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V806M突变型Axin基因真核表达载体的构建及其在神经胶质细胞瘤内的表达被引量：1: 2006年; 目的构建V806M突变型Axin基因真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并稳定表达于大鼠神经胶质瘤细胞系C6。方法用分子克隆技术,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),经NheⅠ和SmaⅠ双酶切鉴定后,用脂质体法稳定转染神经胶质瘤细胞C6。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),稳定转染后,经荧光显微镜和免疫细胞化学染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究此种突变体Axin是否影响细胞的生物学行为以及是否参与胶质瘤的发生发展奠定了实验基础。; 李烦繁李青陈广生张丽英洪柳王淑芳姚丽; 关键词：EGFP 真核表达载体

CIDEs家族在脂肪细胞肿瘤中的表达被引量：1: 2008年; 目的:探讨CIDE基因家族与脂肪肉瘤的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测30例正常脂肪组织、20例脂肪瘤和21例脂肪肉瘤组织中CIDEA、CIDEB和CIDE3的表达情况。结果:CIDEA和CIDE3在30例正常脂肪组织、20例脂肪瘤和8例高分化脂肪肉瘤中均高表达,在2例去分化、6例黏液型及5例多形型脂肪肉瘤中,仅在成熟的脂肪细胞或有脂母细胞分化的细胞中表达,而去分化的肿瘤细胞和基质细胞则不表达;且CIDEA和CIDE3的表达一致;CIDEB在所有正常脂肪组织、脂肪瘤及脂肪肉瘤中均呈阴性。结论:CIDEA和CIDE3均与脂肪细胞的分化密切相关,二者的表达缺失可能与脂肪肉瘤的发生和进展有关,但CIDEB与脂肪肉瘤的发生无明显关系。; 王淑芳李青程红姚丽李繁烦张静陈广生赵大庆闵婕李南林; 关键词：脂肪肉瘤细胞分化

人CIDE-3蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备: 2006年; 目的:制备人诱导细胞死亡的DFF45样效应因子-3(CIDE-3)蛋白兔抗人多克隆抗体并进行鉴定。方法:将原核表达载体pET28a(+)/CIDE-3转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达CIDE-3蛋白,经Ni-NTA Agarose纯化后免疫新西兰白兔,获得人CIDE-3蛋白兔抗血清,并通过免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组织化学法对抗体进行鉴定。结果:成功地表达、纯化了人CIDE-3蛋白,与弗氏佐剂乳化后,免疫新西兰白兔,获得高效价的人CIDE-3蛋白兔抗血清,ELISA结果证实该抗体具有较高的亲和性,Western blot及免疫组织化学染色显示证实该抗体能够与人CIDE-3蛋白特异性结合,是一种细胞质蛋白。结论:获得了效价高、特异性较强的人CIDE-3蛋白兔抗血清,为进一步研究人CIDE-3奠定了实验基础。; 姚丽李青张静王淑芳叶菁陈广生李烦繁; 关键词：多克隆抗体 WESTEM BLOT 酶联免疫吸附试验

人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达被引量：6: 2006年; 目的:构建人CIDE-3基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA,经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段,并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3。经限制性内切酶BamHI、XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得全长为516bp的人CIDE-3基因片段。以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为23000的重组CIDE-3蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞质中,表达量约占全菌蛋白的32%。结论:成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3,并表达出重组CIDE-3蛋白,为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础。; 姚丽李青李蓬张静叶菁陈广生王淑芳; 关键词：基因克隆原核表达

人CIDE3基因克隆和真核表达载体构建及促凋亡作用的研究被引量：5: 2007年; 目的:克隆人诱导细胞死亡的DFF45样效应因子3(CIDE3)全长基因,构建真核表达质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3,并检测其促凋亡作用。方法:①提取人腹部皮下白色脂肪组织的总RNA,经RT-PCR获得CIDE3全长基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.l(+),构建重组质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3,并进行序列测定。②用脂质体法将pcDNA3.l(+)-CIDE3转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,通过TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:①经RT-PCR扩增得到特异性717 bp的目的片段,构建的重组质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3经序列测定,结果与Genbank发表的序列完全一致。②转染Hela细胞后,经Tunel染色法检测发现,转染pcDNA3.l(+)-CIDE3后有大约25%的细胞发生了凋亡,与转染空质粒pcDNA3.l(+)(<5%)及未转染质粒的细胞相比,其凋亡细胞明显增多。结论:成功克隆了人CIDE3全长基因,构建了真核表达质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3,并验证了CIDE3基因可诱导细胞发生凋亡的生物学作用,为进一步研究CIDE3的生物学功能奠定了坚实基础。; 王淑芳李青姚丽程虹张静叶菁李繁烦李南林; 关键词：基因克隆真核表达凋亡

非整倍体与肿瘤细胞增殖表型关系的初步研究: 2005年; 目的探讨非整倍体与肿瘤细胞增殖表型的关系.方法采用平板克隆形成实验检测人胶质瘤细胞系BT325和大鼠胶质瘤细胞系C6单个细胞的增殖能力,应用常规染色体分析方法检测这些细胞系的核型.结果 BT325和C6细胞系中具有最强增殖能力的细胞分别占8.0%和13.0%左右,具有中等增殖能力的细胞比例分别占17.0%和27.0%,不具有增殖能力或增殖能力很低的细胞分别占75.0%和60.0%.连续细胞克隆形成实验发现,只有具有最强增殖能力的细胞能够连续传代.核型分析结果表明这些细胞系都是非整倍体核型,细胞系BT325的众数范围是47～57,C6的众数范围是32～41,众数范围的细胞比例分别是72.6%和73.4%.结论单纯从非整倍体出发不可能合理解释肿瘤细胞增殖表型的异质性现象,提示有其它机制参与癌变过程.; 张丰李青张丽英赵一岭姚丽洪柳聂蕾邵秋杰; 关键词：非整倍体

不同剂量的重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠心脏移植排斥反应的抑制作用: 目的：粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是最重要的造血生长因子之一。有研究显示 G-CSF 对于获得性免疫和 T 细胞耐受有十分重要的作用,但其作用机理尚未完全阐明。本研究利用完全错配的大鼠异位心脏移植模型,通过观察供心存...; 梁宏亮易定华郑奇军魏旭峰杜俊峰姚丽; 文献传递

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姚丽