邵坤彦
- 作品数：9 被引量：9H指数：2
- 供职机构：中南民族大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 一种快速提取质粒DNA鉴别重组克隆的方法被引量：1
- 2011年
- 依据快检缓冲液筛选重组子克隆的方法,结合碱裂解法提取质粒DNA的原理,经过试验摸索,应用了快检缓冲液直接裂解菌液,电泳后筛选重组质粒的方法,避免了提取质粒鉴定等繁琐步骤,其结果与菌液PCR、质粒酶切鉴定结果一致,可快速筛选出重组克隆.
- 何冬兰余金龙邵坤彦邵洁云
- 关键词：碱裂解法重组质粒
- 重叠延伸PCR法定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶基因被引量：4
- 2013年
- 目的通过重叠延伸PCR法,定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶(Microbial transglutaminase,MTG)基因。方法根据GenBank中登录的Streptomyces sp.H197基因中MTG序列及重叠延伸PCR定点突变技术的原理,利用DNA-MAN5.0软件设计引物,以提取的Streptomyces sp.H197基因组DNA为模板,PCR扩增MTG基因,以扩增的MTG基因片段为模板,采用重叠延伸PCR技术对一个位点进行定点突变,胶回收PCR产物,与克隆载体pMD19-T连接后,转化感受态E.coli DH5α,提取质粒,经PCR及单、双酶切鉴定,并测序。结果重叠延伸PCR产物可见含有酶切位点和突变位点的特异性片段;重组质粒pMD19-T-MTG经PCR及单、双酶切鉴定,证明构建正确;测序结果表明,与野生型序列比对,仅有一个碱基发生改变,即第773位腺嘌呤突变为胞嘧啶,突变位点与预期一致,实现了目标位点的定点突变。结论重叠延伸PCR法对MTG基因序列预定位点突变成功,证明阳性克隆子含突变位点,为下阶段突变型功能表达奠定基础。
- 叶程邵坤彦王亚南覃桂代风娇何冬兰
- 关键词：谷氨酰胺转氨酶点突变
- 重组菌中谷氨酰胺转胺酶表达及纯化的研究
- 微生物谷氨酰胺转胺酶，又称蛋白质-谷氨酸-谷氨酰胺转胺酶（Mcrobialtransglutaminase, EC2.3.2.13，简称MTG）是一种从微生物中分离出来的、具有催化酰基发生转移反应的酶。能催化蛋白分子内、...
- 邵坤彦
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶纯化酶活
- 文献传递
- 湖北省番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）病的发生与诊断初报
- 番茄黄化曲叶病毒属烟粉虱传双生病毒,根据其外壳蛋白（coat protein,CP）基因保守序列设计并合成一对简并引物,对采集到的番茄上疑似病例进行PCR检测,经扩增获得约500bp的DNA片段,并将扩增产物连接到pMD...
- 余金龙彭宝玉邵坤彦何冬兰
- 关键词：CP基因PCR检测
- 文献传递
- 微生物谷氨酰胺转胺酶的乳糖诱导表达与纯化被引量：1
- 2012年
- 对已构建的工程菌株pET22b-MTG/E.coli BL21(DE3)进行质粒酶切和PCR鉴定,优化诱导温度、时间、pH和乳糖浓度等反应条件,采用乳糖自诱导培养基培养重组菌.并将重组菌上清液经凝胶过滤,离子交换及镍柱亲和层析后,对谷氨酰胺转胺酶纯化和SDS-PAGE电泳分析.结果表明:谷氨酰胺转胺酶在28℃,添加乳糖为1.2g/L诱导18 h,pH为7.0,培养11.5 h时升温至50℃诱导1 h,再放至28℃培养,表达效果较好,超过IPTG诱导效果.纯化后酶活为7.5 U/mL,比活力为10.9 U/mg.
- 何冬兰邵坤彦叶程黄俊尚敏邦
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶乳糖纯化
- 链霉菌H197 mtg基因毕赤酵母表达载体的构建与鉴定
- 2012年
- 将酵母胞内表达质粒pPIC3.5k重组成带有谷氨酰胺转胺酶的新型表达载体pPIC3.5k/MTG,为谷氨酰胺转胺酶(MTG)在毕赤酵母中的表达研究提供了实验基础.利用PCR的方法扩增出MTG基因片段,将目的片段和质粒pPIC3.5k进行双酶切后进行连接,构成重组质粒,然后转化至E.coli DH5α感受态细胞中,筛选阳性克隆,经测序证明为目的基因片段.结果表明:经过PCR和酶切均证明已经将目的片段转到酵母表达载体pPIC3.5k内.
- 何冬兰王亚南邵坤彦叶程
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶
- 湖北省番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)病的发生与诊断初报
- 番茄黄化曲叶病毒属烟粉虱传双生病毒,根据其外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列设计并合成一对简并引物,对采集到的番茄上疑似病例进行PCR检测,经扩增获得约500bp的DNA片段,并将扩增产物连接到pMD...
- 余金龙彭宝玉邵坤彦何冬兰
- 关键词：CP基因PCR检测
- 重组谷氨酰胺转胺酶的表达、复性及纯化被引量：2
- 2013年
- 以吸水链霉菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到谷氨酰胺转胺酶基因片段,构建pGEX-TGase重组质粒,并转化到大肠杆菌中得到重组菌BL21/pGEX-TGase。重组菌经乳糖诱导产生融合蛋白,并对诱导条件进行了优化。表达产物主要以包涵体形式存在,采取稀释及尿素梯度液相色谱结合的方法,成功地实现了包涵体蛋白的复性。通过GST亲和柱纯化目的蛋白,得到酶活为29U/mg的电泳纯目的蛋白。
- 邵坤彦彭宝玉叶程刘威何冬兰
- 关键词：谷氨酰胺转胺酶乳糖诱导包涵体蛋白纯化复性
- 利用RT-PCR快速检测黄瓜绿斑驳花叶病毒被引量：1
- 2012年
- 根据黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）的外壳蛋白基因（CP基因）保守序列设计、合成引物,以感病西瓜、南瓜、玉米叶片组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体上测序鉴定。核苷酸序列测定结果表明,此CP基因全长为654个核苷酸,与已报道的CGMMV的CP基因同源性为97%-100%。RT-PCR方法为检测CGMMV提供了操作更为简便、特异性更强的快速、准确的检测鉴定方法,是一种控制该潜在危险性有害生物蔓延的有效途径。
- 邵坤彦彭宝玉余金龙张莹何冬兰
- 关键词：黄瓜绿斑驳花叶病毒RT-PCRCP基因
