郑子瑞
- 作品数：13 被引量：43H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 前半胱天冬酶-1及活性位点突变真核表达载体的构建、表达及生物活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建和表达前半胱天冬酶(procaspase)-1及其活性位点C285A突变真核表达载体,并检测其生物学活性。方法从人胚肾细胞系HEK293中提取总RNA,逆转录后,PCR获得前半胱天冬酶-1全长DNA,并通过重组PCR获得其酶活性位点突变片段,酶切连接到载体pcDNA3-Flag中,经鉴定将阳性克隆测序;脂质体转染两种载体到HEK293中表达,用免疫印迹检测目的蛋白的表达,并用酶联免疫吸附方法检测在病原菌毒力蛋白刺激下,前半胱天冬酶-1及C285A对IL-1β分泌的影响。结果构建的2种真核表达载体能够在HEK293中很好表达,当前半胱天冬酶-1过表达时,病原菌毒力蛋白可以刺激IL-1β的分泌,而C285A酶活性位点突变之后,IL-1β的分泌明显降低。结论构建重组的pcDNA3-Flag-procaspase-1具有生物学活性,而C285A突变导致前半胱天冬酶1丧失切割底物的功能,且使IL-1β的分泌明显降低。
- 汪莹王文军魏从文郑子瑞张艳红张部昌钟辉
- 关键词：炎症反应IL-1Β
- 小鼠GP73敲低质粒的构建
- 2016年
- 目的:用p SUPER-NEO空载体构建可以敲低小鼠高尔基蛋白73(m GP73)表达的重组质粒p SUPER-m GP73-si RNA,并鉴定其功能。方法:合成靶向m GP73基因区的3条小干扰RNA(si RNA)m GP73-si RNA1、m GP73-si RNA2和m GP73-si RNA3,通过细胞实验挑选干扰效率大于60%的si RNA,用于合成能够敲低m GP73的重组质粒;重组载体经双酶切和测序鉴定正确后转染4T1细胞,检测转染质粒后细胞内m GP73的m RNA水平;将重组质粒p SUPER-m GP73-si RNA经尾部静脉注射小鼠体内,测定小鼠胃组织中m GP73的m RNA水平。结果:构建了p SUPER-m GP73-si RNA重组质粒;在转染该载体后,小鼠乳腺癌4T1细胞m GP73的m RNA表达下调43%;小鼠体内注射该载体后,胃组织中m GP73的m RNA表达受抑制率为33%。结论:构建了针对m GP73敲低的p SUPER-m GP73-si RNA质粒,可以较明显地下调鼠细胞系和小鼠胃组织m GP73的表达。
- 王翠罗莉刘丽萍刘元明郝钦芳郑子瑞何湘杨晓莉
- 关键词：小干扰RNA重组质粒肿瘤
- 多糖抗病毒活性的研究进展被引量：21
- 2008年
- 病毒感染性疾病严重危害人类健康,在寻找有效抗病毒药物的过程中,人们发现多糖具有良好的抗病毒活性。多糖作为有效、低毒的抗病毒成分具有广阔的药用前景,值得进一步研究。从多糖的抑制病毒吸附、干扰病毒复制和提高机体免疫力方面简要介绍了多糖抗病毒活性的可能机制。
- 郑子瑞戴玲钟辉
- 关键词：多糖抗病毒活性多糖类药物
- 人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选被引量：2
- 2010年
- 目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1。用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰TBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台。
- 孙静魏从文管楷程孝中徐扬袁媛尹晴晴宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：小干扰RNA转录活性
- 人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。
- 贾永侠赵帆马红芳李力黄蓓郑子瑞宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVS转录活性
- 线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达
- 2008年
- 目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。
- 倪才飞赵帆郑子瑞黄蓓马红芳李力宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVSIFN-Β荧光素酶报告基因
- MAVS诱导细胞凋亡的机制研究
- MAVS (Mitochondrial Anti-Viral Signaling protein)是RIG-1受体介导的先天性免疫应答信号传导途径中唯一的接头分子,可以通过诱导Ⅰ型干扰素的和炎症因子的产生参与先天性免疫应...
- 管楷何湘熊向华魏从文郑子瑞宋婷曹叶钟辉
- 关键词：MAVS细胞凋亡
- ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途
- 本发明提供一种ERRα及其抑制剂在促进干扰素生成以及抑制病毒感染中的用途，本发明证实了ERRα可以作为新的病毒药物研究用靶点，有着很好的应用前景。
- 钟辉何湘魏从文马胜利张艳红郑子瑞管楷
- 文献传递
- 人TANK结合激酶1的基因克隆、表达及生物活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:克隆人TANK结合激酶1(TBK1)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:应用RT-PCR方法,以HeLa细胞RNA为模板,扩增获得TBK1基因,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中,以LipofectAMINE2000转染试剂转染pcDNA-Flag-TBK1至293细胞中进行瞬时表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,从人HeLa细胞总RNA中克隆到正确的TBK1基因全长编码序列,利用Western印迹检测其在293细胞中获得有效表达,利用萤光素酶报告基因实验检测TBK1可以诱导IFN-β转录激活。结论:真核表达的人TBK1具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达
- TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的构建、表达及生物活性鉴定
- 2011年
- 目的:构建TANK结合激酶1(TBK1)相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,检测该基因相关突变体在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:根据文献报道的突变序列及QuickChange Site-Directed Mutagenesis实验设计手册,设计合成2条针对TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的引物,以实验室之前构建的TBK1野生型真核表达载体为模板,构建TBK1激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,分别命名为pcDNA3-Flag-TBK1(KD)、pcDNA3-Flag-TBK1(ΔULD)。以LipofactAMINE2000转染试剂转染至293细胞中进行瞬时表达,利用萤光素酶实验检测2种TBK1突变体诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体真核表达载体构建成功,Western印迹检测表明其在293细胞中获得有效表达;用萤光素酶报告基因实验检测,与野生型TBK1相比,其相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体诱导IFN-β转录激活的作用明显降低。结论:真核表达的TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达转录活性
