陈皓
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- GST/MKRN1融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体制备
- 2006年
- 目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达GST/MKRN1融合蛋白,亲和层析分离纯化目的蛋白,进行动物免疫制备多克隆抗体。方法:MKRN1cDNA全长1449bp,编码482个氨基酸残基。将其基因片段克隆到pGEX-4T-1载体上,获得pGEX-4T-1-MKRN1原核表达重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得可溶性表达,经谷胱甘肽Sepharose4B介质填充的层析柱分离纯化蛋白,制备抗原免疫动物,得到pGEX-4T-1-MKRN1多克隆抗体。结果:ELISA结果显示血清抗体效价可达到1∶256000。通过Western免疫印迹及免疫细胞荧光分析,自制的多克隆抗体能特异地与MKRN1蛋白相互作用,可用于免疫细胞化学分析。结论:制备了效价和特异性良好的抗MKRN1多克隆抗体,经实验验证获得的免疫血清能够满足针对MKRN1的Western免疫印迹和细胞免疫组化检测的实验要求,为今后深入研究MKRN1表达的组织分布、细胞内定位及与端粒酶催化亚基(hTERT)之间相互作用的生物学意义提供了有用的实验工具。
- 白云秀金蕊陈皓林坚解跃华黄君健
- 关键词：端粒酶催化亚基多克隆抗体
- 端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域的鉴定
- 2004年
- 目的 :鉴定端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域。方法 :通过hPOT1的不同长度缺失突变体与EGFP绿色荧光蛋白融合 ,转染细胞后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位。结果 :确定了hPOT1进核序列是定位于第 35 5～ 375位氨基酸之间的富含碱性氨基酸序列 ,其中R3 72 ,R3 73 影响hPOT1的细胞核内定位。结论 :鉴定出hPOT1的核定位结构域 ,该结构域影响了hPOT1不同形式剪接体蛋白的细胞内分布。为进一步研究hPOT1在端粒末端调控中的作用提供了线索。
- 林坚陈皓白云秀金蕊张彬黄翠芬黄君健
- 关键词：HPOT1端粒DNA结合蛋白质类
- 靶向端粒酶的肿瘤治疗方案相关进展被引量：2
- 2007年
- 近年来,端粒作为真核细胞染色体末端的保护染色体免受核酸酶降解的特殊的DNA重复结构,成为现代生物学的研究热点。端粒与基因表达调控、细胞生长、肿瘤发生、衰老有着密切的关系。端粒维持过程中有2类重要的蛋白,即端粒相关蛋白和端粒酶。端粒酶,特别是其催化亚基hTERT,在端粒延长过程中起着不可替代的作用,与细胞永生化和癌变密切相关。近年来,靶向端粒酶的肿瘤治疗在逆转录酶抑制剂尤其是反义核酸和免疫治疗方面都取得了突破性的进展。肿瘤干细胞在肿瘤的发生发展过程中起重要作用,将很有希望成为未来靶向端粒酶的肿瘤治疗的一个重要靶标。
- 陈皓黄君健张惟材
- 关键词：端粒端粒酶肿瘤治疗免疫治疗寡核苷酸肿瘤干细胞
