石正松
- 作品数：10 被引量：35H指数：4
- 供职机构：桂林医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西壮族自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞前后生物学特性的研究被引量：3
- 2014年
- 目的对Ad-BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)前后的生物学特性进行观察。方法采用密度梯度离心结合贴壁培养法分离获取第10代兔BMSCs,应用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD44、CD45、CD29的表达,用携带BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞。分别通过倒置荧光显微镜下观察转染前后细胞形态改变,MTT法分析转染前后细胞增殖的情况,体外Ⅰ型胶原免疫组化染色和钙结节茜素红染色以观察转染前后细胞的成骨分化情况,Western Blot检测转染前后细胞内目的蛋白表达。结果密度梯度离心结合贴壁培养法能获取高纯度第10代兔BMSCs,流式细胞仪检测显示CD44、CD29阳性,CD45阴性。Ad-BMP-2/GFP转染兔BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,细胞形态向成骨方向分化,在短时间内能促进兔BMSCs的增殖(P<0.05),Ⅰ型胶原免疫组化染色、茜素红染色均呈阳性,Western Blot显示细胞内稳定表达BMP-2目的蛋白。结论 Ad-BMP-2/GFP能成功转染兔骨髓间充质干细胞并能改变其生物学特性。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白2腺病毒载体生物学特性BONEPROTEIN
- Ad-hBMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞体外骨生成的实验研究被引量：6
- 2015年
- 目的观察Ad-h BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外骨生成中钙化斑形成,并对钙化斑元素构成进行研究。方法用携带h BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞,通过RT-PCR检测转染后BMSCs h BMP-2基因的表达,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察转染后细胞形态改变和钙化斑的形成,结合扫描电镜和X线能谱分析(SEM/EDS)技术观测钙化斑表面微观形貌及其元素构成。结果 RT-PCR检测转染后BMSCs表达h BMP-2目的基因,细胞形态向成骨方向分化,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,电镜下见钙化灶点状散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。X射线能谱分析显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比(Ca/P)为1.53。结论 Ad-h BMP-2/GFP能成功转染兔BMSCs,体外诱导BMSCs向成骨方向分化,并具备较好的骨生成能力。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒骨髓间充质干细胞能谱分析
- 腺病毒rhBMP-2转染兔BMSCs复合同种异体脱钙骨基质的生物相容性研究
- 2015年
- 目的探讨腺病毒重组人骨形态发生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合同种异体脱钙骨基质(DBM)的生物相容性。方法参照Urist方法制得兔同种异体DBM材料,免疫组化观察转染后BMSCs内BMP-2表达情况;转染48h后复合同种异体DBM上,扫描电镜观察细胞生长、贴附情况,MTT法检测细胞增殖情况。结果腺病毒转染48h后,BMSCs能够表达BMP-2,扫描电镜可见转染后的细胞在DBM上贴附良好并且大量增殖。MTT检测结果显示,种植于DBM上的转染后细胞增殖情况正常,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ad-BMP-2转染BMSCs与同种异体DBM的生物相容性良好。
- 蔡伟良李强宁寅宽武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：骨形态发生蛋白质类腺病毒科间质干细胞脱钙骨基质
- 组织工程骨表面微观形貌和生物矿化的实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的：用绿色荧光蛋白（ GFP）标记结合扫描电镜和X射线能谱分析（ SEM/EDS）技术对组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化进行观测,以评价脱钙骨（ DBM ）支架体外构建组织工程骨的生物性能。方法用重组腺病毒介导GFP基因转染兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）进行示踪标记,细胞与DBM复合经成骨诱导后,通过倒置荧光显微镜对细胞生长情况进行即时观察,结合SEM/EDS技术,观测组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化。结果在倒置荧光显微镜下见细胞在DBM支架上能较好的黏附、重叠生长和增殖,体外培养至14 d 时,细胞内 GFP 有较高水平瞬时表达。SEM见DBM呈疏松多孔结构,孔隙直径为300~600μm,孔隙率达90%。 SEM下观察组织工程骨,见细胞在DBM网孔内表面贴壁生长,分泌基质旺盛,并可见粗糙的生物矿化物覆盖支架。 EDS显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比（ Ca/P）为1．46。结论 DBM体外构建组织工程骨有非常好的生物性能,GFP标记结合SEM/EDS技术可以作为DBM体外构建组织工程骨较好的评价手段。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒脱钙骨基质能谱分析
- 绿色荧光蛋白标记兔BMSCs体外成骨的定量能谱分析被引量：3
- 2015年
- 目的观察绿色荧光蛋白(GFP)标记的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨诱导后形态学改变和体外骨生成中矿化钙结节的形成,并结合扫描电镜和X射线能谱分析技术(SEM/EDS)对矿化钙结节元素进行定量能谱分析。方法用携带GFP基因的腺病毒转染兔BMSCs进行示踪标记,并诱导细胞向成骨方向分化,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察成骨诱导后细胞形态改变和矿化钙结节的形成,结合SEM/EDS技术观测矿化钙结节的表面微观结构及其元素构成。结果腺病毒介导GFP基因(Ad-GFP)转染兔BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,经成骨诱导后细胞形态向成骨方向分化,并形成不透光的矿化钙结节,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,SEM下见矿化钙结节散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。EDS分析显示矿化钙结节主要组成元素与正常骨组织相同,其钙磷比(Ca/P)为1.55,接近正常骨组织钙磷比1.49。结论 AdGFP能成功转染并标记兔BMSCs,成骨诱导后BMSCs向成骨方向分化,具备较好的骨生成能力,BMSCs体外矿质化成骨过程与体内基本相同。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒绿色荧光蛋白能谱分析
- 腺病毒介导hBMP-2转染BMSCs复合DBM修复兔缺血性股骨头坏死的实验研究被引量：3
- 2015年
- 目的评价人骨形态发生蛋白(h BMP)-2/骨髓间充质干细胞(BMSCs)/脱钙松质骨(DBM)对兔股骨头坏死的修复作用,探索临床治疗股骨头坏死的新途径。方法髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型。将造模成功兔随机分为A、B、C、D 4组(n=12),A组不植入材料,为对照组,B、C、D分别植入DBM、DBM/BMSCs、h BMP-2/BMSCs/DBM。术后4、8及12周各组分别处死4只,运用X线技术、大体标本观察、HE染色技术评判股骨头坏死修复情况。结果 X线示A组股骨头塌陷,无明显成骨;B、C、D组股骨头缺损区有骨再生现象,但D组再生情况明显优于B、C组。Lane-Sandhu X线评分A组B、C组>D组(P<0.05),B和C组差异无统计学意义。结论 h BMP-2/BMSCs/DBM植入体内后能够诱导BMSCs向成骨方向分化,对兔股骨头坏死具有较好的修复效果。
- 石正松李强蔡伟良宁寅宽李诗鹏
- 关键词：股骨头坏死骨形态发生蛋白-2
- hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞体内移植后hBMP-2的活性检测被引量：6
- 2015年
- 目的探究人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein-2,h BMP-2)基因植入兔股骨头坏死模型体内后的活性,为后续实验奠定理论基础。方法 1.采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2.将造模成功的兔子随机分为A、B、C3组(n=12),A组不植入材料,为对照组,B、C组分别植入DBM/BMSCs、h BMP-2/BMSCs/DBM;3.术后第1、第2、第3周各组分别处死4只兔子,分别运用PCR、RTFQ-PCR、Western Blot检测股骨头内h BMP-2基因和蛋白的表达量,评估h BMP-2基因在兔体内的活性。结果植入后,在第1、第2、第3周,PCR结果示:A、B两组h BMP-2基因呈阴性表达,C组h BMP-2基因呈阳性表达;RTFQ-PCR示:C组相对表达量分别为1,0.947±0.025,0.895±0.059,P=0.081;Western blot示:A、B两组h BMP-2蛋白在兔体内呈阴性表达,C组h BMP-2蛋白呈阳性表达;凝胶成像系统分析显示:C组h BMP-2蛋白表达灰度值(目的/内参)分别为:0.530±0.056、0.507±0.066、0.475±0.086,且两两之间比较P>0.05。结论 h BMP-2基因转染BMSCs植入兔股骨头坏死模型体内后能够稳定表达,进而能够持续诱导BMSCs向骨细胞分化,达到修复股骨头坏死的目的。
- 石正松李强宁寅宽蔡伟良李诗鹏
- 关键词：骨组织工程人骨形态发生蛋白2免疫印迹
- 基因重组腺病毒载体与慢病毒载体转染兔骨髓间充质干细胞的对比被引量：13
- 2017年
- 背景:腺病毒载体和慢病毒载体均是较好的组织工程基因载体,两者在介导骨形态发生蛋白2转染兔骨髓间充质干细胞中的差异尚待探究。目的:比较腺病毒和慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2转染体外培养兔骨髓间充质干细胞的转导效率、持续时间及外源基因表达差异。方法:将第5代兔骨髓间充质干细胞分3组培养,A组以腺病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Ad-EGFP/BMP-2)转染细胞,B组以慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2(Lenti-EGFP/BMP-2)转染细胞,C组为未进行转染。转染24 h、48 h、72 h、1周、3周,检测EGFP基因表达;转染72 h后,免疫组织化学观察细胞骨形态发生蛋白2的表达;转染后72 h、1周、3周,Western blot检测骨形态发生蛋白2蛋白表达。结果与结论:(1)转染24 h后,A、B组可见EGFP表达,A组明显强于B组;转染48 h后,A、B组荧光进一步增强;转染72 h后,A组荧光强度近高峰,B组荧光持续增强。转染1周后,A组荧光强度开始下降,B组荧光强度仍然增强。转染3周后,A组荧光强度明显下降甚至消失,B组荧光强度有所下降,但仍然保持一定的表达。C组在各时间点均无EGFP表达;(2)A、B组胞浆均呈骨形态发生蛋白2阳性表达,C组呈阴性表达;(3)转染72 h后,A组骨形态发生蛋白2蛋白表达量强于B组;转染1周后,A组表达下降,B组表达增强并强于A组;转染3周后,A组表达微弱,B组持续表达且明显强于A组;(4)结果表明,相对腺病毒载体,慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2基因转染兔骨髓间充质干细胞在表达持续时间上具有一定的优势。
- 李诗鹏李强石正松蔡伟良宁寅宽陶旋
- 关键词：干细胞腺病毒科慢病毒属骨髓干细胞腺病毒载体骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白类
- 慢病毒介导人骨形态发生蛋白2/骨髓间充质干细胞/脱钙骨基质修复股骨大段缺损被引量：4
- 2018年
- 背景:课题组前期研究已证实,慢病毒载体介导EGFP/骨形态发生蛋白2基因转染兔骨髓间充质干细胞在表达持续时间上具有一定的优势。但慢病毒介导人骨形态发生蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质能否在体内促进骨缺损修复的问题有待探究。目的:观察兔股骨大段缺损中植入慢病毒介导人骨形态发生蛋白2转染骨髓间充质干细胞复合脱钙骨基质后的修复效果,探寻治疗股骨大段缺损的新途径。方法:选取48只新西兰大白兔,股骨中段截骨钢板内固定法制备兔左侧股骨大段缺损模型。造模成功后,随机分成A,B,C,D组,每组12只。A组无修复材料植入,B,C,D组分别植入脱钙骨基质、脱钙骨基质/骨髓间充质干细胞、慢病毒载体介导人骨形态发生蛋白2/骨髓间充质干细胞/脱钙骨基质。造模后2,4,8及12周分别处死每组3只兔子,通过苏木精-伊红染色、生物力学分析,X射线检查评价股骨大段缺损修复的情况。结果与结论:(1)X射线示A,B,C,D组均有不同的骨痂修复形成,且Lane-Sandhu X射线评分A
- 陶旋李强李诗鹏石正松周桢杰
- 关键词：慢病毒属骨形态发生蛋白类
- Ad-BMP-2/BMSCs/DBM对兔股骨头坏死修复的实验研究被引量：5
- 2016年
- 目的应用聚合酶链式反应(RT-PCR)、电镜扫描(SEM)和X射线能谱分析技术(EDS)评价腺病毒-骨形态发生蛋白-2/骨髓间充质干细胞/脱钙松质骨(Ad-BMP-2/BMSCs/DBM)对兔股骨头坏死的治疗效果,为临床治疗股骨头坏死探索新途径。方法 1采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2将造模成功的兔子随机均等分为A、B、C、D组(n=12),A组不植入材料,为造模组,B、C、D分别植入DBM、DBM/BMSCs、BMP-2/BMSCs/DBM;3术后4、8、12周各组分别处死4只兔子,运用RT-PCR、SEM、EDS检测股骨头BMP-2表达量、表面形貌和钙磷比(Ca/P),观察股骨头的修复情况。结果 RT-PCR结果显示各时间点BMP-2表达量A组
- 石正松李强宁寅宽蔡伟良李诗鹏
- 关键词：股骨头坏死骨形态发生蛋白2RT-PCR电镜扫描能谱分析
