张存芳
- 作品数：13 被引量：46H指数：5
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 猪CFTR基因特异性锌指核酸酶的筛选与鉴定
- 2012年
- 【目的】获得靶向猪囊性纤维化跨膜传导调节因子(Cystic fibrosis transmembrane conductance regu-lator,CFTR)基因的特异锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN),为建立CFTR基因敲除猪细胞系提供技术支持。【方法】通过开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选,首先以已知三锌指蛋白为框架,随机突变单个锌指关键位点氨基酸编码序列,建立人工三锌指蛋白随机库;然后应用细菌双杂交技术,从库中筛选出能够结合CFTR基因靶位点的三锌指蛋白;最后将获得的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ组装成特异ZFN,通过酵母验证体系,检测ZFN靶向切割其识别序列的效率。【结果】获得3个人工三锌指蛋白随机库,每个库约含有2×106个单克隆,通过2轮细菌双杂交筛选,分别获得48个针对CFTR基因左右两侧靶位点的三锌指蛋白。ZFN活性验证结果表明,约90%的ZFN能够在酵母细胞内实现靶向切割,获得了高效特异的ZFN。【结论】获得了猪CFTR基因高效特异的ZFN。
- 王瑞王令林娟张存芳张智英
- 关键词：锌指核酸酶锌指蛋白
- 黄牛PTHRP、GHRH和GHRHR基因SNP及其与生长性状关联分析
- 本研究采用PCR-SSCP和DNA测序技术，检测了南阳牛、秦川牛和郏县红牛3个群体共476个个体的3个与生长发育相关基因(PTHRP、GHRtt和GHRHR)的遗传变异，分析了其遗传结构和遗传多样性，并将多态位点与南阳牛...
- 张存芳
- 关键词：黄牛生长性状郏县红牛南阳牛
- 文献传递
- POU1F1基因的遗传变异对南阳牛生长发育性状的影响(英文)被引量：12
- 2006年
- 利用PCR-RFLP技术首次研究了南阳牛群体100个个体POU1F1基因多态性及其与体重、体尺等生长性状指标之间的相关性。结果表明,南阳牛群体POU1F1基因座的451 bp的PCR产物被限制性酶HinfⅠ消化后表现多态性,它们的等位基因A／B频率为:0．465／0．535,且处于Hardy-Weinberg平衡状态。同时,南阳牛群体POU1F1-HinfⅠ基因座不同基因型与体重、体尺等生长性状指标相关分析的结果表明:南阳牛群体内BB与AB基因型个体在初生重、断奶前平均日增重、六月龄体重、体斜长和胸围以及十二月龄的体重、体高、体斜长和胸围指标上有显著差异,且BB>AB(P<0．05);群体内BB型个体在十二月龄体重指标上显著高于群体的AA型个体,即BB>AA(P<0．05),在其他各年龄段的各项体重和体尺指标上同样呈现出B等位基因高于A等位基因的一种趋势。初步认为BB基因型为优势基因型,相应地B为优势等位基因,对选择有正向效应,提示POU1F1基因的B等位基因可能与高生长发育性状有关。
- 薛恺陈宏王珊蔡欣刘波张存芳雷初朝王新庄王轶敏牛晖
- 关键词：南阳牛PCR-RFLPPOU1F1基因多态性生长发育性状
- 锌指核酸酶在基因组靶向修饰中的应用被引量：13
- 2009年
- 同源重组和逆转录病毒介导转基因法是目前基因组修饰中常用的两种主要方法.由于这些传统方法效率低,特异性差等缺点,制约了其在研究中的应用.锌指核酸酶(zinc finger nuclease,ZFN)是一种人工合成酶,含有锌指蛋白DNA结合域和非特异性核酸酶FokI结构域.ZFN在对基因组的靶向修饰时,表现出高度特异性和高效性.最新研究结果显示,锌指核酸酶在哺乳动物细胞和斑马鱼基因组靶向敲除的效率高达20%.这一技术的出现,将给基因组靶向修饰的研究和应用领域带来革命,特别是在基因治疗人类疾病方面有巨大的潜力和广阔的前景.
- 王令张存芳张智英
- 关键词：锌指核酸酶同源重组基因组基因治疗
- 郏县红牛ZAG基因多态性与生长性状的相关性被引量：4
- 2008年
- ZAG基因的功能主要是促进脂肪分解,减少脂肪含量。文章利用PCR-SSCP和DNA测序技术研究了145头郏县红牛ZAG基因编码区4个位点(Z1、Z2、Z3、Z4)的多态性,发现Z1、Z3、Z4位点存在SSCP多态。对不同SSCP带型的对应片段进行了测序分析,共发现6个新的SNP多态位点(C115T、A3257G、A4013G、T4027C、C4032T、T4120C)。Z3位点处于Hardy-Weinberg平衡状态,Z1、Z4位点处于非平衡状态。不同基因型与生长发育性状的相关性分析显示,Z4位点上,AC基因型个体的体斜长、胸围、管围、体重指标显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),大于AA、AB基因型个体,暗示该位点有可能作为郏县红牛生长性状标记辅助选择的标记之一。
- 郭义昆陈宏张宝潘传英张良志赵苗张存芳蓝贤勇王居强
- 关键词：郏县红牛PCR-SSCP生长发育性状
- 一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体
- 本发明一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体，属于基因工程技术领域。其中所述的方法包括：(1)内源基因靶位点的选择；(2)构建穿梭载体pAdTrack-CMV-T2A；(3)制备重...
- 张智英王令张婷婷李亚明李战伟任刚杨涵江张存芳雷洁王瑞麻丽霞
- 文献传递
- 牛的IGF基因的(CA)微卫星断裂区"AATA interrupt"的多态性研究
- 张良志陈宏蓝贤勇任刚魏天宝滑溜帅张存芳张宝赵苗郭义昆
- 关键词：IGF-1基因
- 靶向敲除绵羊MSTN基因锌指核酸酶的筛选及腺病毒载体构建
- 通过细菌双杂交筛选得到了6个单锌指库和两个3锌指库;从两个3锌指库中分别PCR扩增得到左右两侧锌指，构建至酵母表达载体，在酵母中验证得到两对有效的ZFN;利用T2A序列将左右两侧ZFN，分步构建至pAdTrack-CMV...
- 张存芳张智英
- 关键词：锌指核酸酶MSTN绵羊腺病毒载体
- 靶向绵羊MSTN基因的锌指核酸酶腺病毒表达载体的构建及活性验证被引量：5
- 2012年
- 旨在构建并包装打靶绵羊MSTN基因的位点特异性锌指核酸酶腺病毒表达载体,以借助腺病毒的高转染效率和非整合性以及锌指核酸酶的高效性和特异性实现对绵羊MSTN基因的敲除。本研究利用PCR扩增T2A序列和锌指核酸酶异源二聚体序列,测序鉴定后依次克隆至pAdTrack-CMV,得到pAdTrack-ZFNL-T2A-ZFNR穿梭载体,将之与腺病毒骨架载体pAdEasy-1共转染至BJ5183菌株进行同源重组,以构建pAdEasy-ZFNL-T2A-ZFNR表达载体。然后用上述表达载体转染HEK293细胞进行重组腺病毒的包装,将PCR鉴定阳性的病毒进行扩增并测定病毒滴度。侵染绵羊胎儿成纤维细胞检测重组腺病毒对靶细胞的侵染能力,并用Western blot方法检测绵羊胎儿成纤维细胞中ZFN的表达,进而在细胞水平验证ZFN的活性。结果,包装得到的锌指核酸酶重组腺病毒能够高效侵染绵羊胎儿成纤维细胞并表达ZFN,腺病毒介导的ZFN可识别并切割绵羊MSTN基因。本研究成功获得靶向识别并切割绵羊MSTN基因的锌指核酸酶重组腺病毒。
- 张存芳王令任刚张婷婷王瑞严国勇张智英
- 关键词：锌指核酸酶MSTN基因腺病毒基因敲除
- 锌指核酸酶介导的绵羊MSTN基因靶向敲除
- 基因打靶是根据同源重组原理利用外源DNA替换细胞相应的染色体片段,对基因组进行精确操控的技术。由于细胞内自发的同源重组概率仅有1/106,甚至更低,极大地限制了基因打靶技术在转基因动物生产中的应用。研究表明在基因组中引入...
- 张存芳
- 关键词：绵羊MSTN锌指核酸酶基因打靶基因敲除
- 文献传递
