宋婷
- 作品数：14 被引量：10H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MAVS通过TRAF3调控ASC介导的炎症信号通路的研究
- 先天性免疫系统是机体识别和清除入侵病原体的第一道防线,具有作用广泛、启动迅速的特点,在保护机体、抵抗感染的过程中具有极其重要的作用。先天性免疫应答的激活主要通过宿主的模式识别受体(PRRs)识别病原微生物的病原相关分子模...
- 宋婷
- 关键词：先天性免疫系统炎症信号通路
- 文献传递
- 人TANK结合激酶1的基因克隆、表达及生物活性鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的:克隆人TANK结合激酶1(TBK1)基因,构建其真核表达载体,检测该基因在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:应用RT-PCR方法,以HeLa细胞RNA为模板,扩增获得TBK1基因,定向克隆到pcDNA3-Flag载体中,以LipofectAMINE2000转染试剂转染pcDNA-Flag-TBK1至293细胞中进行瞬时表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,从人HeLa细胞总RNA中克隆到正确的TBK1基因全长编码序列,利用Western印迹检测其在293细胞中获得有效表达,利用萤光素酶报告基因实验检测TBK1可以诱导IFN-β转录激活。结论:真核表达的人TBK1具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达
- TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的构建、表达及生物活性鉴定
- 2011年
- 目的:构建TANK结合激酶1(TBK1)相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,检测该基因相关突变体在293细胞中的表达,并利用萤光素酶报告基因实验检测其生物活性。方法:根据文献报道的突变序列及QuickChange Site-Directed Mutagenesis实验设计手册,设计合成2条针对TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体的引物,以实验室之前构建的TBK1野生型真核表达载体为模板,构建TBK1激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体真核表达载体,分别命名为pcDNA3-Flag-TBK1(KD)、pcDNA3-Flag-TBK1(ΔULD)。以LipofactAMINE2000转染试剂转染至293细胞中进行瞬时表达,利用萤光素酶实验检测2种TBK1突变体诱导β干扰素(IFN-β)转录的情况。结果:测序结果表明,TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体真核表达载体构建成功,Western印迹检测表明其在293细胞中获得有效表达;用萤光素酶报告基因实验检测,与野生型TBK1相比,其相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域缺失突变体诱导IFN-β转录激活的作用明显降低。结论:真核表达的TBK1相关激酶活性缺失突变体和泛素样结构域突变体具有相应的生物学活性,为研究其功能奠定了基础。
- 魏从文管楷岳翔袁媛宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：真核表达转录活性
- 凋亡相关斑点样蛋白ASC真核表达质粒的构建及表达被引量：3
- 2010年
- 目的构建凋亡相关的斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)真核表达质粒。方法从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得ASC的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-ASC。脂质体转染pcDNA3/flag-ASC质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用免疫沉淀和免疫印迹方法检测ASC蛋白与前半胱天冬酶(pro-caspase)-1的相互作用,并用ELISA方法检测ASC蛋白对IL-1β分泌的影响。结果 Western印迹实验证明pcDNA3/flag-ASC可以在HEK293T细胞中表达ASC,并且可以与pro-caspase-1结合,使IL-1β分泌明显降低。结论构建了重组质粒pcDNA3/flag-ASC,在细胞中表达ASC后具有与pro-caspase-1结合的能力,并具有降低IL-1β分泌的生物活性。
- 袁媛宋婷黄蓓钟辉
- 关键词：凋亡调节蛋白质类真核细胞白细胞介素1Β质粒
- 人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选被引量：2
- 2010年
- 目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1。用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰TBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台。
- 孙静魏从文管楷程孝中徐扬袁媛尹晴晴宋婷郑子瑞张艳红钟辉
- 关键词：小干扰RNA转录活性
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7 Ⅲ型分泌系统效应蛋白NleF基因敲除菌株的构建及其生物学功能初探
- 2015年
- 目的构建肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)O157∶H7 T3SS效应蛋白Nle F敲除菌株和回复菌株,研究其对细菌生长和细胞死亡的影响。方法利用λ-Red同源重组的方法构建nle F基因敲除菌株Δnle F;将p ET-24a(+)-Nle F重组质粒导入敲除菌感受态细胞中构建回复菌株Δnle F/Nle F。将野生株、敲除株和回复株分别用LB和DMEM(10%FBS)培养,每隔1 h测定D600,绘制生长曲线;分别用3种菌株感染He La细胞,用细胞毒性试剂盒检测上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,计算细胞毒性。结果成功构建Nle F敲除菌株Δnle F和回复菌株Δnle F/Nle F;野生株、敲除株和回复株三者的生长速率无明显差异;与野生株相比,Δnle F感染He La细胞后,细胞毒性增加,Δnle F/Nle F感染后He La细胞毒性与野生株相当。结论 EHEC O157∶H7 T3SS效应蛋白Nle F对细菌的生长无明显影响,但可能抑制由细菌感染引起的宿主细胞死亡。
- 徐婷婷宋婷周围戴红梅岳俊杰梁龙
- 关键词：肠出血性大肠杆菌基因敲除
- 人MAVS小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰MAVS细胞株的筛选被引量：1
- 2008年
- 目的:构建人线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰MAVS的细胞株。方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对MAVS的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo^+gfp上,经测序分析正确后,质粒命名为psiMAVS。用脂质体转染质粒到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达MAVS小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中MAVS的表达情况,将干扰效果好的细胞株命名为MCF-7/siMAVS,再用荧光素酶试验检测MCF-7/siMAVS细胞对外源MAVS或poly(dA-dT)诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况。结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF- 7/siMAVS能够有效干扰MAVS的表达,并在外源MAVS或poly(dA-dT)存在的情况下,抑制IFN-β的转录活性。结论:构建了表达MAVS小干扰RNA的质粒psiMAVS。筛选出稳定干扰MAVS表达的细胞株MCF-7/siMAVS,为深入研究MAVS在先天免疫中的作用提供了平台。
- 贾永侠赵帆马红芳李力黄蓓郑子瑞宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVS转录活性
- 线粒体抗病毒信号蛋白MAVS真核表达质粒的构建及表达
- 2008年
- 目的:构建线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)真核表达质粒。方法:从人胚肾细胞系HEK293T细胞的总RNA中经过逆转录和PCR获得MAVS的全长cDNA双链片段,经过酶切后连接到真核表达载体pcDNA3/flag中,挑选出转化生成的阳性克隆进行测序,将序列正确的重组质粒命名为pcDNA3/flag-MAVS。借助脂质体转染pcDNA3/flag-MAVS质粒到HEK293T细胞中,用Western印迹检测目的蛋白的表达。同时用β干扰素的荧光素酶报告基因(IFN-β-luc)检测MAVS蛋白活性。结果:Western印迹实验证明pcDNA3/flnag-MAVS可以在HEK293T细胞中表达MAVS,并且能使IFN-β报告基因活性明显增强。结论:构建了重组质粒pcDNA3/flag-MAVS,在细胞中表达MAVS后具有刺激IFN-β转录的生物活性。
- 倪才飞赵帆郑子瑞黄蓓马红芳李力宋婷魏从文何湘张艳红钟辉
- 关键词：MAVSIFN-Β荧光素酶报告基因
- MAVS诱导细胞凋亡的机制研究
- MAVS (Mitochondrial Anti-Viral Signaling protein)是RIG-1受体介导的先天性免疫应答信号传导途径中唯一的接头分子,可以通过诱导Ⅰ型干扰素的和炎症因子的产生参与先天性免疫应...
- 管楷何湘熊向华魏从文郑子瑞宋婷曹叶钟辉
- 关键词：MAVS细胞凋亡
- 肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定
- 2014年
- 目的构建肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备NleB1的抗血清。方法从EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因组中PCR扩增出编码nleB1的990个碱基序列,构建原核表达载体pET24a-nleB1,将构建的重组表达载体的质粒pET24a-nleB1转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,利用异丙硫半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白His-NleB1表达,并利用镍柱进行亲和层析纯化和切胶纯化,以纯化后的融合蛋白His-NleB1为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清。Western印迹和ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建了pET24a-nleB1原核表达载体,纯化得到融合蛋白His-NleB1,进而免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,Western印迹和ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗体,为研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基础。
- 陈欣欣廖翔宋婷周围戴红梅岳俊杰王羽王玉瑞梁龙
- 关键词：肠出血性大肠杆菌原核表达蛋白纯化多克隆抗体
