病毒灭活二联疫苗免疫效果与单独PCV2疫苗或SVV疫苗免疫效果相当,该灭活二联苗免疫仔猪后能够诱导机体产生体液免疫应答,具有良好的免疫保护作用。本研究首次将PCV2-VLP和SVV全病毒灭活疫苗进行联合免疫,试制了PCV2-VLP和SVV全病毒灭活二联疫苗,并评价了其对仔猪的免疫效力,该疫苗对临床预防PCV2及SVV感染具有潜在的应用价值。
- 段卫同王海伟孙明霞王尚辉王刚于力蔡雪辉涂亚斌
- 关键词：猪圆环病毒2型二联疫苗免疫效力试验
- 脑心肌炎病毒IRES置换不影响口蹄疫病毒的复制和毒力被引量：1
- 2015年
- 内部核糖体进入位点(IRES)是微RNA病毒起始蛋白合成的关键元件。为研究IRES元件在病毒致病过程中的作用,本研究以口蹄疫病毒(FMDV)为模型,在已建立的O型FMDV c DNA感染性克隆的基础上,利用融合PCR的方法以脑心肌炎病毒(EMCV)的IRES替换FMDV的IRES,构建并拯救出含有EMCV IRES的嵌合病毒(r FMDV-EIRES)。一步生长曲线结果显示r FMDV-EIRES无论是在鼠源BHK-21细胞还是在猪源IBRS-2细胞中的复制能力均与亲本病毒相近。另外,r FMDV-EIRES对乳鼠的致病力与亲本病毒也相同。以上研究结果表明,虽然EMCV IRES与FMDV IRES一级序列存在显著差异,但二者的置换并不影响FMDV的复制和毒力,该结果有助于加深IRES在微RNA病毒复制和致病性功能的认识。
- 高荣远杨德成孙超周国辉王海伟于力
- 关键词：内部核糖体进入位点口蹄疫病毒病毒拯救
