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叶程

作品数:5 被引量:7H指数:2
供职机构:中南民族大学生命科学学院更多>>
发文基金:湖北省自然科学基金更多>>
相关领域:生物学更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 5篇生物学

主题

  • 4篇谷氨酰胺转胺...
  • 2篇乳糖诱导
  • 2篇基因
  • 2篇纯化
  • 1篇点突变
  • 1篇定点突变
  • 1篇乳糖
  • 1篇突变
  • 1篇重叠延伸PC...
  • 1篇微生物
  • 1篇微生物谷氨酰...
  • 1篇链霉菌
  • 1篇酵母
  • 1篇谷氨酰胺转氨...
  • 1篇复性
  • 1篇包涵体
  • 1篇包涵体蛋白
  • 1篇毕赤酵母
  • 1篇毕赤酵母菌
  • 1篇G基因

机构

  • 5篇中南民族大学

作者

  • 5篇何冬兰
  • 5篇叶程
  • 4篇邵坤彦
  • 3篇王亚南
  • 2篇覃桂
  • 1篇代风娇
  • 1篇黄俊
  • 1篇彭宝玉
  • 1篇尚敏邦
  • 1篇刘威

传媒

  • 3篇中南民族大学...
  • 1篇中国生物制品...
  • 1篇华中农业大学...

年份

  • 3篇2013
  • 2篇2012
5 条 记 录,以下是 1-5
排序方式:
重叠延伸PCR法定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶基因被引量:4
2013年
目的通过重叠延伸PCR法,定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶(Microbial transglutaminase,MTG)基因。方法根据GenBank中登录的Streptomyces sp.H197基因中MTG序列及重叠延伸PCR定点突变技术的原理,利用DNA-MAN5.0软件设计引物,以提取的Streptomyces sp.H197基因组DNA为模板,PCR扩增MTG基因,以扩增的MTG基因片段为模板,采用重叠延伸PCR技术对一个位点进行定点突变,胶回收PCR产物,与克隆载体pMD19-T连接后,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,经PCR及单、双酶切鉴定,并测序。结果重叠延伸PCR产物可见含有酶切位点和突变位点的特异性片段;重组质粒pMD19-T-MTG经PCR及单、双酶切鉴定,证明构建正确;测序结果表明,与野生型序列比对,仅有一个碱基发生改变,即第773位腺嘌呤突变为胞嘧啶,突变位点与预期一致,实现了目标位点的定点突变。结论重叠延伸PCR法对MTG基因序列预定位点突变成功,证明阳性克隆子含突变位点,为下阶段突变型功能表达奠定基础。
叶程邵坤彦王亚南覃桂代风娇何冬兰
关键词:谷氨酰胺转氨酶点突变
链霉菌H197 mtg基因毕赤酵母表达载体的构建与鉴定
2012年
将酵母胞内表达质粒pPIC3.5k重组成带有谷氨酰胺转胺酶的新型表达载体pPIC3.5k/MTG,为谷氨酰胺转胺酶(MTG)在毕赤酵母中的表达研究提供了实验基础.利用PCR的方法扩增出MTG基因片段,将目的片段和质粒pPIC3.5k进行双酶切后进行连接,构成重组质粒,然后转化至E.coli DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆,经测序证明为目的基因片段.结果表明:经过PCR和酶切均证明已经将目的片段转到酵母表达载体pPIC3.5k内.
何冬兰王亚南邵坤彦叶程
关键词:谷氨酰胺转胺酶
微生物谷氨酰胺转胺酶的乳糖诱导表达与纯化被引量:1
2012年
对已构建的工程菌株pET22b-MTG/E.coli BL21(DE3)进行质粒酶切和PCR鉴定,优化诱导温度、时间、pH和乳糖浓度等反应条件,采用乳糖自诱导培养基培养重组菌.并将重组菌上清液经凝胶过滤,离子交换及镍柱亲和层析后,对谷氨酰胺转胺酶纯化和SDS-PAGE电泳分析.结果表明:谷氨酰胺转胺酶在28℃,添加乳糖为1.2g/L诱导18 h,pH为7.0,培养11.5 h时升温至50℃诱导1 h,再放至28℃培养,表达效果较好,超过IPTG诱导效果.纯化后酶活为7.5 U/mL,比活力为10.9 U/mg.
何冬兰邵坤彦叶程黄俊尚敏邦
关键词:谷氨酰胺转胺酶乳糖纯化
谷氨酰胺转胺酶在毕赤酵母菌的初步表达
2013年
从重组菌株pPIC3.5k-MTG/DH5α提取重组质粒pPIC3.5k-MTG,经Sac I酶切线性化处理后纯化重组质粒电击转化到毕赤酵母菌中,用甲醇诱导表达,经SDS-PAGE鉴定重组质粒P.pastoris GS115成功表达出了TGase蛋白,并初步纯化获得了较纯的目的蛋白,其表观分子量为47 kD,酶活为0.50 U/mL.
何冬兰叶程王亚南覃桂
关键词:谷氨酰胺转胺酶毕赤酵母
重组谷氨酰胺转胺酶的表达、复性及纯化被引量:2
2013年
以吸水链霉菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到谷氨酰胺转胺酶基因片段,构建pGEX-TGase重组质粒,并转化到大肠杆菌中得到重组菌BL21/pGEX-TGase。重组菌经乳糖诱导产生融合蛋白,并对诱导条件进行了优化。表达产物主要以包涵体形式存在,采取稀释及尿素梯度液相色谱结合的方法,成功地实现了包涵体蛋白的复性。通过GST亲和柱纯化目的蛋白,得到酶活为29U/mg的电泳纯目的蛋白。
邵坤彦彭宝玉叶程刘威何冬兰
关键词:谷氨酰胺转胺酶乳糖诱导包涵体蛋白纯化复性
共1页<1>
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