蔡伟良
- 作品数：17 被引量：51H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 短期冻存兔骨髓间充质干细胞对其生物特性的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨短期冻存对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖、生物特征及成骨能力的影响。方法选取第5代兔BMSCs冻存,30d后复苏、体外培养至第10代作为实验组,设相同代数未冻存的BMSCs为对照组。MTT、细胞周期、细胞表面标志及成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)水平、Ⅰ型胶原及钙结节染色作为其增殖、生物特征及成骨能力的评价指标。结果冻存后BMSCs生长潜伏期延长,但生长状态无明显影响;增殖指数和G1期细胞所占比例分别为42.9%±3.4%、57.0%±3.4%,细胞表面标志CD44阳性率为93.62%±1.05%,不表达CD45;成骨诱导第7、14天ALP水平(U/gprot)分别为6.73±1.92、15.99±4.36,第14、21天,Ⅰ型胶原、钙结节茜素红染色阳性;以上结果与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论短期冻存对兔BMSCs增殖、生物特征及成骨分化潜能无明显影响,冻存后可继续进一步研究。
- 武成聪李强陈佳滨茹嘉蔡伟良宁寅宽
- 关键词：骨髓间充质干细胞冻存生物特性
- 组织工程骨表面微观形貌和生物矿化的实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的：用绿色荧光蛋白（ GFP）标记结合扫描电镜和X射线能谱分析（ SEM/EDS）技术对组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化进行观测,以评价脱钙骨（ DBM ）支架体外构建组织工程骨的生物性能。方法用重组腺病毒介导GFP基因转染兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）进行示踪标记,细胞与DBM复合经成骨诱导后,通过倒置荧光显微镜对细胞生长情况进行即时观察,结合SEM/EDS技术,观测组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化。结果在倒置荧光显微镜下见细胞在DBM支架上能较好的黏附、重叠生长和增殖,体外培养至14 d 时,细胞内 GFP 有较高水平瞬时表达。SEM见DBM呈疏松多孔结构,孔隙直径为300~600μm,孔隙率达90%。 SEM下观察组织工程骨,见细胞在DBM网孔内表面贴壁生长,分泌基质旺盛,并可见粗糙的生物矿化物覆盖支架。 EDS显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比（ Ca/P）为1．46。结论 DBM体外构建组织工程骨有非常好的生物性能,GFP标记结合SEM/EDS技术可以作为DBM体外构建组织工程骨较好的评价手段。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒脱钙骨基质能谱分析
- BMP-2和EGFP重组腺病毒体外转染兔骨髓间充质干细胞的研究被引量：5
- 2014年
- 目的体外培养兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)并观察其生物学特性,通过腺病毒介导人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)和EGFP基因转染兔BMSCs后,观察BMP-2和EGFP的表达情况。方法通过密度梯度离心联合贴壁法,分离、培养兔BMSCs,流式细胞仪检测细胞周期和表面标记,体外诱导兔BMSCs向成骨细胞方向分化。转染后,免疫细胞化学染色及蛋白质印迹法(Western blot)检测外源基因的表达。结果兔BMSCs周期约有56.84%处于G1期;CD44表达阳性,CD45表达阴性;经成骨细胞诱导后,Ⅰ型胶原免疫组织化学染色阳性,茜素红染色阳性。转染后,Western blot及免疫细胞化学染色显示细胞内BMP-2有较强的表达。结论成功分离、培养兔BMSCs,并鉴定其具有成骨分化能力;构建的Ad-BMP-2/EGFP可高效转染兔BMSCs,并能稳定表达BMP-2目的基因。
- 陈佳滨李强茹嘉武成聪宁寅宽蔡伟良
- 关键词：骨形态发生蛋白质类腺病毒科充质干细胞转染
- Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞前后生物学特性的研究被引量：3
- 2014年
- 目的对Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)前后的生物学特性进行观察。方法采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离获取第10代兔BMSCs,应用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD29的表达,用携带BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞。分别通过倒置荧光显微镜下观察转染前后细胞形态改变,MTT法分析转染前后细胞增殖的情况,体外Ⅰ型胶原免疫组化染色和钙结节茜素红染色以观察转染前后细胞的成骨分化情况,Western Blot检测转染前后细胞内目的蛋白表达。结果密度梯度离心结合贴壁培养法能获取高纯度第10代兔BMSCs,流式细胞仪检测显示CD44、CD29阳性,CD45阴性。Ad-BMP-2/GFP转染兔BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,细胞形态向成骨方向分化,在短时间内能促进兔BMSCs的增殖(P<0.05),Ⅰ型胶原免疫组化染色、茜素红染色均呈阳性,Western Blot显示细胞内稳定表达BMP-2目的蛋白。结论 Ad-BMP-2/GFP能成功转染兔骨髓间充质干细胞并能改变其生物学特性。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2腺病毒载体生物学特性BONEPROTEIN
- 腺病毒介导基因转染自体骨髓间充质干细胞的检测方法
- 本发明公开了一种腺病毒介导基因转染自体骨髓间充质干细胞的检测方法，将hBMP‑2基因以重组缺陷型腺病毒表达载体Ad‑hBMP‑2转染骨髓基质干细胞BMSCs,并将转染后的细胞与同种异体脱钙骨DBM支架材料在体外复合，植入...
- 李强赵美玉李诗鹏茹嘉武成聪陈佳滨宁寅宽蔡伟良石正松
- 文献传递
- Ad-hBMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞体外骨生成的实验研究被引量：6
- 2015年
- 目的观察Ad-h BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外骨生成中钙化斑形成,并对钙化斑元素构成进行研究。方法用携带h BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞,通过RT-PCR检测转染后BMSCs h BMP-2基因的表达,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察转染后细胞形态改变和钙化斑的形成,结合扫描电镜和X线能谱分析(SEM/EDS)技术观测钙化斑表面微观形貌及其元素构成。结果 RT-PCR检测转染后BMSCs表达h BMP-2目的基因,细胞形态向成骨方向分化,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,电镜下见钙化灶点状散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。X射线能谱分析显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比(Ca/P)为1.53。结论 Ad-h BMP-2/GFP能成功转染兔BMSCs,体外诱导BMSCs向成骨方向分化,并具备较好的骨生成能力。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒骨髓间充质干细胞能谱分析
- 腺病毒介导rhBMP-2转染兔BMSCs联合同种异体DBM构建复合材料的生物安全性研究
- 目的：腺病毒重组人骨形态发生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合同种异体脱钙骨基质构建复合材料的生物相容性观察。 方法：复苏保存于液氮罐中的骨髓间充质干细胞(BMSCs)，取相同代数...
- 蔡伟良
- 关键词：脱钙骨基质细胞生物学
- 文献传递
- 转基因技术及骨髓间充质干细胞在骨缺损修复中的应用与展望被引量：4
- 2013年
- 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是一类存在骨髓内的非造血干细胞,具有较强的增殖功能及多向分化潜能。在一些细胞因子的诱导下可以向成骨系细胞、内皮细胞、成纤维系细胞、成软骨系细胞等方向分化,近年来已成为生物学和医学的研究热点。而转基因技术是一项目前较为热门的生物科技技术。本文简要介绍了不同基因如骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、软骨源性形态发生蛋白1(cartilage-derived morphogenetic protein 1,CDMP-1)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)等通过转染后对BMSCs增殖、分化的影响及其在骨缺损修复中的应用。
- 陈佳滨武成聪李强茹嘉宁寅宽蔡伟良
- 关键词：骨缺损增殖分化
- hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞体内移植后hBMP-2的活性检测被引量：6
- 2015年
- 目的探究人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein-2,h BMP-2)基因植入兔股骨头坏死模型体内后的活性,为后续实验奠定理论基础。方法 1.采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2.将造模成功的兔子随机分为A、B、C3组(n=12),A组不植入材料,为对照组,B、C组分别植入DBM/BMSCs、h BMP-2/BMSCs/DBM;3.术后第1、第2、第3周各组分别处死4只兔子,分别运用PCR、RTFQ-PCR、Western Blot检测股骨头内h BMP-2基因和蛋白的表达量,评估h BMP-2基因在兔体内的活性。结果植入后,在第1、第2、第3周,PCR结果示:A、B两组h BMP-2基因呈阴性表达,C组h BMP-2基因呈阳性表达;RTFQ-PCR示:C组相对表达量分别为1,0.947±0.025,0.895±0.059,P=0.081;Western blot示:A、B两组h BMP-2蛋白在兔体内呈阴性表达,C组h BMP-2蛋白呈阳性表达;凝胶成像系统分析显示:C组h BMP-2蛋白表达灰度值(目的/内参)分别为:0.530±0.056、0.507±0.066、0.475±0.086,且两两之间比较P>0.05。结论 h BMP-2基因转染BMSCs植入兔股骨头坏死模型体内后能够稳定表达,进而能够持续诱导BMSCs向骨细胞分化,达到修复股骨头坏死的目的。
- 石正松李强宁寅宽蔡伟良李诗鹏
- 关键词：骨组织工程人骨形态发生蛋白2免疫印迹
- 腺病毒介导BMP-2和EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞及种植脱钙骨的体外观察被引量：9
- 2014年
- 目的用腺病毒载体介导人骨形态发生蛋白-2及EGFP基因转染兔骨髓基质干细胞(rBMSC),种植DBM(脱钙骨)支架体外构建组织工程骨。方法兔髓基质干细胞(rBMSC)的分离、培养;流式细胞仪检测细胞表面标记;转染后,荧光显微镜观察细胞最适感染复数(MOI)及蛋白印迹检测外源基因的表达情况;采用Urist提供的方法制备脱钙骨(DBM),用细胞计量法测定BMSCs与DBM复合培养的黏附率。然后将转染后细胞接种到DBM支架上,用荧光显微镜观察细胞是否成功粘附于支架材料上,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 BMSCs细胞表型鉴定:CD44表达阳性,CD45表达阴性;转染后,蛋白印迹试验检测到BMP-2表达增高;骨髓间充质干细胞与脱钙骨基质的平均粘附率为(72.74±1.99)%;扫描电镜见转染细胞生长良好,伸出丝状突起,相互连接。结论成功培养及鉴定兔BMSCs,Ad-BMP-2/EGFP可高效转染兔BMSCs,转染后的细胞种植于DBM支架材料后生长状况良好,组织工程骨构建成功。
- 陈佳滨李强茹嘉武成聪宁寅宽蔡伟良
- 关键词：骨形态发生蛋白骨髓基质干细胞组织工程骨脱钙骨
