王淑芳
- 作品数：7 被引量：30H指数：3
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- V806M突变型Axin基因真核表达载体的构建及其在神经胶质细胞瘤内的表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建V806M突变型Axin基因真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并稳定表达于大鼠神经胶质瘤细胞系C6。方法用分子克隆技术,构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),经NheⅠ和SmaⅠ双酶切鉴定后,用脂质体法稳定转染神经胶质瘤细胞C6。结果构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),稳定转染后,经荧光显微镜和免疫细胞化学染色法检测,可见细胞内有EGFP及Axin的表达。结论成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-MT-Axin(V806M),并在神经胶质瘤细胞C6中表达,为研究此种突变体Axin是否影响细胞的生物学行为以及是否参与胶质瘤的发生发展奠定了实验基础。
- 李烦繁李青陈广生张丽英洪柳王淑芳姚丽
- 关键词：EGFP真核表达载体
- CIDEs家族在脂肪细胞肿瘤中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的:探讨CIDE基因家族与脂肪肉瘤的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测30例正常脂肪组织、20例脂肪瘤和21例脂肪肉瘤组织中CIDEA、CIDEB和CIDE3的表达情况。结果:CIDEA和CIDE3在30例正常脂肪组织、20例脂肪瘤和8例高分化脂肪肉瘤中均高表达,在2例去分化、6例黏液型及5例多形型脂肪肉瘤中,仅在成熟的脂肪细胞或有脂母细胞分化的细胞中表达,而去分化的肿瘤细胞和基质细胞则不表达;且CIDEA和CIDE3的表达一致;CIDEB在所有正常脂肪组织、脂肪瘤及脂肪肉瘤中均呈阴性。结论:CIDEA和CIDE3均与脂肪细胞的分化密切相关,二者的表达缺失可能与脂肪肉瘤的发生和进展有关,但CIDEB与脂肪肉瘤的发生无明显关系。
- 王淑芳李青程红姚丽李繁烦张静陈广生赵大庆闵婕李南林
- 关键词：脂肪肉瘤细胞分化
- 人CIDE-3蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备
- 2006年
- 目的:制备人诱导细胞死亡的DFF45样效应因子-3(CIDE-3)蛋白兔抗人多克隆抗体并进行鉴定。方法:将原核表达载体pET28a(+)/CIDE-3转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达CIDE-3蛋白,经Ni-NTA Agarose纯化后免疫新西兰白兔,获得人CIDE-3蛋白兔抗血清,并通过免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫组织化学法对抗体进行鉴定。结果:成功地表达、纯化了人CIDE-3蛋白,与弗氏佐剂乳化后,免疫新西兰白兔,获得高效价的人CIDE-3蛋白兔抗血清,ELISA结果证实该抗体具有较高的亲和性,Western blot及免疫组织化学染色显示证实该抗体能够与人CIDE-3蛋白特异性结合,是一种细胞质蛋白。结论:获得了效价高、特异性较强的人CIDE-3蛋白兔抗血清,为进一步研究人CIDE-3奠定了实验基础。
- 姚丽李青张静王淑芳叶菁陈广生李烦繁
- 关键词：多克隆抗体WESTEMBLOT酶联免疫吸附试验
- 人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达被引量：6
- 2006年
- 目的:构建人CIDE-3基因的原核表达载体,并在E.coliBL21(DE3)中表达。方法:提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA,经RT-PCR扩增人CIDE-3基因片段,并将其克隆入原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a(+)-CIDE-3。经限制性内切酶BamHI、XhoI双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白。结果:获得全长为516bp的人CIDE-3基因片段。以构建的重组质粒pET28a(+)-CIDE-3转化E.coliBL21(DE3)后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约为23000的重组CIDE-3蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白主要以不溶性包涵体的形式存在于E.coliBL21(DE3)的胞质中,表达量约占全菌蛋白的32%。结论:成功地构建了原核表达载体pET28a(+)-CIDE-3,并表达出重组CIDE-3蛋白,为进一步多克隆抗体的制备和凋亡的相关研究奠定了实验基础。
- 姚丽李青李蓬张静叶菁陈广生王淑芳
- 关键词：基因克隆原核表达
- 脂肪基质干细胞的分离培养及其作为软骨种子细胞的研究被引量：18
- 2007年
- 目的研究人体脂肪基质干细胞(ADSC)分离培养的方法,探讨其在体外向成软骨细胞诱导分化的能力。方法取临床吸脂所得脂肪组织,胶原酶消化分离后,接种于培养基中进行原代培养,传至一代时换软骨诱导培养液进行成软骨诱导分化,定期通过阿尔辛蓝染色、天狼猩红染色及免疫组化等方法进行证实。结果ADSC在体外成软骨诱导后,可向软骨细胞分化,经诱导的细胞可分泌软骨细胞特异性的Ⅱ型胶原以及硫酸蛋白多糖。结论在适当诱导条件下,ADSCs有向软骨细胞分化的潜能,为软骨组织工程种子细胞来源的研究提供了新方法。
- 马钰李青赵大庆王淑芳李望舟闵婕谷雨
- 关键词：脂肪基质干细胞软骨
- 人CIDE3基因克隆和真核表达载体构建及促凋亡作用的研究被引量：5
- 2007年
- 目的:克隆人诱导细胞死亡的DFF45样效应因子3(CIDE3)全长基因,构建真核表达质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3,并检测其促凋亡作用。方法:①提取人腹部皮下白色脂肪组织的总RNA,经RT-PCR获得CIDE3全长基因,克隆入真核表达载体pcDNA3.l(+),构建重组质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3,并进行序列测定。②用脂质体法将pcDNA3.l(+)-CIDE3转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,通过TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:①经RT-PCR扩增得到特异性717 bp的目的片段,构建的重组质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3经序列测定,结果与Genbank发表的序列完全一致。②转染Hela细胞后,经Tunel染色法检测发现,转染pcDNA3.l(+)-CIDE3后有大约25%的细胞发生了凋亡,与转染空质粒pcDNA3.l(+)(<5%)及未转染质粒的细胞相比,其凋亡细胞明显增多。结论:成功克隆了人CIDE3全长基因,构建了真核表达质粒pcDNA3.l(+)-CIDE3,并验证了CIDE3基因可诱导细胞发生凋亡的生物学作用,为进一步研究CIDE3的生物学功能奠定了坚实基础。
- 王淑芳李青姚丽程虹张静叶菁李繁烦李南林
- 关键词：基因克隆真核表达凋亡
- 小鼠皮肤干细胞染色体非随机分配方式的研究
- 2005年
- 目的:以小鼠皮肤干细胞为研究对象,对无论干细胞分裂多少次的一组DNA“永生化”链,能持续存在于干细胞基因组中的这一假说进行验证。方法:利用溴脱氧尿嘧啶核苷(B rdU)掺入法,检测发育期和成年期标记的小鼠皮肤B rdU阳性细胞存在情况。结果:免疫组化结果表明,B rdU标记停止后24 h,发育期和成年期标记的小鼠皮肤上皮细胞均为阳性,阳性部位为细胞核,7天后仍为阳性。90天后发育期小鼠皮肤上皮细胞中仍有少数阳性细胞,它们主要存在于毛囊的隆突部位,另有少数阳性细胞散落在基底层。但成年期小鼠30天后皮肤B rdU阳性上皮细胞已全部转为阴性。结论:本实验结果证实,小鼠皮肤干细胞中存在DNA永生化链,其染色体发生了非随机分配。
- 张丰李青赵一岭王淑芳洪柳聂蕾张丽英
- 关键词：皮肤干细胞成体干细胞
