刘栋
- 作品数：23 被引量：578H指数：11
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- 雌激素受体基因多态性在中国汉族人群中的分布特点被引量：41
- 1999年
- 目的：了解雌激素受体（ＥＲ）基因多态性在中国正常人群中的分布及其在不同种族中分布的差异。方法：通过ＰＣＲ限制性酶切方法对１７２名正常个体的基因组ＤＮＡ中ＥＲ基因ＲＦＬＰ多态性进行了观察，并结合文献进行了不同种族间的分析比较。结果：中国正常人群中ＥＲ基因型以ｐｐ型，ｘｘ型和ｐｐｘｘ型发生频率最高，这种分布特点在正常男女间差异不显著。与其他种族相比较，ＥＲ基因型在中国正常人群中的分布与日本人群中的分布较为接近，而与瑞典，美国人群中的分布差异显著。结论：ＥＲ基因ＲＦＬＰ基因多态性在不同种族间分布存在着明显的差异。
- 刘浩刘志红陈朝红刘栋刘栋
- 关键词：雌激素受体基因多态性种族汉族
- 缺氧诱导人肾间质成纤维细胞血管内皮生长因子的表达被引量：7
- 2002年
- 目的 阐明缺氧对人肾间质成纤维细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法 原代培养获得人肾间质成纤维细胞,传至第3代用于本实验。细胞经缺氧处理24 h或正常培养后以半定量RT-PCR法检测VEGF mRNA表达量,以流式细胞术检测细胞表面VEGF蛋白含量,以双抗夹心ELISA法检测培养上清VEGF蛋白含量。结果 (1)缺氧能显著增加人肾间质成纤维细胞VEGF mRNA表达(0.34±0.04 vs 0.10±0.01,n=4,P<0.01)。(2)缺氧后细胞表面VEGF蛋白含量较正常对照显著增加(平均荧光强度:1.053±0.055 vs 0.763±0.057,n=4,P<0.01)。(3)缺氧培养细胞上清VEGF含量显著高于正常对照组[(2.009±0.144)mg/L vs(1.647±0.175)mg/L,n=4,P<0.05]。结论 缺氧能诱导人肾间质成纤维细胞表达VEGF,这在缺氧引起的肾脏病理改变中可能起到一定的作用。
- 李恒刘志红刘栋黎磊石
- 关键词：缺氧血管内皮生长因子肾疾病肾间质成纤维细胞
- 雷公藤内酯醇对内皮细胞血管内皮细胞生长因子活性的影响被引量：73
- 2000年
- 目的 :研究雷公藤内酯醇对人内皮细胞血管内皮细胞生长因子 (VEGF)mRNA表达及VEGF生成与分泌的影响 ,进一步探讨雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制。 方法 :以人内皮细胞系ECV 30 4为研究对象 ,利用RT PCR ,流式细胞仪 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测不同剂量雷公藤内酯醇对佛波脂 (PMA)诱导的内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF生成与分泌的影响。 结果 :雷公藤内酯醇可以抑制PMA诱导的内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF生成与分泌 ,并呈剂量依赖性。 结论 :雷公藤内酯醇抑制内皮细胞VEGFmRNA表达及VEGF生成与分泌可能是其雷公藤内酯醇降低肾小球肾炎患者尿蛋白的作用机制之一。
- 胡可斌刘志红刘栋黎磊石
- 关键词：雷公藤内酯醇内皮细胞肾小球肾炎VEGF
- 流式细胞术检测人外周血CD4^+、CD8^+T淋巴细胞方法的建立被引量：3
- 1998年
- 外周血ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞的绝对计数在评价患者免疫状态和监测免疫抑制剂的使用中有着极其重要的作用。所以临床迫切需要一个快速、准确、重复性好和实用的检测方法以及可以参考的正常范围。有关健康中国人外周血ＣＤ４＋、ＣＤ８＋淋巴细胞的正常值范围目前国...
- 刘栋刘志红
- 关键词：流式细胞术CD4CD8T淋巴细胞
- 葡萄糖转运蛋白1基因转染对系膜细胞功能的影响被引量：2
- 2000年
- 目的通过建立葡萄糖转运蛋白 １（ＧＬＵＴ１）的基因转染系统，观察 ＧＬＵＴ１的过度表达对系膜细胞功能的影响。方法利用逆转录病毒载体建立 ＧＬＵＴ１基因转染的大鼠系膜细胞（ＭＣＧＴ１），以β－半乳糖苷酶转染细胞（ＭＣＬａｃＺ）为对照。用２－脱氧－３Ｈ－萄萄糖（２－ＤＧ）测定细胞葡萄糖摄入，流式细胞仪分析细胞表型，３Ｈ－脯氨酸掺入和流式细胞仪分别检测细胞胶原和纤维连接蛋白（ＦＮ）的合成，逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测细胞胶原ＩＶ、ＦＮ的表达。结果ＭＣＧＴ１的２－ＤＧ摄入率明显高于ＭＣＬａｃＺ［（７４１．０±６０．５）ｄｐｍ·μｇ ｐｒｏｔ－１比（９２．２±９．０）ｄｐｍ·μｇ ｐｒｏｔ－１，Ｐ ＜０．０１］。动力学分析发现 ＭＣＧＴ１的 Ｖｍａｘ是 ＭＣＬａｃＺ的 ３ ．７倍，而两者 Ｋｍ值无明显差别。在相同的葡萄糖浓度下，ＭＣＧＴ１的乳酸生成增多，表现出细胞体积增大、ＲＮＡ／ＤＮＡ和蛋白质／ＤＮＡ比值增高等细胞肥大表型。与对照相比，ＭＣＧＴ１的胶原和ＦＮ合成与表达明显增加。结论ＧＬＵＴ１的过度表达使系膜细胞具有糖尿病肾病（ＤＮ）的细胞表型。ＧＬＵＴ１的功能状态直接影响系膜细胞的糖代谢及功能变化。
- 李颖健李颖健刘志红朱加明刘栋黎磊石
- 关键词：肾小球硬化细胞外基质基因转染
- 霉酚酸酯对狼疮性肾炎患者体液和细胞免疫的影响被引量：2
- 2001年
- 目的 观察新型免疫抑制剂霉酚酸酯 (MMF)对难治性Ⅳ型狼疮性肾炎 [LN(Ⅳ ) ]患者免疫学指标的影响。方法 2 3例难治性LN(Ⅳ )患者 ,用MMF治疗 ,观察治疗 6个月内血清抗核抗体 (ANA)、抗双链DNA抗体 (A dsDNA)、补体、冷球蛋白水平及外周血CD4 +和CD8+T细胞的变化。结果 ( 1) 1个月后A dsDNA抗体即全部转阴 ,低C4 血症改善。 ( 2 ) 3个月时 ,ANA阳性、低C3 血症及高冷球蛋白的比率亦非常显著的降低。 ( 3)治疗后外周血CD4 +和CD8+T细胞比率轻度升高 ,但与治疗前无显著差异。结论 MMF能迅速有效抑制狼疮患者自身抗体产生 ,降低冷球蛋白水平 ,调整T淋巴亚群 ,这可能是MMF治疗难治性LN(Ⅳ )的重要机制之一。
- 刘红胡伟新唐政王庆文刘栋刘志红黎磊石
- 关键词：霉酚酸酯狼疮性肾炎淋巴细胞亚群
- 雷公藤内酯醇对人肾小管上皮细胞抗原呈递功能的影响被引量：32
- 2001年
- 目的 :观察雷公藤内酯醇对炎症因子刺激下人肾近端小管上皮细胞 (HKC细胞 )抗原呈递能力和共刺激分子表达的影响。 方法 :以IFN γ(2 0 0 μg/L)和TNF α(2 0 μg/L)联合刺激HKC细胞或同时加入不同浓度的雷公藤内酯醇 ,采用流式细胞仪检测细胞表面主要组织相容性二类复合体 (MHC Ⅱ )、共刺激分子B7 1、B7 2及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达情况。细胞内ICAM 1mRNA表达量采用半定量逆转录PCR法检测。 结果 :普通培养时HKC细胞低度表达MHC Ⅱ分子 ,大量表达ICAM 1分子 ,不表达B7 1和B7 2分子。IFN γ(2 0 0 μg/L)和TNF α(2 0 μg/L)联合刺激 2 4h后 ,小管细胞表面MHC Ⅱ ,ICAM 1,B7分子表达均显著增强 ,其中MHC Ⅱ变化最大。RT PCR显示ICAM 1mRNA表达也明显增加。雷公藤内酯醇可以剂量依赖性地抑制炎症因子引起的细胞MHC Ⅱ ,B7 1以及B7 2分子表达上调 ,但对刺激引起的ICAM 1蛋白及mRNA表达上调无明显影响。 结论 :雷公藤内酯醇可以抑制炎症因子刺激下人肾近端小管上皮细胞MHC Ⅱ及B7分子表达上调 。
- 李恒刘志红戴春笋刘栋黎磊石
- 关键词：雷公藤内酯醇肾近端小管上皮细胞抗原呈递细胞肾小管间质损伤
- 大黄酸对葡萄糖转运蛋白1基因转染系膜细胞功能的影响被引量：44
- 2001年
- 目的 通过观察大黄酸对葡萄糖转运蛋白 1(GLUT 1)基因转染系膜细胞 (MCGT 1)功能的影响 ,探讨大黄酸治疗糖尿病肾病 (DN)的作用机制。方法 利用逆转录病毒载体建立GLUT 1基因转染的大鼠系膜细胞 ,以 β 半乳糖苷酶转染细胞 (MCLacZ)为对照。用 2 脱氧 3 H 葡萄糖 (2 DG)测定细胞葡萄糖摄入 ,流式细胞仪分析细胞表型 ,3 H 脯氨酸掺入和流式细胞仪分别检测细胞胶原和纤维连接蛋白 (FN)的合成 ,采用比色法测定谷氨酰胺 :6 磷酸果糖转氨酶 (GFAT)的活性 ,RT PCR检测细胞胶原Ⅳ、FN和GFAT的表达。结果 MCGT 1的 2 DG摄入率明显高于MCLacZ[(741± 6 0 5 )dpm·μgprot 1比 (92 2± 9)dpm·μgprot-1],同时表现出细胞大小、RNA/DNA和蛋白 /DNA明显增加的细胞肥大表型 ,细胞外基质合成增加 ,MCGT 1的3 H 脯氨酸掺入量明显高于MCLacZ[(7 0± 0 4)dpm·cell 1比 (4 6± 0 6 )dpm·cell 1],GFAT活性明显增强 (约增加 1 8倍 )。大黄酸能够减少MCGT 1的糖摄取 [(5 6 0± 6 4)dpm·μgprot 1比 (741± 6 0 5 )dpm·μgprot 1) ,纠正MCGT 1的肥大状态 ,并抑制MCGT 1细胞外基质的合成和表达 ,降低MCGT 1的GFAT活性。结论 GLUT 1的过度表达会明显改变系膜细胞的功能 ,大黄酸能逆转GLUT 1基因转染所致系膜?
- 朱加明刘志红李颖健刘栋郭啸华黎磊石
- 关键词：载体蛋白质类细胞外基质系膜细胞大黄酸葡萄糖转运蛋白1基因转染
- 雷公藤内酯醇对人树突状细胞体外发育及免疫学功能的影响被引量：48
- 2001年
- 目的 :观察雷公藤内酯醇对人树突状细胞 (dendriticcells ,DC)体外发育及免疫学功能的影响。 方法 :人DC体外培养时 ,加入不同剂量 (0、0 3、1 0、3 0、10、30、10 0 μg/L)的雷公藤内酯醇处理 ,观察DC的生成情况 ,以流式细胞仪分析各处理组生成细胞的免疫表型及抗原内吞能力 ,体外混合淋巴细胞反应检测各组细胞的抗原呈递功能 ,TUNEL方法检测细胞凋亡。 结果 :体外培养 7天后 ,10 μg/L及以上剂量雷公藤内酯醇处理组细胞大部分破碎死亡。低剂量 (0 3、1 0、3 0 μg/L)雷公藤内酯醇处理对生成的DC的形态及数量、共刺激分子的表达、内吞蛋白质抗原OVA FITC的能力、同种T细胞的免疫刺激活性均无显著影响 ;但正常DC与同种T细胞混合培养时 ,雷公藤内酯醇以剂量依赖性方式抑制T细胞的增生 ;正常DC以 30 μg/L雷公藤内酯醇处理 2 4h ,有 5 4%的细胞发生凋亡 ; 结论 :低剂量 (0 3、1 0、3 0 μg/L)的雷公藤内酯醇处理对DC的体外发育及免疫功能均无显著影响 。
- 朱学军刘志红刘栋陈朝红黎磊石
- 关键词：雷公藤内酯醇树突状细胞发育凋亡
- 雷公藤内酯醇对Bcl-2基因转染细胞凋亡作用的研究被引量：14
- 1998年
- 目的：通过比较转染ｂｃｌ－２（＋／＋）及未转染ｂｃｌ－２（－／－）原癌基因的２Ｂ４细胞，在雷公藤内酯醇作用下细胞凋亡和细胞增殖的差别，探讨该化合物诱导淋巴细胞凋亡的机制。方法：以ｂｃｌ－２（＋／＋）２Ｂ４细胞及ｂｃｌ－２（－／－）２Ｂ４细胞为研究对象，结合流式细胞仪，ＤＮＡ凝胶电泳，及３Ｈ－ＴｄＲ掺入等方法，评价雷公藤内酯醇对此两种细胞的作用。结果：①雷公藤内酯醇只能促使ｂｃｌ－２（－／－）２Ｂ４细胞凋亡，且呈浓度依赖关系；但是不能使ｂｃｌ－２（＋／＋）２Ｂ４细胞发生凋亡；②无论２Ｂ４细胞是否转染ｂｃｌ－２原癌基因，雷公藤内酯醇均能够抑制其掺入３Ｈ－ＴｄＲ，并呈浓度依赖关系；③无论是转染及未转染ｂｃｌ－２原癌基因的２Ｂ４细胞，雷公藤内酯醇均能够使其Ｇ０／Ｇ１期细胞数增多，Ｓ＋Ｇ２／Ｍ期细胞数减少。结论：雷公藤内酯醇不能造成过度表达Ｂｃｌ－２蛋白的ｂｃｌ－２（＋／＋）２Ｂ４细胞凋亡。同时，实验结果还说明雷公藤内酯醇可能通过独立的作用途径诱导细胞凋亡并阻止其增殖。
- 杨俊伟刘栋陈朝红戴春笋刘志红黎磊石
- 关键词：雷公藤内酯醇BCL-2蛋白细胞凋亡
