代风娇
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中南民族大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 重叠延伸PCR法定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶基因被引量：4
- 2013年
- 目的通过重叠延伸PCR法,定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶(Microbial transglutaminase,MTG)基因。方法根据GenBank中登录的Streptomyces sp.H197基因中MTG序列及重叠延伸PCR定点突变技术的原理,利用DNA-MAN5.0软件设计引物,以提取的Streptomyces sp.H197基因组DNA为模板,PCR扩增MTG基因,以扩增的MTG基因片段为模板,采用重叠延伸PCR技术对一个位点进行定点突变,胶回收PCR产物,与克隆载体pMD19-T连接后,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,经PCR及单、双酶切鉴定,并测序。结果重叠延伸PCR产物可见含有酶切位点和突变位点的特异性片段;重组质粒pMD19-T-MTG经PCR及单、双酶切鉴定,证明构建正确;测序结果表明,与野生型序列比对,仅有一个碱基发生改变,即第773位腺嘌呤突变为胞嘧啶,突变位点与预期一致,实现了目标位点的定点突变。结论重叠延伸PCR法对MTG基因序列预定位点突变成功,证明阳性克隆子含突变位点,为下阶段突变型功能表达奠定基础。
- 叶程邵坤彦王亚南覃桂代风娇何冬兰
- 关键词：谷氨酰胺转氨酶点突变
- 莲藕淤泥中吸附Cu^(2+)芽孢杆菌的筛选及生物学特性研究
- 2014年
- 本研究从莲藕淤泥中筛选出4株具备良好耐盐、耐酸、耐碱稳定性的Cu2+吸附特性菌株,并对具备最强Cu2+吸附效应的菌株进行了生物学特性的研究。结果表明:4株菌株的铜离子吸附率达30.81%至67.33%。最强Cu2+吸附效应菌株的形态学、生理学及生物学特性符合枯草芽孢杆菌的特征。它在分解并利用葡萄糖产生有机酸的同时还具备分解色氨酸产生吲哚的能力。葡萄糖、柠檬酸为优势C源,尿素、酵母粉、蛋白胨为优势N源。温度、pH的单因素与组合试验表明:当温度为37℃、pH值为7.01时,该株菌长势最好。
- 覃桂代风娇詹锐何冬兰
- 关键词：芽孢杆菌生物学特性
- 谷氨酰胺转胺酶基因的结构分析及定点突变
- 2015年
- 根据分离得到的吸水链霉菌的谷氨酰胺转胺酶基因,预测其三维结构,确定其酶活中心,并构建定点突变体。用PCR扩增谷氨酰胺转胺酶基因,通过SWISS-MODEL在线预测三维结构,找到酶活中心,确定突变位点,将361位的组氨酸(CAC)突变成赖氨酸(AAA),将突变后的基因片段连接到pET-22b(+)上得到重组质粒pET-22b(+)-MTG,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。结果显示,通过对比已有的三维结构模型,找到了酶活中心,并通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术成功构建了突变体。
- 代风娇詹锐覃桂万文杰何冬兰
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶定点突变
- 谷氨酰胺转胺酶基因的定点突变及其酶学性质研究
- 蛋白质-谷氨酸-γ-谷氨酰胺转胺酶（EC2.3.2.13），即谷氨酰胺转胺酶（简称TGase、TG），它能催化谷氨酰胺转胺酶中谷氨酰胺残基的γ-羧酰胺基发生转移，促使蛋白分子内部及分子间的发生交联，可改善蛋白结构，提高物...
- 代风娇
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶基因序列定点突变酶学性质
- 文献传递
