董栩
- 作品数：21 被引量：17H指数：2
- 供职机构：海南医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省自然科学基金教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 二次分层离心纯化成年大鼠背根节神经元的方法
- 2016年
- 目的:建立一种长时程的有效获得高度纯化成年大鼠背根节(dorsal root ganglions,DRG)神经元的方法。方法:将SD大鼠的DRG剥膜、消化制成单细胞悬液,牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)分层离心去除大部分非神经元细胞后接种于多聚赖氨酸处理的盖玻片上;培养1 d后,胰酶消化再次制成细胞悬液,BSA二次分层离心,再次接种于多聚赖氨酸处理的盖玻片上。BSA二次分层离心后的神经元为实验一(T1组)、单次离心的神经元为实验组二(T2组)、未经离心处理的神经元为对照组(C组)。各组除离心次数外,其余各方法相同。相差显微镜下观察上述各组培养神经元,结合βtubulinⅢ免疫荧光组化染色及MTT分析检测神经元纯化效果及细胞活力。结果:培养3 d后,T1组神经元比例达88.43±6.13%,较T2组、C组显著增高,差别具有统计学意义(P<0.05);MTT的结果显示与T2组、C组比较,T1组神经元的相对活力略微下降,但无统计学差异(P>0.05)。结论:二次纯化法是一种简单有效的成年大鼠DRG神经元纯化方法。
- 赵久红董栩张显芳张海英谭晓红张全鹏黄奕弟马志健易西南
- 关键词：DRG神经元培养BSA纯化
- 抑制PI3K信号通路促进TRAIL诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡
- 2014年
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对癌细胞有独特的细胞毒性作用,而对正常细胞没有影响.但乳腺癌细胞耐受TRAIL诱导凋亡.本研究探索磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)信号通路对人乳腺癌MCF-7细胞耐受TRAIL的影响.采用MTT法、显微照相以及DAPI染色观察TRAIL对MCF-7细胞生长的抑制作用以及诱导细胞凋亡状况;流式细胞分析细胞凋亡的情况;激光共聚焦显微镜观察多聚ADP核糖多聚酶-1(poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1)的迁移和定位;Western印迹分析死亡受体、caspase-3/8、磷酸化的AKT[pAKT(Ser473)]、Src和PARP-1等蛋白质表达.结果显示,小剂量TRAIL(<80 nmol/L)和Ly294002(<40μmol/L)对MCF-7细胞生长没有显著的抑制作用,但是大剂量TRAIL(160 nmol/L)和Ly294002(80μmol/L)则能抑制MCF-7细胞生长;低剂量Ly294002协同TRAIL抑制MCF-7细胞生长,并诱导细胞凋亡;Ly294002和TRAIL共同作用能促进PARP-1从胞浆进入细胞核;蛋白质表达分析显示,MCF-7细胞均表达死亡受体DR4、DR5、诱骗受体DcR1和DcR2、以及caspase-8,但是不表达caspase-3;Ly294002和TRAIL共同作用也能抑制pAKT(Ser473)和Src的表达,并且导致PARP-1断裂.本研究结果提示,抑制PI3K信号可增加MCF-7细胞对TRAIL诱导的敏感性;MCF-7细胞通过PI3K/AKT途径促进Src的表达耐受TRAIL的细胞毒性作用;Ly294002联合TRAIL是一种新的药物组合方式治疗乳腺癌.
- 朱明月李伟夏华鲁琰董栩陈栘郭峻莉符史干谢协驹李孟森
- 关键词：乳腺癌细胞凋亡PI3K信号通路
- 一种获得人类甲胎蛋白的方法
- 本发明公开了一种获得人类甲胎蛋白的方法，是把人类甲胎蛋白基因克隆到昆虫细胞的表达载体pFastBac 1、pFastBac Dual或pFastBac1?Gus中，并转化DH10Bac后，获得含有人类甲胎蛋白基因的Bac...
- 林波刘坤朱明月李伟董栩李孟森
- 文献传递
- α-芋螺毒素GIC与Ac-AChBP共结晶条件的筛选与优化被引量：1
- 2017年
- 旨在筛选及优化α-芋螺毒素与乙酰胆碱结合蛋白(ACh BPs)共结晶的条件,得到高分辨率的共结晶晶体。在昆虫表达系统中分泌表达海兔乙酰胆碱结合蛋白(Ac-ACh BP),并用凝胶色谱进行纯化,把纯化的乙酰胆碱结合蛋白与α-芋螺毒素GIC共结晶,利用结晶机器人及HAMPTON RESEARCH结晶试剂盒进行结晶及结晶条件的筛选与优化。结果显示,在0.6 mol/L Ammonium citrate dibasic,0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate p H4.8的条件下生长的晶体较好,其分辨率可以达到2.1?。筛选与优化结晶条件(Ammonium citrate dibasic的摩尔浓度及0.1 mol/L Sodium acetate trihydrate的p H值)可以得到高分辨率的α-芋螺毒素GIC与Ac-ACh BP共结晶晶体。
- 林波刘坤朱明月李伟董栩李孟森
- 一种高效表达AFP3-CASP3融合蛋白的方法
- 本发明公开了一种高效表达AFP3‑CASP3融合蛋白的方法，属于生物技术领域，本发明把HBx基因克隆到慢病毒中，用慢病毒‑HBx感染人肝癌细胞，肝癌细胞内表达HBx蛋白后，把含有AFP第3个结构域和CASP3基因的表达载...
- 刘坤林波朱明月李伟董栩李孟森
- TSA提高肝癌细胞Be17402细胞对TRAIL的敏感性
- 目的观察TSA是否能提高肝癌细胞Be17402对肿瘤坏死因子凋亡相关配体(TRAIL)的敏感性。方法MTT法检测细胞生长情况;DAPI染色观察细胞核形态;电泳迁移实验(EMSA)检测NF-κB/p65与DNA顺式作川元什...
- 李伟朱丽琴朱明月鲁琰董栩陈栘康永越李孟森
- 关键词：曲古抑菌素AP65
- 文献传递
- 慢病毒-HBx表达载体的构建及其在人正常肝细胞系Chang liver的稳定表达
- 2015年
- 目的:构建乙型肝炎病毒X基因(hepatitis B virus x,HBx)慢病毒表达载体,建立稳定表达HBx蛋白的人正常肝细胞系Chang liverHBx.方法:应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法从质粒中扩增HBx基因,并克隆到慢病毒p EB-3xflag-GP-Puro载体上,经PCR、酶切和测序鉴定正确后经慢病毒包装感染人肝细胞Chang liver,再用嘌呤霉素筛选出稳定表达HBx蛋白的细胞株,最后用免疫荧光和Western blot技术检测HBx蛋白的表达.结果:酶切鉴定和基因测序证实HBx基因成功克隆到慢病毒表达载体上,重组慢病毒经包装纯化后获得滴度为1×108 TU/m L,用包装好的重组慢病毒感染人肝细胞Chang liver,经嘌呤霉素筛选获得单克隆细胞株Chang liver-HBx,利用免疫荧光和Western blot技术检测发现细胞株Chang liver-HBx可稳定表达HBx蛋白.结论:成功构建了HBx的重组慢病毒表达载体,获得了稳定表达HBx的Chang liver细胞系Chang liver-HBx,为进一步研究HBx诱导正常肝细胞恶性转化提供细胞模型.
- 鲁琰朱明月张雪儿李伟董栩陈栘林波郭峻莉李孟森
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白CHANG慢病毒载体
- 曲古抑菌素A增加人肝癌Bel7402细胞对TRAIL敏感度的实验
- 2015年
- 目的探讨曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)联合肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对肝癌细胞Bel7402增殖凋亡的影响及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法分别检测TSA、TRAIL及低浓度TSA联合TRAIL处理Bel7402细胞的生长抑制率;4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色法对药物联合处理后的细胞进行凋亡形态学观察;免疫细胞化学和Western blot技术观察药物联合作用后p65蛋白在细胞中表达和定位的变化。结果不同浓度TSA作用6、12和24 h对人肝癌Bel7402细胞的增殖没有明显抑制作用,而作用48 h后的细胞增殖抑制率明显升高,和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);不同浓度TRAIL处理Bel7402细胞存活率没有明显改变;低浓度TSA(20 ng/ml)预处理能够增加Bel7402细胞对TRAIL治疗的敏感度,TSA预处理联合TRAIL(100ng/ml)作用细胞24 h后,细胞生存率为(57.1±5.4)%,和单独药物处理组及对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);DAPI染色显示TSA和TRAIL联合作用后Bel7402细胞有核凋亡出现。荧光显微镜观察证明单独应用TSA(200 ng/ml)或TRAIL(100 ng/ml)处理的细胞p65蛋白有部分核内移位,而两种药物联合应用导致p65蛋白表达量降低,并且发生明显的核内转移和集聚。结论低浓度TSA能够增加肝癌Bel7402细胞对TRAIL的敏感度;其机制可能是两种药物联合应用降低p65的表达和活性,从而诱导Bel7402细胞凋亡。
- 李伟朱明月董栩夏华陈栘鲁琰郭峻莉谢协驹符史干李孟森
- 关键词：肝细胞癌细胞曲古抑菌素A肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞凋亡
- 全反式维甲酸通过抑制Src蛋白的表达诱导肝癌细胞BEL-7402凋亡
- [目的]探讨全反式维甲酸(ATRA)诱导肝癌细胞凋亡及其影响ATRA作用的关键靶蛋白,为肝癌的治疗提供线索。[方法]不同浓度的ATRA处理人肝癌细胞BEL-7402和人正常肝细胞L-02后48小时,MTT法分析ATRA对...
- 李伟熊燕燕朱明月鲁琰董栩陈栘李孟森
- 关键词：全反式维甲酸BEL-7402细胞SRC
- 文献传递
- 甲胎蛋白激活PI3K/AKT信号促使肝癌Bel 7402细胞抗全反式维甲酸诱导凋亡被引量：4
- 2014年
- 目的 研究甲胎蛋白（AFP）对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,以及其在癌细胞耐受全反式维甲酸（ATRA）中的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测ATRA对人肝癌Bel 7402细胞增殖的影响;显微照相观察细胞形态学的改变;流式细胞分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN的共定位;免疫共沉淀（Co-IP）技术研究AFP与PTEN相互作用;Westemblot法分析磷酸化的蛋白激酶B（pAKT）和Src表达,构建干扰AFP表达的载体（AFP-siRNA）并转染Bel 7402细胞;用PI3K特异性阻断剂Ly294002处理细胞,分析Ly294002的作用效果.通过t检验分析组间的统计学差异. 结果 MTT分析显示,人肝癌Bel 7402耐受ATRA的细胞毒性;共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞质;Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合;MTT分析发现,Bel 7402细胞转染AFP-siRNA载体后24 h后,细胞生长显著受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）,而且AFP-siRNA载体和ATRA共同处理组,细胞生长受到抑制更为显著,与对照组、单独处理组比较,差异均有统计学意义（P＜ 0.01）;干扰AFP表达能显著增加Bel 7402细胞对ATRA敏感性,并能抑制pAKT和Src的表达;Ly294002能抑制AFP促进Bel 7402细胞表达pAKT和Src的作用.结论 肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活PI3K/AKT信息通路对抗ATRA诱导的凋亡.
- 朱明月郭峻莉夏华李伟鲁琰董栩陈栘符史干谢协驹李孟森
- 关键词：甲胎蛋白PI3K/AKT信号通路全反式维甲酸
