孙红岩
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
- 供职机构：中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：中国疾病预防控制中心青年科研基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HIV-1 DNA疫苗的免疫效价及其与免疫剂量的相关性被引量：4
- 2012年
- 目的研究HIV-1 DNA疫苗的免疫效价及不同剂量HIV-1 DNA疫苗对小鼠诱导免疫反应的影响。方法将80只BALB/c小鼠随机分为8组,每组10只,分别为对照组(pDRVI1.0空载体,100μg)、DNA疫苗pENV 3.125、6.25、12.5、25、50、100和200μg组,经小鼠胫骨前肌注射,100μl/只,每隔2周免疫1次,共3次。采用ELISA法检测小鼠血清抗体反应,并计算抗体阳转率;ELISPOT法检测小鼠T细胞免疫反应,并计算阳转率。结果高剂量组抗体反应仅25μg与100μg组之间差异有统计学意义(P<0.05),其他高剂量组间及低剂量各组间差异均无统计学意义(P>0.05),而各疫苗组抗体阳转率总体之间差异有统计学意义(P<0.01)。高剂量组细胞免疫反应强度之间差异无统计学意义(P>0.05),且比低剂量组更趋稳定。DNA疫苗诱导的抗体和细胞免疫反应均随免疫剂量的增加而增加,且呈正相关。当疫苗剂量达到100μg时,均达最高反应强度。结论 HIV-1 DNA疫苗25μg免疫剂量对BALB/c小鼠可能是适当的免疫剂量。在选择临床或临床前试验免疫剂量时,使用统计学无差异的低剂量可能免疫效果更好。
- 郝彦玲李平何彦平孙红岩傅晶晶邵一鸣
- 关键词：HIV-1疫苗DNA免疫效价免疫剂量
- HIV-1膜蛋白gp140三聚体的真核表达、纯化、鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的构建表达中国流行株HIV-1 CRF_07 B/C亚型(CN54)膜蛋白gp140及其突变体,为HIV-1疫苗设计提供优秀的免疫原。方法构建gp140、gp140 ST质粒,将质粒瞬时转染293F细胞,120h后收获上清液,经纯化、浓缩、PBS置换后,利用SDS-PAGE电泳、Western-blot检测蛋白的表达,ELISA检测其与HIV-1阳性病人血清的反应性。结果 SDS-PAGE电泳、Western-blot试验证明成功表达了gp140、gp140 ST蛋白,并且gp140 ST是一个稳定的三聚体蛋白质。ELISA试验检测,发现表达的gp140 ST蛋白与HIV-1阳性病人血清的亲和力高于gp140蛋白。结论经过突变改造的gp140 ST具有稳定的三聚体构象,可作为HIV-1免疫原进行疫苗研究。
- 李勋牛德云康延申郝彦玲张其程何彦平孙红岩邵一鸣齐智
- 关键词：关键词HIV-1点突变三聚体真核表达
- HIV-1gp140蛋白不同聚合体的纯化
- 2016年
- 目的对HIV-1 CN54膜蛋白gp140的不同聚合体进行纯化。方法将在哺乳动物细胞Free Style 293F中表达的gp140蛋白经过糖基化亲和层析、阴离子交换层析和凝胶排阻层析3种纯化方法进行分离,并对该纯化方法进行优化。采用ELISA方法检测不同结构抗原与广谱中和抗体的特异性反应。结果选择lentil lectin填料进行糖基化亲和层析,纯化的gp140蛋白为4.56 mg/L,得率为89.9%;选择弱阴离子填料DEAE用于阴离子交换层析,纯化的gp140蛋白为3.87 mg/L,得率为84.8%;凝胶排阻层析纯化获得了gp140蛋白的多聚体、三聚体+二聚体以及单体3种结构。不同结构的gp140蛋白可与CD4结合位点的广谱中和抗体VRC01以及结构依赖性的V3区特异性广谱中和抗体反应,具有较好的特异性,且不同聚合体在V3区结构依赖性抗体2G12的结合抗体反应上会存在一定差异。结论成功建立了HIV-1 gp140蛋白不同聚合体纯化的方法,该方法对于其他相似蛋白的纯化具有参考作用;不同结构的gp140蛋白的分离为进一步研究其免疫原性奠定了基础。
- 刘建东何彦平鞠斌孙红岩宋伟葛向阳任莉刘颖邵一鸣郝彦玲
- 关键词：HIV纯化
- HIV-1 CRF07_BC毒株gp41重组DNA-蛋白疫苗的制备及免疫被引量：1
- 2014年
- 目的制备中国HIV-1流行株CRF07_BC膜蛋白gp41重组DNA-蛋白疫苗,并观察其在BALB/c小鼠中的免疫效果。方法从CRF07_BC毒株（CN54）中扩增gp41胞外段,删除抗原决定环loop区（the immune dominant loop region）,引入T569A和I675V两个突变位点,制备含N-端七价重复序列（N-terminal heptad repeat,NHR）、C-端七价重复序列（C-terminal heptad repeat,CHR）和近膜区（membrane proximal external region,MPER）的重组疫苗,以未改造的gp41相应区域为对照免疫原。使用DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强的方式免疫BALB/c小鼠,最后一针免疫后4周,经小鼠眼眶采血,分离血清,检测结合抗体水平、中和抗体水平、线性表位抗体水平。结果 CN54 gp41野生型及改造型重组DNA疫苗质粒和原核蛋白表达质粒经双酶切及测序鉴定均构建正确;CN54 gp41W和CN54 gp41M表达蛋白相对分子质量约在12 000-15 000之间,纯化的重组蛋白可被豚鼠抗gp140阳性血清识别。CN54M组（CN54 gp41改造抗原组）诱导出较高的结合抗体水平,而线性表位抗体水平明显低于CN54W组（CN54 gp41未改造组）,两组均未检测出具有保护性的中和抗体水平。结论 CN54 gp41改造抗原经DNA疫苗初免-蛋白疫苗加强免疫小鼠,可产生较高的结合抗体,且主要是针对空间构象表位,但不具有中和能力。
- 王妮丹罗振武孙红岩何彦平邵一鸣郝彦玲
- 关键词：人类免疫缺陷病毒GP41疫苗
- HIV-1 CRF07_BC gp41重组抗原在不同体系表达效率的比较被引量：1
- 2014年
- 目的获得HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原表达效率最佳的体系。方法采用基因工程技术将gp41重组蛋白基因分别构建到pThioHis A,pThioHis A-1(不含标签),PBV220,PGEX-6p-1原核表达载体。转化大肠杆菌BL21和Rosetta两种宿主菌,通过IPTG诱导表达并经WB鉴定。结果 4种原核表达质粒构建完成,蛋白成功表达。PGEX-6p-1表达量明显高于pThioHis A载体;而无标签载体组中,PBV220表达量优于pThioHis A-1。BL21和Rosetta宿主菌对表达体系无影响。结论 HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原在大肠杆菌中以包涵体形式存在,构建在PGEX-6p-1和PBV220载体上gp41重组蛋白表达效率较高,为gp41疫苗的研究和血清学检测提供充足的抗原。
- 王妮丹罗振武郝彦玲孙红岩何彦平邵一鸣
- 关键词：HIV-1
