宁寅宽
- 作品数：17 被引量：51H指数：5
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- Ad-hBMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞体外骨生成的实验研究被引量：6
- 2015年
- 目的观察Ad-h BMP-2/GFP转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外骨生成中钙化斑形成,并对钙化斑元素构成进行研究。方法用携带h BMP2和GFP基因的腺病毒转染细胞,通过RT-PCR检测转染后BMSCs h BMP-2基因的表达,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察转染后细胞形态改变和钙化斑的形成,结合扫描电镜和X线能谱分析(SEM/EDS)技术观测钙化斑表面微观形貌及其元素构成。结果 RT-PCR检测转染后BMSCs表达h BMP-2目的基因,细胞形态向成骨方向分化,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,电镜下见钙化灶点状散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。X射线能谱分析显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比(Ca/P)为1.53。结论 Ad-h BMP-2/GFP能成功转染兔BMSCs,体外诱导BMSCs向成骨方向分化,并具备较好的骨生成能力。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒骨髓间充质干细胞能谱分析
- 短期冻存兔骨髓间充质干细胞对其生物特性的影响被引量：6
- 2014年
- 目的探讨短期冻存对兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)的增殖、生物特征及成骨能力的影响。方法选取第5代兔BMSCs冻存,30d后复苏、体外培养至第10代作为实验组,设相同代数未冻存的BMSCs为对照组。MTT、细胞周期、细胞表面标志及成骨诱导分化后碱性磷酸酶(ALP)水平、Ⅰ型胶原及钙结节染色作为其增殖、生物特征及成骨能力的评价指标。结果冻存后BMSCs生长潜伏期延长,但生长状态无明显影响;增殖指数和G1期细胞所占比例分别为42.9%±3.4%、57.0%±3.4%,细胞表面标志CD44阳性率为93.62%±1.05%,不表达CD45;成骨诱导第7、14天ALP水平(U/gprot)分别为6.73±1.92、15.99±4.36,第14、21天,Ⅰ型胶原、钙结节茜素红染色阳性;以上结果与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论短期冻存对兔BMSCs增殖、生物特征及成骨分化潜能无明显影响,冻存后可继续进一步研究。
- 武成聪李强陈佳滨茹嘉蔡伟良宁寅宽
- 关键词：骨髓间充质干细胞冻存生物特性
- 腺病毒rhBMP-2转染兔BMSCs复合同种异体脱钙骨基质的生物相容性研究
- 2015年
- 目的探讨腺病毒重组人骨形态发生蛋白-2(Ad-rhBMP-2)转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)复合同种异体脱钙骨基质(DBM)的生物相容性。方法参照Urist方法制得兔同种异体DBM材料,免疫组化观察转染后BMSCs内BMP-2表达情况;转染48h后复合同种异体DBM上,扫描电镜观察细胞生长、贴附情况,MTT法检测细胞增殖情况。结果腺病毒转染48h后,BMSCs能够表达BMP-2,扫描电镜可见转染后的细胞在DBM上贴附良好并且大量增殖。MTT检测结果显示,种植于DBM上的转染后细胞增殖情况正常,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ad-BMP-2转染BMSCs与同种异体DBM的生物相容性良好。
- 蔡伟良李强宁寅宽武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：骨形态发生蛋白质类腺病毒科间质干细胞脱钙骨基质
- 腺病毒介导基因转染自体骨髓间充质干细胞的检测方法
- 本发明公开了一种腺病毒介导基因转染自体骨髓间充质干细胞的检测方法，将hBMP‑2基因以重组缺陷型腺病毒表达载体Ad‑hBMP‑2转染骨髓基质干细胞BMSCs,并将转染后的细胞与同种异体脱钙骨DBM支架材料在体外复合，植入...
- 李强赵美玉李诗鹏茹嘉武成聪陈佳滨宁寅宽蔡伟良石正松
- 文献传递
- 转基因技术及骨髓间充质干细胞在骨缺损修复中的应用与展望被引量：4
- 2013年
- 骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)是一类存在骨髓内的非造血干细胞,具有较强的增殖功能及多向分化潜能。在一些细胞因子的诱导下可以向成骨系细胞、内皮细胞、成纤维系细胞、成软骨系细胞等方向分化,近年来已成为生物学和医学的研究热点。而转基因技术是一项目前较为热门的生物科技技术。本文简要介绍了不同基因如骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、软骨源性形态发生蛋白1(cartilage-derived morphogenetic protein 1,CDMP-1)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、成骨生长肽(osteogenic growth peptide,OGP)等通过转染后对BMSCs增殖、分化的影响及其在骨缺损修复中的应用。
- 陈佳滨武成聪李强茹嘉宁寅宽蔡伟良
- 关键词：骨缺损增殖分化
- 组织工程骨表面微观形貌和生物矿化的实验研究被引量：2
- 2015年
- 目的：用绿色荧光蛋白（ GFP）标记结合扫描电镜和X射线能谱分析（ SEM/EDS）技术对组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化进行观测,以评价脱钙骨（ DBM ）支架体外构建组织工程骨的生物性能。方法用重组腺病毒介导GFP基因转染兔骨髓间充质干细胞（ BMSCs）进行示踪标记,细胞与DBM复合经成骨诱导后,通过倒置荧光显微镜对细胞生长情况进行即时观察,结合SEM/EDS技术,观测组织工程骨的表面微观形貌和生物矿化。结果在倒置荧光显微镜下见细胞在DBM支架上能较好的黏附、重叠生长和增殖,体外培养至14 d 时,细胞内 GFP 有较高水平瞬时表达。SEM见DBM呈疏松多孔结构,孔隙直径为300~600μm,孔隙率达90%。 SEM下观察组织工程骨,见细胞在DBM网孔内表面贴壁生长,分泌基质旺盛,并可见粗糙的生物矿化物覆盖支架。 EDS显示其表面为钙、磷沉积物,其钙磷比（ Ca/P）为1．46。结论 DBM体外构建组织工程骨有非常好的生物性能,GFP标记结合SEM/EDS技术可以作为DBM体外构建组织工程骨较好的评价手段。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒脱钙骨基质能谱分析
- 绿色荧光蛋白标记兔BMSCs体外成骨的定量能谱分析被引量：3
- 2015年
- 目的观察绿色荧光蛋白(GFP)标记的兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨诱导后形态学改变和体外骨生成中矿化钙结节的形成,并结合扫描电镜和X射线能谱分析技术(SEM/EDS)对矿化钙结节元素进行定量能谱分析。方法用携带GFP基因的腺病毒转染兔BMSCs进行示踪标记,并诱导细胞向成骨方向分化,通过倒置荧光显微镜、钙结节茜素红染色观察成骨诱导后细胞形态改变和矿化钙结节的形成,结合SEM/EDS技术观测矿化钙结节的表面微观结构及其元素构成。结果腺病毒介导GFP基因(Ad-GFP)转染兔BMSCs后在荧光显微镜下观察到绿色荧光,经成骨诱导后细胞形态向成骨方向分化,并形成不透光的矿化钙结节,钙结节茜素红染色见红色矿化结节,SEM下见矿化钙结节散布于细胞中,细胞重叠生长,分泌基质旺盛。EDS分析显示矿化钙结节主要组成元素与正常骨组织相同,其钙磷比(Ca/P)为1.55,接近正常骨组织钙磷比1.49。结论 AdGFP能成功转染并标记兔BMSCs,成骨诱导后BMSCs向成骨方向分化,具备较好的骨生成能力,BMSCs体外矿质化成骨过程与体内基本相同。
- 宁寅宽李强蔡伟良武成聪陈佳滨石正松
- 关键词：重组腺病毒绿色荧光蛋白能谱分析
- 腺病毒介导hBMP-2转染BMSCs复合DBM修复兔缺血性股骨头坏死的实验研究被引量：3
- 2015年
- 目的评价人骨形态发生蛋白(h BMP)-2/骨髓间充质干细胞(BMSCs)/脱钙松质骨(DBM)对兔股骨头坏死的修复作用,探索临床治疗股骨头坏死的新途径。方法髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型。将造模成功兔随机分为A、B、C、D 4组(n=12),A组不植入材料,为对照组,B、C、D分别植入DBM、DBM/BMSCs、h BMP-2/BMSCs/DBM。术后4、8及12周各组分别处死4只,运用X线技术、大体标本观察、HE染色技术评判股骨头坏死修复情况。结果 X线示A组股骨头塌陷,无明显成骨;B、C、D组股骨头缺损区有骨再生现象,但D组再生情况明显优于B、C组。Lane-Sandhu X线评分A组B、C组>D组(P<0.05),B和C组差异无统计学意义。结论 h BMP-2/BMSCs/DBM植入体内后能够诱导BMSCs向成骨方向分化,对兔股骨头坏死具有较好的修复效果。
- 石正松李强蔡伟良宁寅宽李诗鹏
- 关键词：股骨头坏死骨形态发生蛋白-2
- 骨形态发生蛋白诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的研究进展被引量：2
- 2014年
- 目前从骨髓中成功分离、鉴定BMSCs的方法较为成熟。新发现一些物质能诱导BMSCs向成骨细胞分化因子,其中对BMP研究较多。其机制可能是通过结合Ⅰ、Ⅱ型BMP受体后激活Smad信号通路诱导成骨。其诱导方法主要包括直接应用天然BMP或者将BMP及其协同基因转入BMSCs,通过靶细胞的持续表达BMP促进新骨形成。本文将近10年BMP诱导BMSCs向成骨分化的研究现状及发展趋势做一综述。
- 武成聪陈佳滨蔡伟良宁寅宽李强
- 关键词：骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白骨化骨生成
- hBMP-2基因转染兔骨髓间充质干细胞体内移植后hBMP-2的活性检测被引量：6
- 2015年
- 目的探究人骨形态发生蛋白-2(human bone morphogenetic protein-2,h BMP-2)基因植入兔股骨头坏死模型体内后的活性,为后续实验奠定理论基础。方法 1.采用髓芯减压联合液氮冰冻法制备兔股骨头坏死模型;2.将造模成功的兔子随机分为A、B、C3组(n=12),A组不植入材料,为对照组,B、C组分别植入DBM/BMSCs、h BMP-2/BMSCs/DBM;3.术后第1、第2、第3周各组分别处死4只兔子,分别运用PCR、RTFQ-PCR、Western Blot检测股骨头内h BMP-2基因和蛋白的表达量,评估h BMP-2基因在兔体内的活性。结果植入后,在第1、第2、第3周,PCR结果示:A、B两组h BMP-2基因呈阴性表达,C组h BMP-2基因呈阳性表达;RTFQ-PCR示:C组相对表达量分别为1,0.947±0.025,0.895±0.059,P=0.081;Western blot示:A、B两组h BMP-2蛋白在兔体内呈阴性表达,C组h BMP-2蛋白呈阳性表达;凝胶成像系统分析显示:C组h BMP-2蛋白表达灰度值(目的/内参)分别为:0.530±0.056、0.507±0.066、0.475±0.086,且两两之间比较P>0.05。结论 h BMP-2基因转染BMSCs植入兔股骨头坏死模型体内后能够稳定表达,进而能够持续诱导BMSCs向骨细胞分化,达到修复股骨头坏死的目的。
- 石正松李强宁寅宽蔡伟良李诗鹏
- 关键词：骨组织工程人骨形态发生蛋白2免疫印迹
