石燕
- 作品数：10 被引量：33H指数：3
- 供职机构：江苏大学基础医学与医学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目江苏省卫生厅资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人外周血CD8^+T细胞Runx3的基因克隆及其原核表达被引量：2
- 2009年
- 目的:克隆人Runx3基因全长编码区的cDNA,进行鉴定和测序分析,并利用载体pQE30在大肠埃希菌(M15)原核表达人Runx3基因全长序列,为从转录水平探讨Runx3基因与免疫相关性疾病以及肿瘤发生发展的关系奠定基础。方法:MACS分离外周CD8+T细胞;采用RT-PCR方法从人外周血CD8+T细胞获得Runx3基因的cDNA,并连接pMD19-T载体导入大肠埃希菌DH5α,选择阳性克隆,应用M13F/R通用引物进行双向反应测序,以作序列鉴定。利用PCR技术从克隆载体pMD19-T/Runx3获得人Runx3的全长编码序列,亚克隆至原核表达载体pQE30,形成重组表达质粒pQE30/Runx3;酶切鉴定挑选阳性重组质粒转化大肠埃希菌M15,测序鉴定后经IPTG30℃诱导4h,SDS-PAGE电泳判断以包涵体形式存在的带有His标签的融合蛋白并进行Western blot鉴定。结果:扩增获得的Runx3基因CDS区全长1248bp,编码415个氨基酸残基,与GenBank中发表的序列完全一致。成功构建了原核表达载体pQE30/Runx3,并在工程菌M15中获得大量表达.结论:获得了人Runx3基因的克隆,并成功原核表达和制备出人Runx3融合蛋白。
- 李雅贞王胜军石燕戴晓莉彭素芳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：RUNX3基因CDNA克隆原核表达
- 类风湿关节炎患者外周血高迁移率族蛋白1RORγ／t和白细胞介素-17表达水平的检测及临床意义被引量：3
- 2010年
- 目的检测类风湿关节炎（RA）患者外周血高迁移率族蛋白1（HMGB1）及Th17细胞特异性转录因子、相关细胞因子的表达水平，同时分析其与C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）和类风湿因子（RF）的关系，初步探讨RA患者HMGB1的表达水平及其与Th17的关系。方法收集80例RA患者外周血标本，其中静止期32例、活动期48例，健康志愿者50名。采用实时荧光定量聚合酶链反应（QRT—PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）中HMGB1、RORγt和白细胞介素（IL）-17的mRNA水平；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血浆HMGB1、IL-17、IL-23的蛋白浓度，采用单因素方差分析和Spearillan相关分析进行统计学处理。结果RA患者PBMC中HMGB1、RORγt和IL一17mRNA的表达水平均高于健康对照组（P〈0．05），且活动期[HMGB1（0．424±0．262）pg／ml，RORγt（0．34±0．25）pg／ml，IL-17（1．42±0．38）pg／ml]明显高于静止期（R0．01）。血浆HMGB1、IL-23和IL-17蛋白水平也显示类似的结果，RA组明显高于健康对照组（P〈0．05），且与CRP、ESR、RF呈正相关（P〈0．05）。结论检测RA患者外周血HMGB1和Th17细胞特异性转录因子及相关细胞因子水平，有助于探讨HMGB1和IL-17在RA发病过程中的病理生理作用，也为寻找RA的治疗靶点提供了新的思路。
- 石燕王胜军陈建国薛渊何志强周成林郑东杨恒李雅贞仝佳苏兆亮邵启祥许化溪
- 关键词：白细胞介素17
- 远红荧光蛋白HcRed基因的原核和真核表达及鉴定
- 2010年
- 目的:分别构建携带HcRed基因的PET28a(+)原核和PIRES真核载体,并分别在大肠埃希菌和鼠树突状细胞系(DC2.4)中表达、鉴定,为后续基因及蛋白的转染提供基础。方法:参照基因库中HcRed1基因序列,设计HcRedCDS全长引物,以含有HcRed的质粒为模板,通过PCR获得目的基因,并分别连接于PET28a(+)原核载体和PIRES真核载体。经PCR、酶切鉴定后,原核载体转化大肠埃希菌,经IPTG诱导表达;真核载体用脂质体转染DC2.4,G418筛选出克隆后,应用RT-PCR和流式细胞仪进行检测。结果:扩增出687 bp的HcRedCDS区序列,构建了原核和真核表达载体PET28a(+)/HcRed和PIRES/HcRed,分别于大肠埃希菌和DC2.4细胞系中成功表达。结论:成功构建HcRed基因的原核、真核表达载体,并分别在工程菌和细胞系中成功表达,为后续基因及融合蛋白的筛选、示踪和体内观测奠定了基础。
- 何志强薛渊石燕杨恒赵银霞王楷文周成林王胜军邵启祥焦志军许化溪
- 关键词：原核表达
- 小鼠高迁移率族蛋白1cDNA克隆、原核表达与鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:克隆并原核表达小鼠高迁移率族蛋白1(high mobility group box1,HMGB1)。方法:从小鼠脾脏细胞中提取总RNA,应用RT-PCR获得小鼠HMGB1cDNA,经PCR扩增小鼠HMGB1基因;通过T-A克隆将该基因构建到PMD-18T载体中,测序鉴定;将该基因插入pET-28a(+)表达载体,IPTG诱导后,可表达相对分子质量约30 kDa的蛋白。蛋白质印迹鉴定表达的目的蛋白。结果:经RT-PCR扩增得到648 bp的DNA片段,序列分析显示与基因库中报道的已知序列完全一致;构建了含有HMGB1编码序列的原核表达载体,经诱导表达、蛋白质印迹鉴定,获得相对分子质量约30 kDa的融合蛋白。结论:成功克隆和表达了小鼠HMGB1基因,为HMGB1蛋白的功能试验奠定了基础。
- 石燕戴晓丽薛渊何志强周成林王胜军苏兆亮陈建国夏圣邵启祥黄新祥许化溪
- 关键词：高迁移率族蛋白克隆原核表达
- T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究被引量：1
- 2010年
- 目的:构建靶向Th1细胞特异性转录因子T-bet的小发卡结构RNA(shRNA)的真核表达载体,并评价其功能,为开展T-bet相关性疾病的免疫干预研究奠定基础。方法:设计并合成靶向T-bet的shRNA序列,构建真核表达载体,并转染DC2.4细胞;MTT法检测转染后DC2.4细胞增殖能力,用RealtimePCR和Westernblot分别从基因及蛋白水平检测转染前后DC2.4细胞T-bet表达水平变化;RealtimePCR检测IFN-γ的mRNA;流式细胞术(FCM)检测细胞表面CD80、CD86与MHCⅡ类分子表达情况。结果:构建的T-bet靶向shRNA真核表达载体,能够显著抑制DC2.4细胞T-bet的表达,且转染后DC2.4细胞增殖受到抑制,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达下调,IFN-γmRNA水平显著下降。结论:成功地构建了T-betshRNA真核表达载体,转染DC2.4细胞后能有效地抑制其T-bet、IFN-γ的表达,影响其抗原提呈功能。
- 薛渊王胜军何志强石燕周成林马洁仝佳邵启祥许化溪
- 关键词：T-BET真核表达树突状细胞
- Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立
- 2010年
- 目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,用脂质体转染DC2.4;应用G418筛选出耐药克隆,有限稀释法进行单克隆。通过观察EGFP的表达选定单克隆细胞株,再用流式细胞术分析、Real-time PCR和Western blot进行鉴定。结果:构建了PIRES2-mHlx-EGFP真核表达载体,并成功建立mHlx修饰和EGFP修饰的细胞系(DC2.4/mHlx和DC2.4/EGFP)。结论:成功建立稳定高表达mHlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx,为深入探讨mHlx功能构建了平台,为Hlx修饰后的树突状细胞作为工具细胞的应用奠定了基础。
- 何志强王胜军薛渊石燕柳迎照仝佳陈建国邵启祥许化溪
- 关键词：DC2.4EGFP
- 转录因子T-bet/GATA3在EV71感染患儿外周血单个核细胞中的表达及其与相关细胞因子的关系
- 陈建国柳迎昭耿建忠石燕苏兆亮茅凌翔
- 胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子与相关细胞因子的检测及临床意义被引量：24
- 2010年
- 目的了解胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的转录因子及其相关细胞因子的表达水平，探讨其在胃癌发展进程中的作用。方法收集57例胃癌患者、31例胃部良性疾病患者和40例健康志愿者的外周血，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（QRT-PCR）技术，检测外周血单个核细胞中Th17和Treg细胞的特异性转录冈子RORγt和FoxP3mRNA的表达水平；采用酶联免疫吸附试验（ELISA），检测胃癌患者血浆中IL一17、IL-23、转化生长因子β（TGF一β）和IL一10的浓度。结果胃癌组FoxP3和RORγt／tmRNA的表达水平分别为2．349±0．491和0．794±0．304，明显高于健康对照组和良性疾病组（均P〈0．05），FoxP3／RORγt比值也高于健康对照组和良性疾病组（P〈0．05），而良性疾病组与健康射照组差异无统计学意义（P〉0．05）。中晚期胃癌组的FoxP3／RORγ／t比值明显高于早期胃癌组（P〈0．05）。胃癌组血浆中IL一17、IL一23、TGF一β和IL一10的水平明显高于健康对照组（P〈0．05），中晚期胃癌组TGF一β和IL一10水平明显高于早期胃癌组（P〈0．05）。结论胃癌患者存在高Th17和Treg细胞水平，且随着病程的进展Treg细胞仍维持强势，FoxP3／RORγt比值明显增高。监测胃癌患者外周血Th17和Treg细胞的特异性转录因子和相关细胞因子水平，有助于对病程的判断。
- 彭素芳王胜军陈建国戴晓莉石燕李雅贞苏兆亮薛渊何志强黄新祥许化溪
- 关键词：RORΓTFOXP3TREG细胞
- 转录因子T-bet/GATA3在EV71感染患儿外周血单个核细胞中的表达及其与相关细胞因子的关系被引量：3
- 2011年
- 目的探讨转录因子T-bet/GATA3在肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染患儿外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达及其与相关细胞因子的关系。方法收集42例EV71感染患者外周血标本,其中急性期28例、恢复期14例,另外健康对照组21例。采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测PBMC中T-bet和GATA3 mRNA水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血浆IFN-γ和IL-4的蛋白浓度。结果急性EV71感染患者PBMC中的T-bet mRNA表达和血浆IFN-γ水平明显低于健康对照组(P<0.05),急性EV71感染患者GATA3 mRNA的表达和IL-4水平则明显高于健康对照组(P<0.05)。结论急性EV71感染患者存在Th2优势分化,可能与转录因子T-bet表达下调、GATA3表达上调有关。监测EV71感染患者外周血Th1/Th2细胞特异性转录因子与相关细胞因子的水平,有助于对病情的判断。
- 耿建忠柳迎昭石燕苏兆亮茅凌翔陈建国
- 关键词：肠道病毒A型转录因子病例对照研究
- 胃癌患者Th17/Treg转录因子及相关细胞因子mRNA的检测及其临床意义
- 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,每年死于胃癌的病人占全部恶性肿瘤死亡患者的1/5。有研究表明,Treg细胞在肿瘤患者诱导免疫耐受,促进肿瘤增长,是肿瘤免疫的重要负向调节因素。Th17细胞是CD4+T细胞的一个新亚群,在炎症和...
- 彭素芳王胜军陈建国戴小莉石燕李雅贞苏兆亮薛渊夏圣邵启祥黄新祥许化溪
- 文献传递
