张莹莹
- 作品数：5 被引量：9H指数：1
- 供职机构：安徽工程大学生物与化学工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 匍枝根霉TP-02内切葡聚糖酶基因eg2的克隆表达及功能分析被引量：8
- 2013年
- 从匍枝根霉TP-02的cDNA文库中克隆得到内切葡聚糖酶基因eg2,在大肠杆菌BL21中成功表达,通过对其结构功能进行初步分析,并对EGⅡ的纤维素结合模块CBM1及催化结构域GH45区进行突变研究。结构分析表明:N39S可影响CBM1亲水平面的形成,V136D及E260D对GH45活性中心的改变较大。突变株的发酵特性显示,N39S可缩短达到峰值的时间,V136D及E260D可显著提高酶活。其中,突变株EGⅡ-F在发酵21 h后,酶活达到最高为1.321 IU/mL,比突变前提高了82.7%。
- 汤斌张莹莹杨亚平
- 关键词：匍枝根霉内切葡聚糖酶突变功能分析
- 乙醇脱氢酶基因和乙醛脱氢酶基因的克隆及表达被引量：1
- 2013年
- 利用表达载体pYES2表达乙醇脱氢酶2(Alcohol dehydrogenase 2,ADH2)和乙醛脱氢酶6(Acetaldehyde dehydrogenase 6,ALDH6),从而实现将乙醇直接转化为乙酸。以啤酒酵母总DNA为模板,通过PCR获得adh2基因和aldh6基因。分别构建表达载体pYES2-adh2、pYES2-aldh6和pYES2-aldh6-adh2,并电击导入宿主菌INVScl中。PCR测序结果上传GenBank获得登录号为JX901290、JX901291,与已公布序列相似性分别为96%和99%。重组菌扩大培养后移入到诱导培养基中,进行诱导表达。在含2%半乳糖诱导培养基诱导下4 h酶活达到最高,ADH酶活为0.49U/mg,是原始菌株的2.7倍,ALDH酶活为0.11 U/mg,为原始菌株的2倍。
- 汤斌杨亚平张莹莹
- 关键词：乙醇脱氢酶乙醛脱氢酶克隆
- 匍枝根霉内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的克隆及表达
- 2013年
- 从匍枝根霉TP-02的cDNA文库中克隆得到其内切葡聚糖酶基因,并在毕赤酵母中进行表达.该内切葡聚糖酶基因大小为954bp,将其与pPIC9K质粒经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,利用T4连接酶进行连接.将线性化后的重组质粒转化毕赤酵母GS115,并利用MD平板和刚果红平板进行筛选.阳性克隆经甲醇诱导培养84h后,产生的内切葡聚糖酶酶活力达到峰值为1.754IU/mL.
- 张莹莹汤斌
- 关键词：匍枝根霉内切葡聚糖酶毕赤酵母
- 匍枝根霉组成型内切葡聚糖酶基因的筛选和表达
- 2014年
- 从匍枝根霉cDNA文库中筛选得到组成型内切葡聚糖酶基因(zeg1和zeg2),经比对zeg1和zeg2相似度为86%,有相似的催化活性区域,经CDD(保守序列数据库)分析,该蛋白归属于糖苷水解酶第5家族,对比PDB(蛋白结构数据库)中第五家族的关键催化残基,预测该两个蛋白的第147位的谷氨酸(E)及199位的色氨酸(W)为该蛋白的关键催化残基。重组zeg1发酵至20 h时达到最高酶活为0.422 IU/mL;重组zeg2发酵至24 h达到最高酶活为0.509 IU/mL。酶学性质研究表明重组zeg1和zeg2的最适温度均为50℃,最适pH值均为5.0。通过CMC-SDSPAGE电泳,复性后染色,测得重组zeg1和zeg2的分子量分别约为55 kD和58 kD。
- 董玉稳汤斌李松张莹莹李祥林
- 关键词：匍枝根霉组成型异源表达
- 匍枝根霉内切葡聚糖酶基因的修饰及表达
- 内切葡聚糖酶是纤维素酶的一种,主要作用于纤维素的非结晶区域,通过随机切断p-1,4-糖苷键,从而降解纤维素形成纤维寡糖、纤维三糖等短链低聚糖。内切葡聚糖酶的活力大小直接影响纤维素的降解效率,其在工业生产生物乙醇和纸浆处理...
- 张莹莹
- 关键词：内切葡聚糖酶定点突变基因工程菌
- 文献传递
